Glavne določbe programa "človeški genom"
ko je ustvaril program "Človeški genom", so bile opredeljene tri glavne cilje tega programa: ustvarjanje natančnih genetskega zemljevida, oblikovanje fizičnega zemljevida človeškega genoma in sekvenciranja( presojo) celotnega človeškega genoma.
Ustvarjanje genetske
genoma zemljevid natančna genska karta bi lahko ustvarili, če v naslednjih dveh pogojev: odkrivanje v genomu veliko število polimorfnih( različnih) genetskih markerjev in prisotnost zadostnega števila družin za analizo povezave med temi oznakami in vzpostavitev njihovega medsebojnega dogovora. Problem genetskih markerjev smo rešili po odkrivanju različnih vrst polimorfizmov DNK.Vrstni red svojem uvodu genska analiza je spoznal dolžine restrikcijskih fragmentov polimorfizma( RFLP za kratka), nato polimorfizma zaradi različnih število tandemskih ponovitev( VNTR-polimorfizem).Vsaka od teh vrst ima svoje prednosti in slabosti, vendar skupaj omogočajo označevanje genom osebe z zelo visoko gostoto.
Tudi prve 4 vrste polimorfizmov so omogočile ustvarjanje genetske slike človeškega genoma. Nastavite relativni položaj markerjev, ki omogočajo zbiranje ali bančno celičnih linij, pridobljenih od vseh članov več sto družin, ki so vključevale najmanj tri generacije. Ta banka celičnih linij je bila ustvarjena v Franciji, da bi proučila polimorfizem v sistemu HLA in je bila zelo uporabna za gensko kartiranje človeškega genoma. Po vsakem kromosom razporejena in najde relativni položaj 10-15 polimorfnih markerjev, ki delajo z zaporednimi označevalci smo izvedli na materiala, pridobljenega iz članov teh družin.
Ustvarjanje fizične zemljevide genoma Da bi ustvarili fizično zemljevid genoma, so morali označiti tudi klonirane fragmenti človeškega genoma. To je bilo storjeno s pomočjo kratkih zaporedij( segmentov DNK z določeno zaporedje), tako imenovane STS, katere lokalizacija kromosoma je natančno znana. STS se zlahka identificirajo s polimerazno verižno reakcijo( PCR).Prejeli več kot 50 000 STS.razpršeni po genomu, in med telesno preslikavo se ugotovi, kadar medsebojna razporeditev fragmentov DNA iz genomske knjižnice, ki se uporabljajo kot označevalce STS prekrivajočih se segmentov DNA.
opredelitev genoma
človeškega nadaljevanju povzemamo glavne rezultate "osnutka" človeškega genoma, ki je, kot je navedeno zgoraj, so bile objavljene v februarski izdaji revije "Narava» v 2001
izraz "osnutek" se nanaša predvsem na dejstvo,da se definicija genom nadaljuje. V povezavi s tem v sedanjem času študij ni mogoče urediti po vrstnem redu in usmeriti veliko majhnih sekvenčnih sekvenc. Nepopolnost zaporedja, seveda, ustvarja težave pri identifikaciji genov dednih bolezni, edinstvenih genov in drugih genetskih struktur.
Treba je opozoriti, da v zadnjem četrtletju 20. stoletja. Sekvenciramo genome 599 virusov in drugih mikroorganizmov ter makroorganizmov( živali).Izkušnje, pridobljene kot rezultat tega dela, so bile v celoti uporabljene pri zaporedju človeškega genoma.
strategija, človeški genom učenja v javnem projekt vključuje pridobitev genskih in fizične zemljevide človeškega genoma, poznejša uvedba teh kartic rezultatov zaporedja posameznih klonov genomske DNK( sekvenciranje "klon klona" strategije).Fizični zemljevid človeškega genoma ima klonsko osnovo, ki jo je leta 1981 razvil Olsonov znanstvenik. Pristop je naslednji. Genom smo razrezali na segmente z delnim prebavo s encimi, specifičnimi za endonukleaze. Te velike segmente DNA so dali v umetne bakterijske kromosome( BAC) in jih vnesli v bakterije, kjer so bili kopirani z vsako delitvijo bakterije. Posledično so nastali kloni identičnih molekul DNA.Takšni kloni, ki pokrivajo človeški genom, bi morali biti približno 20.000
Poleg tega so bile predhodno razvite STS kartice uporabljene za določitev vrstnega reda klonov. Rezultat je fizični zemljevid genomov. Posamezni kloni BAC so bili razrezani na drobce in klonirani. Preučevali smo podklone, ki smo jih dobili zaradi kloniranja fragmentov. Vsakokrat smo določili veliko število identičnih podklonov, da smo zagotovili, da je bil vsak delček izvirnega BAC klona večkrat analiziran in da ni bilo napak. Zaporedja posameznih fragmentov smo združili, da smo dobili vsak zaporedje nukleotidov v vsakem prvem BAC klonu. Nazadnje, zaporedje celotnega genoma smo zbrali z združevanjem zaporedij set BAC, ki so prekrivale celoten genom. Tako ustvarjena karta zaporedja človeškega genoma ima več kot 1000 diskontinuitet. To je lahko posledica več razlogov, zlasti dejstva, da se prvotni kloni BAC ne prekrivajo celotnega genoma, prekrivanje klonov pa je bilo zamujeno zaradi velikih ponovitev v genomu. Zaporedna karta, ki je nastala kot rezultat izvedbe projekta, vključuje zaporedja, ki vsebujejo v povprečju nekaj milijonov nukleotidnih parov v dolžini. Segmenti te dolžine zadostujejo za prekrivanje karte na podlagi klonov na drugih zemljevidih z nižjo ločljivostjo. Položaj na genski karti zaporednih sekvenc je bil določen tudi glede na kartiranje STS.
Na splošno se približno 90% evhromatskih regij genom zaporedno zbira z računalniškimi programi v razširjenih območjih.
Kljub nepopolnosti zaporedja je nedvomno zanimiva vrsta rezultatov, pridobljenih s pomočjo. To velja predvsem za poglobitev pojma organizacije človeškega genoma.