Análise do polimorfismo do comprimento do fragmento de restrição

O amplo uso de várias endonucleases de restrição para a análise do DNA cromossômico revelou uma enorme variabilidade no genoma humano. Mesmo pequenas mudanças nas regiões de codificação e regulação dos genes estruturais podem levar ao término da síntese de uma certa proteína ou à perda de sua função no corpo humano, que geralmente afeta o fenótipo do paciente. No entanto, aproximadamente 90% do genoma humano consiste em sequências não codificantes que são mais variáveis ​​e contêm muitas chamadas mutações neutras, ou polimorfismos, e não possuem uma expressão fenotípica. Tais sítios polimórficos( loci) são utilizados no diagnóstico de doenças hereditárias como marcadores genéticos. Loci polimórficos estão presentes em todos os cromossomos e estão ligados a um site específico do gene

.Tendo determinado a localização do locus polimórfico, é possível estabelecer com qual genoma está associada uma mutação que causou a doença no paciente.

Para isolar as regiões polimórficas do DNA, são utilizadas enzimas bacterianas - enzimas de restrição, cujo produto são locais de restrição. As mutações espontâneas que ocorrem em locais polimórficos os tornam resistentes ou, inversamente, são sensíveis à ação de uma enzima de restrição específica.

A variabilidade mutacional em locais de restrição pode ser detectada alterando o comprimento dos fragmentos de DNA restritos, separando-os usando eletroforese e subseqüente hibridação com sondas de DNA específicas. Na ausência de restrição em um local polimórfico, um grande fragmento será detectado nos eletroforégramas, e se presente, um fragmento menor estará presente. A presença ou ausência de um local de restrição nos loci idênticos de cromossomos homólogos permite conferir de forma confiável o gene mutante e normal e rastrear sua transmissão para a prole. Assim, no estudo de DNA de pacientes, em ambos os cromossomos dos quais um site de restrição está presente na região polimórfica, fragmentos de DNA curtos serão detectados no eletroforês. Os pacientes homozigóticos para a mutação, que altera um local de restrição polimórficos serão identificados fragmentos de maior comprimento e em heterozigotos - curto e fragmentos longos.