Påvisning af hepatitis C-viruset
HCV i materialet er normalt fraværende.
modsætning HCV serologiske diagnostiske metoder, hvor påvisning af antistoffer mod HCV, PCR kan påvise tilstedeværelsen af HCV-RNA og gælder kvantificere dets koncentration i testen mate
le. Testen har specifik specificitet og høj følsomhed: ti HCV RNA molekyler i testmaterialet er tilstrækkelige til dets påvisning. Påvisning af antistoffer mod HCV bekræfter kun til, patientens infektion, men giver ikke en indikation af aktiv infektion( viruset til replikation) og prognosen af sygdommen. Hertil kommer, at antistoffer mod HCV påvist i blodet hos patienter med akut og kronisk hepatitis, samt i de patienter, der er syge og nyttiggøres, og ofte AT i blodet synes blot et par måneder efter debut af klinisk sygdom, hvilket gør det vanskeligt at diagnosticere. Detektion af HCV i blodet ved hjælp af PCR er en mere informativ diagnostisk metode. Identifikation af HCV-RNA ved PCR bevis for viræmi, giver en indikation af virusreplikation i kroppen og er et af kriterierne for effektiviteten af antiviral terapi. Påvisning af HCV RNA ved PCR i tidlige stadier af udviklingen af en virusinfektion mod baggrunden for fuldstændig fravær af serologiske markører kan fungere som de tidligste tegn på infektion. Den isolerede påvisning af HCV RNA mod baggrunden for fuldstændig fravær af andre serologiske markører kan imidlertid ikke fuldstændigt eliminere det falske positive resultat af PCR.I sådanne tilfælde er en omfattende evaluering af kliniske, biokemiske og morfologiske undersøgelser nødvendig med gentagen gentagen bekræftelse af forekomsten af PCR-infektion. Algoritmen til diagnosticering af HCV ved anvendelse af PCR-metoden er vist i fig.
stor betydning er anvendelsen af PCR hos patienter med kronisk HCV, da de fleste af dem har ingen korrelation mellem forekomsten af viral replikation og aktiviteten af leverenzymer. I sådanne tilfælde tillader kun PCR at dømme tilstedeværelsen af viral replikation, især hvis slutresultatet udtrykkes kvantitativt. I de fleste tilfælde forekommer forsvinden af HCV RNA fra blodserum senere end normaliseringen af leverenzymer, så deres normalisering kan ikke tjene som grundlag for at stoppe antiviral behandling.
Det er praktisk taget vigtigt for påvisning af HCV RNA at undersøge PCR-metoden ikke kun med serum, men også med lymfocytter og hepatobiobaptam. Virus kan opdages 2-3 gange oftere i levervæv end i serum. Ved evaluering af resultaterne af undersøgelsen af blodserum for HCV RNA skal det huskes, at viremi kan variere i naturen( som ændringen i enzymaktivitet).Derfor kan der efter positive resultater af PCR-undersøgelsen opnås et negativt resultat og omvendt. I sådanne tilfælde er det bedre at undersøge hepatobiobater for at løse de tvivl, der opstår.
Detektion af HCV RNA i et materiale, der anvender PCR, anvendes til følgende formål:
■ opløsning af tvivlsomme resultater af serologiske undersøgelser;
■ differentiering af HCV fra andre former for hepatitis;
■ Påvisning af den akutte fase af sygdommen i sammenligning med den overførte infektion eller kontakt;Infektionsstadiet hos nyfødte fra seropositive HCV-mødre;
■ overvåger effektiviteten af antiviral behandling.
Alle ovennævnte egenskaber ved evalueringen af resultater og metoder til diagnosticering af HCV ved anvendelse af PCR er relevante for andre infektioner.
PCR-metoden tillader ikke kun at detektere HCV RNA i testmaterialet, men også at etablere sin genotype. Bestemmelse af virusets genotype er af stor betydning for udvælgelsen af patienter med kronisk HCV i behandlingen af interferon-alfa og ribavirin. Laboratorieindikationer til behandling af kronisk HCV interferon alfa er som følger:
■ øget aktivitet af transaminaser;
■ Tilstedeværelse af HCV RNA i blodet;
■ genotype 1 HCV;
■ Høj viremi i blodet( mere end 8x105 kopier / ml).
Det er nu muligt at kvantificere HCV RNA-indholdet i blodserumet ved hjælp af PCR, hvilket er af stor betydning for behandlingen af interferon alfa-behandling. Niveauet af viremia vurderes som følger: for HCV RNA fra 102 til 104 kopier / ml - svagt;fra 105 til 107 kopier / ml - medium, over 108 kopier / ml - høj. Med effektiv behandling falder niveauet af viremia.