Analyse av restriktionsfragmentlengdepolymorfisme

Den brede bruken av ulike restriksjonsendonukleaser for analyse av kromosomalt DNA viste en stor variasjon i det menneskelige genom. Selv små endringer i kodende og regulatoriske regioner av strukturelle gener kan føre til terminering av syntesen av et bestemt protein eller til tap av dets funksjon i menneskekroppen, som vanligvis påvirker pasientens fenotype. Imidlertid består ca. 90% av det menneskelige genomet av ikke-kodende sekvenser som er mer variable og inneholder mange såkalte neutrale mutasjoner, eller polymorfier, og har ikke fenotypisk ekspresjon. Slike polymorfe steder( loci) brukes i diagnosen arvelige sykdommer som genetiske markører. Polymorfe loci er tilstede i alle kromosomer og er knyttet til et bestemt sted for

genet. Etter å ha bestemt lokaliseringen av det polymorfe locus, er det mulig å fastslå med hvilket genom en mutasjon er assosiert som forårsaket sykdommen i pasienten.

For å isolere polymorfe regioner av DNA, brukes bakterielle enzymer - restriksjonsenzymer, hvorav produktet er restriksjonsseter. Spontane mutasjoner som forekommer i polymorfe områder gjør dem resistente eller omvendt følsomme for virkningen av et bestemt restriksjonsenzym.

Mutasjonsvariabilitet i restriksjonsseter kan detekteres ved å endre lengden av de begrensede DNA-fragmentene ved å separere dem ved hjelp av elektroforese og påfølgende hybridisering med spesifikke DNA-prober. I fravær av restriksjon på et polymorf sted, vil et stort fragment bli detektert på elektroforegrammer, og hvis det foreligger, vil et mindre fragment være til stede. Tilstedeværelsen eller fraværet av et restriksjonssted i de samme loci av homologe kromosomer gjør det mulig å pålidelig merke mutant- og normalgenet og spore overføringen til avkommet. I studien av DNA fra pasienter, i begge kromosomer hvorav et restriksjonssete er tilstede i den polymorfe regionen, vil det bli påvist kort DNA-fragmenter på elektroforen. Hos pasienter homozygote for en mutasjon som modifiserer et polymorf restriksjonssted, vil fragmenter med større lengde bli detektert, og i heterozygote fragmenter vil korte og lange fragmenter bli identifisert.