Investigação de enzimas e isoenzimas
As enzimas são proteínas específicas que cumprem o papel de catalisadores biológicos no organismo. As enzimas estão contidas em todas as células do corpo, onde sua concentração é muito maior do que no plasma sanguíneo. O
sérico de sangue, cuja composição enzimática é relativamente constante, é mais frequentemente utilizado como objeto de pesquisa. A atividade normal das enzimas no soro reflete a relação entre a biossíntese e a liberação de enzimas( com a renovação celular usual), bem como a depuração da corrente sanguínea. Um aumento na taxa de renovação das enzimas, o dano às células geralmente leva a um aumento na atividade das enzimas no soro. No soro de sangue, distinguem-se três grupos de enzimas: celular, secretor e excremento.
As enzimas celulares são divididas em dois grupos, dependendo da localização nos tecidos:
■ enzimas não específicas que catalisam reações de troca comuns a todos os tecidos e são encontradas na maioria dos órgãos e tecidos;
■ enzimas específicas de órgãos ou indicadoras específicas para um tipo de tecido específico apenas.
A atividade sérica das enzimas celulares é baixa ou inexistente. Nos processos patológicos, a atividade das enzimas deste grupo no soro depende da taxa de liberação das células, que por sua vez é determinada pela taxa e grau de seu dano.
As enzimas secretoras( ceruloplasmina, pseudo-colinesterase, lipoproteína lipase) vão diretamente ao plasma sanguíneo e desempenham funções específicas nele. Essas enzimas são sintetizadas no fígado e são constantemente liberadas para o plasma. A sua actividade no soro é mais elevada do que nas células ou nos tecidos. Na prática clínica, eles são de interesse quando sua atividade no soro sanguíneo se torna menor do que o normal devido à função hepática prejudicada.
As enzimas excretoras são formadas pelo sistema digestivo( pâncreas, mucosa intestinal, fígado, endotélio dos canais biliares).Estes incluem a-amilase, lipase, fosfatase alcalina, etc. Normalmente, sua atividade sérica é baixa e constante. No entanto, em patologia, quando qualquer uma das vias usuais de excreção é bloqueada, a atividade dessas enzimas no soro aumenta significativamente.
A atividade medida das enzimas pode ser devido à presença de propriedades moleculares muito semelhantes das enzimas, que são muito semelhantes nas propriedades, mas diferem uma da outra. Estas várias formas são chamadas isoenzimas. A investigação das isoenzimas na prática clínica é de interesse quando as isoenzimas individuais são formadas em diferentes tecidos( por exemplo, várias isoenzimas LDH predominam no coração e no fígado).
Para a quantificação da atividade enzimática, a Comissão de Enzimas da International Biochemical Union recomendou uma unidade internacional padrão( UI).A unidade de atividade de qualquer enzima é tomada como sua quantidade, que em condições ideais catalisa a conversão de 1 μmol de substrato por minuto( μmol / min).
A atividade da enzima é avaliada pela taxa de reação catalisada a uma certa temperatura e pH do meio, a concentração do substrato. Portanto, ao determinar a atividade das enzimas, as mesmas condições devem ser rigorosamente observadas.
A reação enzimática é sensível às mudanças de temperatura. Geralmente, é feito a uma temperatura dentro da faixa
de 25-40 ° C, mas em diferentes temperaturas, o pH ideal, tampão, substrato e outros parâmetros são diferentes. A atividade máxima da maioria das enzimas no corpo humano é observada a uma temperatura de cerca de 37 ° C.Portanto, com o objetivo de padronização internacional, medições de atividade enzimática são realizadas a uma determinada temperatura. Abaixo os valores normais da atividade enzimática são dados para uma temperatura de 37 ° C.
A investigação das enzimas é utilizada na prática clínica para resolver vários problemas: diagnóstico, diagnóstico diferencial, avaliação do curso da doença, determinação da efetividade da terapia, grau de recuperação e prognóstico da doença. São conhecidos três tipos de alterações enzimáticas no caso da patologia: hiperferência-mia - aumento da atividade enzimática em comparação com a norma, hipofermentação - sua diminuição, disfermentação - a aparência de enzimas no sangue, normalmente não detectável.