Polymerase kjedereaksjon ved diagnose av smittsomme sykdommer

PCR - en av de fremgangsmåter for DNA-diagnostikk som tillater å øke antallet kopier av en detekterbar del av genomet( DNA) av bakterier eller virus er en million ganger ved hjelp av en DNA-polymerase-enzym. Segmentet av nukleinsyren som er testet for et gitt genom, multipliseres( amplifiseres) mange ganger, hvilket gjør det mulig å identifisere det. Først, et DNA-molekyl av bakterier eller virus ved å varme delt i to kjeder, og deretter i nærvær av de syntetiserte DNA-primere( sekvens av nukleotider som er spesifikke for den definerte genomisk) får binde dem sammen med komplementære strekninger av DNA, syntetiseres den andre tråd av nukleinsyren etter hver primer i nærvær av en termostabil DNA-polymerase. To DNA-molekyler oppnås. Prosessen gjentas mange ganger. For diagnose er en molekyl av DNA, det vil si en bakterie eller en viral partikkel, tilstrekkelig. Omsetning av et ytterligere trinn - DNA-syntese på den RNA-molekyl ved hjelp av enzymet revers transkriptase - har gjort det mulig å teste RNA-virus slik som HCV virus. PCR er en tre-trinns prosess, gjentatt syklisk: denaturering, primer-annealing, DNA-syntese( polymerisering).Den syntetiserte mengden av DNA er identifisert ved ELISA eller ved elektroforese.

PCR kan bruke en rekke biologiske materialer - serum eller blodplasma, skraping fra urinrøret, biopsi, pleurvæske, cerebrospinalvæske etc. Den første PCR ble brukt for diagnose av infeksjonssykdommer, slik som HBV, HCV, HBV, CMV-infeksjon, infektiøs seksuelt overførbar infeksjon( gonoré, søppel diynaya, Myco plasma, ureaplasmal infeksjon), tuberkulose, HIV og så videre.d.

PCR fordel i diagnosen av smittsomme sykdommer i forhold til andre metoder studier er som følger:

■ infeksiøst middel kan påvises i enhver biologisk miljø av organismen, også de materialer som oppnås ved biopsi;

■ Diagnose av smittsomme sykdommer i de tidligste stadiene av sykdommen;

■ kvantitativ evaluering av resultatene av studier( hvor mange virus eller bakterier er inneholdt i det undersøkte materialet);

■ høy følsomhet av metoden;f.eks sensitiviteten av PCR for å påvise HBV viral DNA i blodet er 0,001 pg / ml( ca 4h102 kopier / ml), mens følsomheten for en DNA-hybridisering ved anvendelse av metode forgrenede prober - 2,1 pg / ml( ca 7h105 kopier / ml).