Reação em cadeia da polimerase

PCR é uma nova conquista em genética molecular, utilizada para amplificação de DNA e permite a rápida expansão da região de DNA

específica( ou seja, qualquer gene de interesse) in vitro mais de 200,000 vezes. Para realizar a reação, é suficiente ter o material de DNA de uma célula;a quantidade de DNA amplificado por PCR é tão grande que este DNA pode simplesmente ser corado( o uso de sondas radioativas após a eletroforese não é necessário).Um pré-requisito para a realização de PCR é o conhecimento da sequência de nucleótidos da região de DNA amplificada para a seleção correta de iniciadores artificialmente sintetizados.

Atualmente, o PCR é um processo que ocorre em um único tubo e consiste em ciclos repetidos de amplificação( duplicação, cópia) da sequência específica da molécula de DNA, a fim de obter um número suficientemente grande de cópias que podem ser identificadas por eletroforese. Um dos principais componentes da reação é "primers" - oligonucleótidos sintéticos, consistindo de 20-30 bases, complementares a "sites"( seções) de recozimento( anexo) no local identificado do DNA modelo.

PCR é executado automaticamente em um termostato programável - termociclador( termociclador).O ciclo de três passos, que resulta em réplicas da porção identificável do DNA modelo, é repetido 30-50 vezes de acordo com o programa predefinido do termociclador. No primeiro ciclo, os oligopramers se hibridam com o DNA modelo original, e depois( nos ciclos subseqüentes) e com as moléculas de DNA recentemente sintetizadas à medida que se acumulam na mistura de reação. No último caso, a síntese de ADN termina não devido a uma mudança no regime de temperatura, mas ao atingir o limite da DNA polimerase da região amplificada, que determina o tamanho da região de DNA recentemente sintetizada dentro de um nucleótido.

Como método de detecção das moléculas de DNA obtidas, é utilizada eletroforese, através da qual o material amplificado é dividido de acordo com o tamanho dos amplicões( produtos de amplificação).

Com a ajuda da PCR, é possível investigar diretamente os locais de localização de mutações suspeitas ou locais polimórficos e também estudar a presença de quaisquer outras características específicas do DNA.