Immunoenzyme-analys( EIA) - Orsaker, symtom och behandling. MFS.

immunosorbentanalys( ELISA) - moderna laboratorieundersökning, under vilken sökning är att vara specifika antikroppar eller antigener i blodet till specifika sjukdomar för att identifiera inte bara etiologi utan också det stadium av sjukdomen. Resultaten av ELISA kan ges kvalitativt och kvantitativt.

närvarande EIA tillämpas i följande situationer:

1) söka efter specifika antikroppar mot någon smittsam sjukdom;
2) Sök efter antigener av alla sjukdomar( infektiös, veneral);
3) undersökning av patientens hormonella status
4) Undersökning för oncomarkers;
5) Undersökning av förekomsten av autoimmuna sjukdomar. Fördelar

ELISA-metod:

1) hög specificitet och känslighet av ELISA( över 90%).
2) Förmåga att bestämma och övervaka sjukdomsprocessdynamiken, dvs att jämföra mängden av antikroppar i olika tidsintervall.
3) Tillgänglighet av ELISA diagnostik i alla medicinska institutioner. Den relativa bristen

:

1) Detektering av ett immunsvar( antikroppar), men inte av patogenen.

Concepts

Innan klargöra kärnan i ELISA-metoden i korthet är att förstå några begrepp.
Antikroppar( eller immunglobuliner - Ig) - specifika proteiner producerade av B -
lymfocyter( immunceller) som svar på inträde i kroppen av ett infektiöst patogen( virus, bakterier, svampar, etc).Utsöndrar immunglobulin A( IgA), immunoglobulin E( IgE), immunoglobulin M( IgM), immunoglobulin G( IgG), immunoglobulin D( IgD).De skiljer sig från varandra och bildar en molekylmassa halv livslängd deltagande / nonparticipation i infektiösa processer, detektera tidsanpassningen från tiden för infektion. Om vi ​​betraktar molekylvikten, den mest han är IgM - är en pentamer( 950,000 Da), i motsats till resten av Ig( 150-200 000 Da), så IgM helt enkelt inte kan passera placentabarriären. Detekteringen av IgM hos ett barn 1 år är därför alltid ett tecken på infektion hos fostret. Huvuddelen av serum immunoglobuliner representeras IgG( 75-85%), och den lägsta - IgE( 0003%).Den infektiösa processen direkt involverade att endast IgA, M, G. IgE är ett tecken på allergiska reaktioner och tillstånd, och IgD - kan detekteras endast i lymfkörtel och tonsill vävnad, spelar en roll i bildandet av lokal immunitet.

klasser av immunglobuliner

Antigener - högmolekylära organiska substanser, i synnerhet infektiösa patogener och andra sjukdomar, såväl som olika substanser modifierade celler som produceras i en given sjukdom( autoimmun sjukdom, cancer).

Immunkomplex - antigen-antikropp involverad i immunprocessen. Vad är IFA-metoden baserad på?

Flera distinkta ELISA sorter( direkt, indirekt, blockering metod konkurrenter), men i praktiken mest använda heterogena enzymimmunanalys eller ELISA( enzymlänkad immunosorbentanalys)

grundval av immunanalys av immunsvaret av antigenet och antikroppen för att bilda ett immunkomplex: antigen-antikroppen, vilket resulterar i en förändring i den enzymatiska aktiviteten hos specifika etiketter på antikroppens yta. Metoden

ELISA

enklaste form kan denna process delas upp i flera steg:

1) På ytan av den läkare-håls platta, är examina renade antigenspecifik patogen. Vid tillsats det biologiska materialet( blodserum) hos en patient specifik reaktion sker mellan antigenet och den önskade antikroppen( immunglobulin).Denna förening kommer att fungera som ett "speciellt antigen" i nästa steg.

2) I detta skede av bildningen är IR( immunkomplex) - reaktionen mellan "specifik antigen" och konjugat( detta immunglobulin märkt med peroxidas-enzym).En särskild kromogen läggs till. Resultatet av denna enzymatiska reaktionen är bildningen av färgade substanser i brunnarna i plattan, färgintensiteten är beroende av antalet patient immunoglobuliner( antikroppar) som finns i materialet.

3) Vidare finns Tolkning: fotometri med användning av en flerkanalig spektrofotometer som jämför den optiska densiteten av testmaterialet med en optisk densitet av kontrollprover, matematiska bearbetningsresultat. Mängden antikropp i patienten beror på höjden av den optiska densiteten av brunnarna.

