Pagrindinės programos "žmogaus genomo" nuostatos
kai jis sukūrė programą "Žmogaus genomo", buvo nustatytos trys pagrindinės šios programos tikslai: tikslios genetinės žemėlapyje kūrimą, fizinio žemėlapyje žmogaus genomo ir sekos( nustatymo) visą žmogaus genomo kūrimą.
kūrimas genetinę
genomo žemėlapį tiksli genetinis žemėlapis galėtų būti sukurta, jei iš šių dviejų sąlygų: aptikimo į daugelio polimorfines( įvairių) genetinių markerių ir pakankamo skaičiaus šeimų šarnyro analizę tarp šių žymenų ir jų tarpusavio susitarimą įsteigti akivaizdoje genomą.Genetinių žymenų problema buvo išspręsta nustatant skirtingų tipų DNR polimorfizmus. Jų įvedimo į genetinę analizę siekiant pirmą kartą buvo aptikta restrikcijos fragmentų ilgio polimorfizmo( RFLP trumpai), po to polimorfizmas dėl įvairaus skaičiaus tandeminių kartojasi( VNTR-polimorfizmo).Kiekviena iš šių rūšių turi savo privalumus ir trūkumus, tačiau visi kartu leidžia ženklinti labai didelio tankio žmogaus genomą.
Net pirmieji 4 polimorfizmo tipai leido sukurti genetinį žmogaus genomo vaizdą.Nustatykite santykinę žymeklių padėtį, leidžiančią surinkti ląstelių linijas iš visų kelių šimtų šeimų narių, kuriose dalyvavo ne mažiau kaip trys kartos.Šis ląstelių linijų bankas buvo sukurtas Prancūzijoje, siekiant ištirti polimorfizmą HLA sistemoje ir buvo labai naudingas žmogaus genomo genetiniam kartografavimui. Po kiekvieno chromosomos buvo kartografuoti ir nustatė, santykinę poziciją 10-15 polimorfinių žymenų, darbo su paeiliui žymenų buvo atliktas medžiagos, gautos iš šių šeimos nariams.
kūrimas fizinius žemėlapius genomo Siekiant sukurti fizinį žemėlapį genomo, klonuotas fragmentai žmogaus genomo taip pat turėjo pažymėti. Tai buvo padaryta trumpų sekų( DNR segmentų su tam tikra seka) pagalba, taip vadinamos STS, kurių chromosomų lokalizacija yra tiksliai žinoma. SST lengvai identifikuojama polimerazės grandinine reakcija( PGR).Gauta daugiau nei 50 000 STS.išsibarsčiusios visoje genomo, ir per fizinio žemėlapių yra nustatytas, jeigu tarpusavio išdėstymas DNR fragmentų iš genomo bibliotekų, naudojamų kaip STS žymenų sutampančių DNR segmentus.
apibrėžimas žmogaus genomo
Žemiau mes apibendrinti pagrindinius rezultatus žmogaus genomo, kuris, kaip minėta, buvo paskelbtas vasario žurnale «Gamta» 2001
laikotarpiu į "versija projekto" projektas ", pirmiausia reiškia tai,kad genomo apibrėžimas tęsiasi. Atsižvelgiant į tai, šiuo metu tyrimai negali būti rengiami ir orientuojasi į daugybę mažų sekvencinių sekų.Šios sekos neišsamumas, žinoma, sukuria problemų identifikuoti paveldimų ligų genus, unikalius genus ir kitas genetines struktūras.
Reikia pažymėti, kad per pastarąjį ketvirtį XX a.599 virusų ir kitų mikroorganizmų, taip pat makroorganizmų( gyvūnų) genomai buvo sekvenuoti. Patirtis, įgyta atlikus šį darbą, buvo visapusiškai naudojama žmogaus genomo seka.
žmogaus genomo mokymosi strategija viešajame projekto apima gauti genetinių ir fizines žemėlapius žmogaus genomo, vėlesnis Įvadas Šių kortelių rezultatų sekos atskirus klonus genomo DNR( sekos "klonas klonas" strategija).Fizinis žemėlapis žmogaus genomo yra klonų pagrindas, kuris buvo sukurtas mokslininkų Olson 1981 metais požiūris yra taip. Genome buvo supjaustytas segmentais daliniu virškinimu fermentams būdingais endonukleaziais.Šie dideli DNR segmentai buvo sudėti į bakterijų dirbtinio chromosomos( BAC) ir įvesta į bakterijų, kur jie yra nukopijuoti ne kiekvieną kvadratą bakterijų.Dėl to susidarė identiškų DNR molekulių klonai. Tokie klonai, apimantys žmogaus genomą, turėtų būti maždaug 20000.
Be to, klonų tvarkos nustatymui buvo naudojamos anksčiau sukurtos STS kortelės. Rezultatas yra fizinis genomo žemėlapis. Individualūs BAK klonai buvo supjaustyti į fragmentus ir klonuoti. Išnagrinėti subklonai, gauti dėl klonavimo fragmentų.Kiekvieną kartą buvo nustatytas didelis skaičius identiškų subklonų, siekiant užtikrinti, kad kiekvienas originalaus BAK klono fragmentas buvo analizuojamas keletą kartų ir jokių klaidų nepadaryta. Individualių fragmentų sekos buvo sujungtos, siekiant gauti nukleotidų seką kiekviename pradiniame BAK klone. Galiausiai, viso genomo seka buvo surinkta derinant BAC rinkinio sekas, kurios apėmė visą genomą.Taigi sukurtas žmogaus genomo sekos žemėlapis turi daugiau nei 1000 neatitikimų.Tai gali būti dėl daugelio priežasčių, ypač dėl to, kad pradiniai BAK klonai neatitiko viso genomo, o klonai buvo dubliuojami dėl didelių genomo pakartojimų.Projekto įgyvendinimo metu sukurtas nuoseklus žemėlapis apima sekas, kuriose vidutiniškai yra kelių milijonų nukleotidų porų ilgio. Tokio ilgio segmentai yra pakankami, kad žemėlapį būtų galima įklijuoti, remiantis klonais kituose mažesnės skiriamosios gebos žemėlapiuose. Padėtis dėl sekvencinių sekų genetinio žemėlapio taip pat buvo nustatytas atsižvelgiant į STS kartografavimą.
Apskritai apie 90% genomo euchromatinių regionų yra nuosekliai ir kaupiami kompiuterinėmis programomis išplėstose srityse.
Nepaisant to, kad seka buvo neišsamios, jau pasiekta daugybė rezultatų, gautų su jos pagalba, yra neabejotinas. Tai visų pirma reiškia gilinti žmogaus genomo organizavimo sampratą.