Polimerāzes ķēdes reakcija

PCR - Nesenā attīstība molekulārās ģenētikas, ko izmanto, lai pastiprinātu DNS un ļauj ātri izplatīt in vitro

īpašu gabals DNS( piemēram, kāds gēns) ir vairāk nekā 200 000 reižu. Lai veiktu reakciju, pietiek ar vienu šūnu DNS materiālu;skaits PCR pavairoto DNS ir tik liela, ka DNS var vienkārši krāsot( izmantošana radioaktīvām zondes pēc elektroforēzi nav nepieciešama).Nepieciešams nosacījums PCR - informāciju par nukleotīdu secību paplašinātā reģionā DNS uz pareizu izvēli mākslīgi sintezēta gruntēšanai-Mers.

Pašlaik PĶR ir process, kas notiek vienā caurulē un sastāv no atkārtotas ciklu palielināšanas( reprodukcijas, kopija) par īpašiem DNS secības, lai iegūtu pietiekami lielu daudzumu kopiju, ko var noteikt ar elektroforēzi. Viens no galvenajiem komponentiem reakcijas - "gruntēšanai" - sintētiskais oligonukleoti-dy, kas sastāv no 20-30 bāzes papildu "Vietnes"( apgabali) apdedzināšanai( savienojuma) uz identificējamu daļu DNS matricas.

PCR darbojas automātiski programmējamā termostatā - termociklu( termociklu).Trīs soļu cikls, kurā kopijas ir iegūtas identificējams daļu no DNS matricas, tika atkārtots 30-50 reizes saskaņā ar iepriekšnoteiktu siltuma cikla programmas-ra. Pirmajā ciklā oligoprimer krustoties ar sākotnējo DNS matricas, un pēc tam( arī nākošajos ciklos) un no jauna sintezēto DNS molekulu, kā to uzkrāšanos reakcijas maisījuma. Pēdējā gadījumā, DNS sintēze nebeidzas sakarā ar temperatūras izmaiņām, un sasniedzot DNS polimerāzes-papildināts vannogo ierobežojošā porciju, kas nosaka lielumu no jauna sintezēto DNS reģionu, lai vienā nukleotīdu.

Kā iegūto DNS molekulu noteikšanas metodi tiek izmantota elektroforēze, ar kuras palīdzību pastiprinātais materiāls tiek sadalīts atkarībā no amplikonu lieluma( amplifikācijas produkti).

Izmantojot PĶR var tieši pārbaudīt lokalizācijas iedomāts mutāciju vai polimorfo vietu, kā arī, lai pētītu klātbūtni jebkuras citas DNS specifiskām funkcijām.