Programmi peamised sätted "inimese genoom"
kui ta lõi programmi "Inimese Genoomi", kolm peamist eesmärki on see programm on tuvastatud: loomise täpne geneetiline kaart, loomine füüsilise kaardi inimgenoomi ja järjestamine( määramisel) kogu inimese genoomi.
loomine geneetilise
genoomi kaardilt täpne geneetiline kaart on võimalik luua, kui järgmised kaks tingimust: avastamiseks genoomis suur hulk polümorfset( mitmekülgne) geneetilisi markereid ja olemasolu piisaval arvul perede aheldumisanalüüsi vahel nende markerite ja nende vastastikuste paigutus. Geneetiliste markerite probleem lahendati pärast erinevat tüüpi DNA polümorfismide avastamist. Järjekorras sissejuhatuses geneetilist analüüsi avastati esimesena restriktsioonifragmendi pikkuse polümorfismi( RFLP lühikese), siis polümorfismi tõttu erineva arvu tandemkordusest( VNTR-polümorfismi).Kõik need liigid on oma plussid ja miinused, kuid kõik nad koos võimaldavad märgistada inimgenoomi väga suure tihedusega.
Isegi esimesed 4 tüüpi polümorfismid võimaldasid genoomi genoomi luua. Määra suhteline positsioon markerid lubatud kogumise või pank, saadud rakuliinid kõik liikmed paarsada peredele, mis sisaldas vähemalt kolm põlvkonda. See pank rakuliine loodi Prantsusmaa uurimiseks polümorfismi HLA süsteemi ja väga kasulikud geneetilise kaardistamisega inimgenoomi. Pärast iga kromosoomi kaardistati ning leidis suhteline asend 10-15 polümorfsusmarkereid koostöös järjestikuste markerid viidi läbi saadud materjal kohal nende perekondi.
loomine füüsilise kaardid genoomi Et luua füüsilise kaardi genoomi kloonitud fragmentide inimgenoomi oli ka tähistada. Seda tehti otse lühikeste järjestuste( DNA piirkondi juba määratletud järjestus), nn STS, kromosoomi lokaliseerimine mis täpselt teada. STS on kergesti identifitseeritud polümeraasi ahelreaktsiooniga( PCR).Saanud üle 50 000 STS.hajutatud genoomi ning füüsilise kaardistamise luuakse siis vastastikuse asendi DNA fragmentide genoomide kasutati STS markerid kattuvate DNA segmendid.
määratlus inimgenoomi
Allpool kokku peamised tulemused "tööversiooni" inimgenoomi, mis, nagu eespool märgitud, olid veebruaris avaldatud ajakirja «Loodus» 2001.
Termin "eelnõu" viitab peamiselt asjaoluet genoomi määratlus jätkub. Seega, hetkel ei ole võimalik õppida, et positsioneerida ja Orient paljude väikeste sekveneeritud järjekorras. Mittetäielik sekveneerimise looduslikult tekitab probleeme veel selgitada geenide pärilikke haigusi, unikaalne geenide ja muude geneetiliste struktuure.
Tuleb märkida, et 20. sajandi viimase kvartali jooksul.599-viiruste ja teiste mikroorganismide genoomid ning makroorganismid( loomad) sekveneeriti. Selle töö tulemusel omandatud kogemus kasutati täielikult inimgenoomi järjestamiseks.
inimgenoomi õppe strateegia avalikus projekt hõlmab saamise geneetilise ja füüsilise kaardid inimgenoomi Järgnenud neist kaartidest sekveneerimise tulemused üksikute kloonid genoomse DNA( sekveneerimise "kloon kloon" strateegia).Füüsiline kaart inimgenoomi on kloonaalsest alusel, mille on välja töötanud teadlased Olson 1981. lähenemine on järgmine. Genoom lõigati segmentideks osalise seedimisega ensüümide spetsiifiliste endonukleaasidega. Need suured DNA segmendid pandi bakterite tehiskromosoomi( BAC) ja sisestatakse bakterid, kus nad on kopeeritud igal jagunemise bakterid. Selle tulemusel moodustasid identsete DNA molekulide kloonid. Sellised inimese genoomi katvad kloonid peaksid olema ligikaudu 20000.
Lisaks loomise järjekorras kasutatud kloonide varem töötanud STS kaardil. Tulemuseks on genoomi füüsiline kaart.Üksikud BAC kloonid lõigati fragmentidesse ja klooniti. Uuriti kloonimisfragmentide tulemusel saadud subkloone. Iga kord määratakse suure hulga identsete Alakloonide olla kindel, et iga tükk originaal BAC kloonide analüüsitud mitu korda ja ei tohi vigu. Sekveneerimine üksikute fragmentide ühendati saamiseks nukleotiidide järjestust iga allikas BAC kloon. Lõpuks Ülegenoomilised sekveneerimise koguti SAC ühendi järjestusi, mis hõlmab kogu genoomi. Seega kaardi loonud inimese genoomi sekveneerimine on 1000 lüngad. See võib olla tingitud mitmel põhjusel, eelkõige asjaolu, et esialgne BAC kloonide katavad kogu genoomi, samuti kattumine kloonid puudu olemasolu tõttu suurte kordustega genoomis. Tulemusena loodud projekti sekveneerimise kaart sisaldab järjestusi, mis sisaldavad keskmiselt paar miljonit aluspaari. Segmentide sellise pikkusega piisavalt kaardistada põhineb kloonid kehtestada teiste kaarte madalama resolutsiooni. Paiknemine geneetilise kaart sekveneeriti järjestus on defineeritud kui suhteliselt kaardistatud STS.
Üldiselt järjestati ja kokkupandud abiga arvutiprogrammide venib umbes 90% euchromatin piirkondades genoomi.
Vaatamata puudulikkus sekveneerimine, mitmed saadud abiga tulemused on praegu suurt huvi. See kehtib eelkõige süvendamine ideid korralduse inimgenoomi.