Polymerázová řetězová reakce

PCR - Nedávné pokroky v molekulární genetice, který se používá pro amplifikaci DNA a umožňuje rychle množit in vitro

specifický úsek DNA( tj jakýkoliv požadovaný gen) je větší než 200 000 krát. Pro provedení reakce postačí mít DNA materiál jedné buňky;množství DNA amplifikované pomocí PCR je tak velké, že tato DNA může být prostě barvena( za použití radioaktivních sond po elektroforéze není zapotřebí).Předpokladem pro provedení PCR je znalost nukleotidové sekvence amplifikované DNA oblasti pro správný výběr uměle syntetizovaných primerů.

V současné době, PCR je proces, který se vyskytuje v jedné zkumavce a skládající se z opakujících se cyklů amplifikace( reprodukce, kopie) specifických DNA sekvencí, aby se získal dostatečně velký počet kopií, které mohou být identifikovány pomocí elektroforézy. Jedním z klíčových složek reakce - „primery“ - syntetické oligonukleoti-dy skládající se z 20-30 bází komplementární „stránky“( oblasti) žíhání( spojení) k identifikovatelné části templátu DNA.

PCR probíhá automaticky v programovatelném termostatu - termocykleru( termocyklu).Třístupňový cyklus, který vede k replikům identifikovatelné části templátové DNA, se opakuje 30 až 50krát v souladu s předem nastaveným programem termocyklu. V prvním cyklu oligopramy hybridizují s původním templátovým DNA a následně( v následujících cyklech) as nově syntetizovanými molekulami DNA, které se akumulují v reakční směsi. V druhém případě, syntéza DNA nekončí v důsledku teplotních změn, a při dosažení DNA polymerázy amplifikovány vannogo hraniční části, která určuje velikost nově syntetizovaného DNA oblasti, aby v rámci jednoho nukleotidu.

Jako způsobu detekce molekul DNA, získaných s použitím elektroforézy, o kterou se separace provádí velikosti amplikonů Amplifi-materiál kvalifikací( amplifikačních produktů).

Pomocí PCR se může přímo zkoumat lokalizační domnělou mutaci nebo polymorfní místo, jakož i pro studium přítomnost jakýchkoli jiných specifických vlastností DNA.