karyotyping
Za proučavanje kromosoma najčešće se koriste kratkotrajni pripravci krvne kulture, kao i stanice koštane srži i kultura fibroblasta. Krv isporučena u laboratorij s antikoagulansom podvrgava se centrifugiranju za precipitaciju crvenih krvnih stanica, a leukociti se inkubiraju u mediju kulture 2-3 dana. Fitohemag-glutinin se dodaje uzorku krvi, jer ubrzava aglutinaciju eritrocita i stimulira podjelu limfocita. Najprikladnija faza za proučavanje kromosoma je metafaza mitoze, pa se kolhicin koristi za zaustavljanje podjele limfocita u ovoj fazi. Dodavanje ovog lijeka u kulturu dovodi do povećanja udjela stanica koje su u metafazi, tj. U fazi staničnog ciklusa, kada se najbolje vide kromosomi. Svaki kromosom replikira( proizvodi vlastitu kopiju) i nakon prikladnog bojanja vidljivo je u obliku dva kromatida pričvršćena na centromere ili središnje suženje. Stanice se zatim tretiraju hipotoničnom otopinom natrijevog klorida, fiksiraju i oboje.
Za bojanje kromosoma češće se koriste Romanovsky-Giemsa boja, 2% acetaminomina ili 2% acetazarina. Oni kljucaju kromosome u potpunosti, ravnomjerno( rutinska metoda) i mogu se koristiti za identifikaciju numeričkih anomalija ljudskih kromosoma.
Da bi se dobila detaljna slika strukture kromosoma, identifikacija( određivanje) pojedinačnih kromosoma ili njihovih segmenata, koriste se različite metode diferencijalnog bojenja. Najčešće korištene metode su Giemsa, kao i G- i Q-savijanje. Kada mikroskopija preparativna
rata duž kromosoma otkriva niz boji( heterokromatina) i nelakiranih( euchromatin) bendova. Priroda poprečne šavova, dobivena na ovaj način, omogućuje identificiranje svakog kromosoma u setu, budući da izmjene pruga i njihove veličine su strogo individualne i konstantne za svaki par.
rata duž duljine kromosoma otkriva niz boja( heterokromatina) i neobojenih( eukromatina) bendova. Priroda poprečne šavova, dobivena na ovaj način, omogućuje identificiranje svakog kromosoma u setu, budući da izmjene pruga i njihove veličine su strogo individualne i konstantne za svaki par.
Sl. Shematski karte ljudskih kromosoma s diferencijalnom bojom
Sl. Shematski karte ljudskih kromosoma s diferencijalnom bojom
Metafazne ploče pojedinačnih stanica su fotografirane. Pojedinačni kromosomi su izrezani iz fotografija i zalijepljeni na list papira kako bi;takva slika kromosoma zove se kariotip. Primjena
dodatne bojanja, kao i nove postupke za pripremu pripravaka, čime kromosomskih protežu kromosoma duljine, znatno se poveća točnost citogenetskog dijagnoze.
Razvijen je posebna nomenklatura koja opisuje ljudski kariotip. Normalan kariotip muškarca i žene određen je kao 46, XY i 46, odnosno XX.Kada Downov sindrom karakteriziran prisutnošću viška kromosoma 21( 21), trisomije žena opisuje kao kariotipa 47, XX + 21 i muškaraca - 47, XY, 21+.U prisutnosti kromosoma strukturnim nepravilnostima mora navesti promijenjenu dugo ili kratko rame sa slovom p su kratki krak, q - duge ruke, t - translokacija. Stoga, kada je kratka ruka kromosoma 5( sindrom "mačka-krik") izbrisan, ženski kariotip opisan je kao 46, XX, 5p-.Majka djeteta s translociranim Downovim sindromom - nosač uravnotežene translokacije 14/21 ima kariotip od 45, XX, t( 14q, 21q).Kromosom translokacije nastaje kada se dugi krakovi kromosoma 14 i 21 spoji, kratke ramene su izgubljene.
Svako je rame podijeljeno na četvrti, a oni zauzvrat - u segmente, a oni i drugi označeni su arapskim brojevima. Centromar kromosoma je polazna točka za brojanje regija i segmenata.
Tako se za kromosomsku topografiju koriste četiri markera: broj kromosoma, simbol ramena, broj područja i broj segmenta unutar određene regije. Na primjer, 6p21.3 zapis znači da se radi o 6. kromosomskom paru, njegovu kratkom kraku, površine 21, segment 3. Postoji više izbornih likovi, posebno pter - na kraju kratkog kraka, qter - na kraju duge ruke.
Citogenetska metoda istraživanja omogućava otkrivanje brisanja i drugih promjena u kromosomima samo u veličini od približno 1 milijun baza( nukleotida).