karyotypering

For studier av kromosomer brukes kortsiktige blodkulturpreparater, samt benmargceller og fibroblastkulturer oftest. Blodet levert til laboratoriet med antikoagulant underkastes sentrifugering for utfelling av røde blodceller, og leukocytter inkuberes i dyrkingsmediet i 2-3 dager. Fytohemag-glutinin legges til blodprøven, da det akselererer agglutinering av erytrocytter og stimulerer delingen av lymfocytter. Den mest hensiktsmessige fasen for studiet av kromosomer er metafasen av mitose, slik at colchicin brukes til å stoppe delingen av lymfocytter på dette stadiet. Legge til dette stoffet i kulturen fører til en økning i andelen celler som er i metafase, det vil si på scenen av cellesyklusen, når kromosomene ses best. Hver kromosomreplikat( produserer sin egen kopi) og etter passende farger er synlig i form av to kromatider festet til sentromerer eller sentral sammenbrudd. Cellene behandles deretter med en hypotonisk natriumkloridløsning, fast og farget.

For farging av kromosomer brukes Romanovsky-Giemsa-fargestoffet, 2% acetaminomin eller 2% acetazarin oftere. De fargelegger kromosomer helt, jevnt( rutinemetoden) og kan brukes til å identifisere numeriske anomalier av menneskelige kromosomer.

For å få et detaljert bilde av strukturen av kromosomer, identifikasjon( bestemmelse) av individuelle kromosomer eller deres segmenter, anvendes forskjellige metoder for differensiell farging. De mest brukte metodene er Giemsa, samt G- og Q-bøyning. Når mikroskopisk prepa-

er rata langs lengden av kromosomet, avsløres en serie farget( heterochromatin) og umalet( eukromatin) bånd. Naturen av tverrstriping, oppnådd på denne måten, gjør det mulig å identifisere hvert kromosom i settet, siden stripesendringen og deres størrelser er strengt individuelle og konstante for hvert par.

rata langs lengden av kromosomet avslører en serie farget( heterochromatin) og umalet( eukromatin) bånd. Naturen av tverrstriping, oppnådd på denne måten, gjør det mulig å identifisere hvert kromosom i settet, siden stripesendringen og deres størrelser er strengt individuelle og konstante for hvert par.

Fig. Skjematiske kart over menneskelige kromosomer med differensial farging av

Fig. Skjematiske kart over menneskelige kromosomer med differensiell farging av

-metafaseplater av individuelle celler fotograferes. Individuelle kromosomer kuttes fra fotografiene og limes på arket i rekkefølge;Et slikt bilde av kromosomer kalles en karyotype.

Bruken av ytterligere fargestoffer, samt nye metoder for å skaffe kromosomale legemidler som tillater lengre forlengelse av kromosomer, øker nøyaktigheten av cytogenetisk diagnostikk.

En spesiell nomenklatur er utviklet for å beskrive den menneskelige karyotypen. Den normale karyotypen til en mann og en kvinne er betegnet henholdsvis 46, XY og 46, XX.I Downs syndrom, karakterisert ved tilstedeværelsen av et ekstra kromosom 21( trisomi 21), er kvinnens karyotype beskrevet som 47, XX 21 + og menn - 47, XY, 21+.I tilfelle av en strukturell anomali av kromosomet, er det nødvendig å indikere en endret lang eller kort arm: bokstaven p angir en kort arm, q en lang arm, og en translokasjon. Når den korte arm av kromosom 5( "katt-skrik" syndromet) blir slettet, blir kvinnekaryotypen beskrevet som 46, XX, 5p-.Moderen til et barn med translokasjon Downs syndrom - en bærer med en balansert translokasjon på 14/21 har en karyotype på 45, XX, t( 14q, 21q).Det translokasjonskromosomet dannes når de lange armer av kromosom 14 og 21 fusjonerer, korte skuldre går tapt.

Hver skulder er delt inn i distrikter, og i sin tur - i segmenter, og de og andre er betegnet med arabiske tall. Kromosomens sentromere er utgangspunktet for telling av regioner og segmenter.

Således brukes fire markører for kromosomtopografi: kromosomnummer, skuldersymbol, arealnummer og segmentnummer i en gitt region. Platen 6p21.3 betyr for eksempel at det er et kromosom av det 6. paret, dets korte skulder, område 21, segment 3. Det er flere symboler, spesielt pter - enden av den korte armen, qter - enden av den lange armen.

Den cytogenetiske undersøkelsesmetoden gjør det mulig å oppdage deletjoner og andre endringer i kromosomer, bare i størrelsesorden ca. 1 million baser( nukleotider).