Karyotypisierung
Für die Untersuchung von Chromosomen werden am häufigsten Kurzzeit-Blutkulturpräparate sowie Knochenmarkszellen und Fibroblastenkulturen verwendet. Das Blut, das mit Antikoagulans an das Labor geliefert wird, wird einer Zentrifugation zur Ausfällung von roten Blutzellen unterzogen, und Leukozyten werden in dem Kulturmedium für 2-3 Tage inkubiert. Phytohemag-Glutinin wird der Blutprobe hinzugefügt, da es die Agglutination der Erythrozyten beschleunigt und die Lymphozyten-Teilung stimuliert. Die am besten geeignete Phase für die Untersuchung von Chromosomen ist die Metaphase der Mitose, daher wird Colchicin verwendet, um die Teilung von Lymphozyten in diesem Stadium zu stoppen. Das Hinzufügen dieses Arzneimittels zu der Kultur führt zu einem Anstieg des Anteils von Zellen, die in der Metaphase sind, das heißt zu diesem Zeitpunkt im Zellzyklus, wenn die Chromosomen am besten gesehen werden. Jedes Chromosom repliziert( erzeugt seine eigene Kopie) und ist nach entsprechender Färbung in Form von zwei Chromatiden sichtbar, die an dem Zentromer oder der zentralen Verengung angebracht sind. Die Zellen werden dann mit einer hypotonischen Natriumchloridlösung behandelt, fixiert und angefärbt.
Zum Färben von Chromosomen werden der Romanovsky-Giemsa-Farbstoff, 2% Acetaminomin oder 2% Acetazarin häufiger verwendet. Sie färben Chromosomen vollständig, einheitlich( die Routine-Methode) und können verwendet werden, um numerische Anomalien von menschlichen Chromosomen zu identifizieren.
Um ein detailliertes Bild von der Struktur der Chromosomen, der Identifizierung( Bestimmung) einzelner Chromosomen oder ihrer Segmente zu erhalten, werden verschiedene Methoden der Differentialfärbung verwendet. Die am häufigsten verwendeten Methoden sind Giemsa sowie G- und Q-Biegung. Wenn Mikroskopie präparativen
rata entlang der Länge des Chromosoms offenbart eine Reihe von farbigen( Heterochromatin) und unlackierten( Euchromatin) Bands. Zeichenquer ischerchennos whith so erhaltenen ermöglicht jedes Chromosoms in dem Satz zu identifizieren, da der Wechsel von Bändern und ihren Abmessungen streng individuell ist und konstant für jedes Paar.
rata entlang der Länge des Chromosoms zeigt eine Reihe von gefärbten( Heterochromatin) und unlackierten( Euchromatin) Banden. Zeichenquer ischerchennos whith so erhaltenen ermöglicht jedes Chromosoms in dem Satz zu identifizieren, da der Wechsel von Bändern und ihren Abmessungen streng individuell ist und konstant für jedes Paar.
Schematische Karten menschlicher Chromosomen mit unterschiedlicher Färbung von
.Schematische Karten von menschlichen Chromosomen mit unterschiedlicher Farbe von
Metaphase-Platten einzelner Zellen werden fotografiert. Einzelne Chromosomen werden aus den Fotografien ausgeschnitten und in Reihenfolge auf das Blatt Papier geklebt;Ein solches Bild von Chromosomen wird als Karyotyp bezeichnet. Anwendung
zusätzliche Färbung, sowie neue Verfahren zur Herstellung von chromosomalen Präparationen, wodurch Ausdehnung des Chromosoms in der Länge, erhöhen signifikant die Genauigkeit der zytogenetischen Diagnostik.
Eine spezielle Nomenklatur wurde entwickelt, um den menschlichen Karyotyp zu beschreiben. Der normale Karyotyp eines Mannes und einer Frau wird als 46, XY bzw. 46, XX bezeichnet. Wenn die Down-Syndrom durch das Vorhandensein einer zusätzlichen Chromosoms 21( Trisomie 21), dadurch gekennzeichnet, eine Frau als 47 Karyotyp beschrieben, XX + 21 und die Männer - 47, XY, 21+.In Gegenwart des Chromosoms struktureller Anomalien müssen eine veränderte lange oder kurze Schulter mit dem Buchstaben p kurzen Arm, q angegeben - die langen Arme, t - Translokation. Wenn der kurze Arm von Chromosom 5( das "Katzenschrei" -Syndrom) gelöscht wird, wird der weibliche Karyotyp daher als 46, XX, 5p- beschrieben. Die Mutter des Kindes mit Down-Syndrom Translokation - Träger hat ein balancierten Translokation 14/21 Karyotyp 45, XX, t( 14q; 21q).Das Translokationschromosom wird gebildet, wenn die langen Arme von Chromosom 14 und 21 zusammenlaufen, kurze Schultern gehen verloren.
Jede Schulter ist in Bezirke unterteilt, und sie wiederum - in Segmente, und diese und andere sind mit arabischen Ziffern bezeichnet. Das Zentromer des Chromosoms ist der Ausgangspunkt für das Zählen von Regionen und Segmenten.
Somit werden vier Marker für die Chromosomentopographie verwendet: Chromosomennummer, Schultersymbol, Bereichsnummer und Segmentnummer innerhalb einer bestimmten Region. Zum Beispiel bedeutet 6p21.3 Datensatz, dass wir über das 6.e Chromosomenpaar sprechen, seinen kurzen Arm, Bereich 21, Segment 3. Es gibt mehr optionalen Zeichen, insbesondere pitel - Ende des kurzen Arms, qter - Ende des langen Arms. Zytogenetischer Studien
Methode ermöglicht Löschungen und andere Veränderungen in den Chromosomen nur eine Größe von ca. 1 Million Basen( Nukleotide) zu erfassen.