karyotyping
Na štúdium chromozómov sa najčastejšie používajú prípravky krátkodobej krvnej kultúry, ako aj bunky kostnej drene a fibroblastové kultúry. Krv dodaná do laboratória s antikoagulantom sa podrobí centrifugácii na vyzrážanie červených krviniek a leukocyty sa inkubujú v kultivačnom médiu 2-3 dni. Do krvnej vzorky sa pridá fytohemaglutinín, pretože urýchľuje aglutináciu erytrocytov a stimuluje rozdelenie lymfocytov. Najvhodnejšie fáza pre štúdium chromozómov - metafázy mitózy, a tak zastaviť rozdelenie lymfocytov použitých v tomto kroku kolchicínom. Pridanie tohto liečiva do kultúry vedie k zvýšeniu podielu buniek, ktoré sú v metafáze, to znamená v tom štádiu bunkového cyklu, kedy sú najlepšie viditeľné chromozómy. Každý chromozóm je replikované( vytvára jeho kópia), po zodpovedajúcom farbenia je viditeľný vo forme dvoch chromatíd pripojených k Centromera, centrálne alebo pasu. Bunky sa potom ošetria hypotonickým roztokom chloridu sodného, fixujú sa a farbia.
Na farbenie chromozómov sa častejšie používa farbivo Romanovsky-Giemsa, 2% acetaminomín alebo 2% acetazarín. Farbiace chromozómy úplne, rovnomerne( rutinná metóda) a môžu byť použité na identifikáciu číselných anomálií ľudských chromozómov.
Pre detailný obrázok štruktúry chromozómov, identifikácia( stanovenie) jednotlivých chromozómov alebo ich úsekov použiť rôzne metódy pre diferenciálnej farbenie. Najčastejšie používané metódy sú Giemsa, ako aj ohýbanie G a Q.Keď sa mikroskopický pomer prepa-
pozdĺž dĺžky chromozómu odhalí séria zafarbených( heterochromatínových) a nelakovaných( euchromatínových) pásov. Takto získaná povaha priečneho pruhu umožňuje identifikovať každý chromozóm v súbore, pretože striedanie pruhov a ich veľkosti sú striktne individuálne a konštantné pre každý pár.
rata detekovaná po dĺžke počtu chromozómu farbené( heterochromatin) a nelakované( euchromatin) pásov. Takto získaná povaha priečneho pruhu umožňuje identifikovať každý chromozóm v súbore, pretože striedanie pruhov a ich veľkosti sú striktne individuálne a konštantné pre každý pár.
Obr. Schematické mapy ľudských chromozómov s diferenciálnym sfarbením
Obr. Schematické mapy ľudských chromozómov s diferenciálnou farbou
metafázových platničiek jednotlivých buniek sú vyfotografované.Jednotlivé chromozómy sú odrezané z fotografií a vkladané na list papiera;takýto obraz chromozómov sa nazýva karyotyp.
Použitie dodatočného farbenia, ako aj nové metódy na získanie chromozómových liekov, ktoré umožňujú dlženie dlhých chromozómov, významne zvyšujú presnosť cytogenetickej diagnostiky.
Na popis ľudského karyotypu bola vyvinutá špeciálna nomenklatúra. Normálny karyotyp muža a ženy je označený ako 46, XY a 46, XX.Pri Downovom syndróme, charakterizovanom prítomnosťou ďalšieho chromozómu 21( trisómiu 21), je ženský karyotyp opísaný ako 47, XX 21 + a muži - 47, XY, 21+.V prítomnosti štrukturálnej anomálie chromozómu je potrebné označiť zmenené dlhé alebo krátke rameno: písmeno p označuje krátke rameno, q dlhé rameno a translokáciu. Tak, keď delécie krátkom ramienku chromozómu 5( "cat cry" syndrómu), je opísaný ako ženský karyotyp 46, XX, 5p. Matka dieťaťa s translokáciou Downov syndróm - nosič s vyváženou translokáciou 14/21 má karyotyp 45, XX, t( 14q, 21q).Translokačný chromozóm sa vytvorí, keď sa zlúčia dlhé ramená chromozómu 14 a 21, krátke ramená sa stratia.
Každé rameno je rozdelené na okresy a naopak - na segmenty a tie a iné sú označené arabskými číslicami. Centromér chromozómu je východiskom pre počítanie regiónov a segmentov.
Pre topografiu chromozómov sa používajú štyri markery: číslo chromozómu, symbol ramena, číslo oblasti a číslo segmentu v rámci daného regiónu. Napríklad záznam 6p21.3 znamená, že ide o chromozóm 6. páru, jeho krátke rameno, oblasť 21, segment 3. Existujú ďalšie symboly, najmä pter - koniec krátkeho ramena, qter - koniec dlhého ramena. Cytogenetické štúdie metóda
umožňuje detekovať delécie a ďalšie zmeny v chromozómoch iba s veľkosťou približne 1 milión báz( nukleotidov).