Typiskt används 96 brunnsplattor i praktiken.

mängd( eller koncentration) av antikroppar i en viss enhetsvolym vid mätning av optisk densitet( OD) av provvätskan beräknas. Då jämförs resultatet med kontrollprovet.

måste komma ihåg: för varje testsystem utvecklats för att ta hänsyn till individuella prestandaresultat, prestandakrav och patologi( dvs "referensvärde").Detta bör beaktas vid utvärdering av resultaten av varje enskild studie. Korrekt tolka resultaten från ett laboratorium "referensvärden" annat laboratorium. Det är också fel att jämföra resultat från olika laboratorier tillsammans. Vid inställning

ELISA reaktioner och har ett värde sådant koncept som antikropps aviditet. Aviditet
antikropp - denna antikropp antigenbindningsstyrkan och mängden av antigenet beläget i samverkan med immnoglobulinami( antikroppar).Aviditet är av stor betydelse vid bedömningen av den påstådda infektion av begreppet, vilket är oerhört viktigt vid diagnos av primär infektion hos gravida kvinnor.

Basis antikropps aviditet Provet består av behandling av immunkomplex( antigen-antikropp) urealösning för att förstöra proteinet. Vysokoavidnye länkar förbli intakt, och låg aviditet förstöras. Resultatet ges som aviditeten index, uttryckt i procent( %).

Vilka sjukdomar upptäcks av ELISA-diagnostik?

1. Infektionssjukdomar
1,1 Viral hepatit A( IgM, G), antigener B -HBsAg, HBeAg, antikropp - IgM HBcorAg, Ig totalt HBcorAg, IgG HBeAg), C( antikropp Ig M, G HCV), D( IgM,G), E( Ig M, G) och andra.
1,2 HIV infektion( IgG)
1,3 cytomegalovirusinfektion( antikroppar IgM, G)
1,4 Epstein-Barr-infektion eller mononkleoz( antikropp IgM, G till EA, VCA, NA-proteiner av viruset)
1,5 herpetiska infektioner( antikropp IgM, G)
1,6 Toxoplasmos( antikropp IgM, G)
1,7 Rubella( IgM, G)
1,8 Mässling( IgM, G), brucellos( IgM, G), pseudotuberculosis( IgM, G), salmonellos( IgM, G), shigellos eller dysenteri(IgM, G), aspergillos( IgM, G), Fästingburen buren~~POS=HEADCOMP encefalit, borrelios, och många andra.
1,9 parasitosis( giardiasis, toxocariasis, trikinos, opistorhoz, eckinokockos, alveococcosis och andra) i vilka den detekterade IgG
1,10 STD( sexuellt överförbara sjukdomar genom) - mykoplasmos( IgM, G), Ureaplasmosis( IgM, G), Chlamydia( IgA, M, G), syfilis( IgG)
1,11 Helicobacter-infektion( IgG)

2. Markörer för autoimmun sjukdom och index humana immunitets ( totalt IgE, totalt IgG, totalt IgA, totalt IgM, totalt IgD, sekretoriskt IgA, IgG 2, IgG4, CRC cirkulerande immunkomplex, IgA- och IgG-antikroppar mot gliadin och andra)

3. Onkologichsekie markörer ( FNOm - tumörnekrosfaktor, CEA - karcinoembryoniskt antigen, PSA - prostataspecifikt antigen, hCG - humant koriongonadotropin, CA 125, alveomutsin och många andra)

4. Reproduktions sjukdomar I( estradiol, progesteron, prolaktin, testosteron, AFP AFP-FSH - follikelstimulerande hormon och andra)

5. Sjukdomar sköldkörtel( fri och bunden T3, T4, tyroglobulin, tyroid peroxidas - TPO, tyroidstimulerande hormon - TTG).

Denna lista är ingalunda alla sjukdomar diagnostiseras med ELISA.

material för ELISA-analys och regeln staket

vanligaste materialet för ELISA reaktioner - en patients serum, tas på fastande mage. Materialet kan även fungera som cerebrospinalvätska, fostervatten, vitrösa innehåll, slem av cervikalkanalen eller urinrör kompresser.

Förberedelse patienter för leverans av material för IFA

Blod tas på fastande mage. Innan du donerar blod behöver du inte ta några mediciner. Specifik behandling( antibakteriella, antivirala, antiparasit, och så vidare) måste stoppas minst 2 veckor före studien.

tillverkning IFA Datum

Enzymimmunanalysen utförs snabbt, under dagen. Förseningar kan finnas i olika laboratorier på grund av ackumulering av ett visst antal sera. Möjliga resultat

ELISA diagnos

Vid bedömning av resultaten på en specifik infektion är viktig klass antikroppar upptäckts och deras antal. Det påverkar inte bara frågan om etiologin för infektion( dvs. det eller inte), men den uppskattade stadiet av sjukdomen( akut och kronisk), liksom förekomsten av aktiv infektion( akut eller exacerbation av kronisk) vid tidpunkten för undersökningen.

Vad är den ungefärliga tidpunkten för antikroppar( immunoglobuliner - Ig)?

De tidigaste antikropparna är IgM .Identifiera dem kan vara 1-3 veckor efter möjlig infektion, vilket kännetecknar den akuta fasen av den smittsamma processen. Den andra situationen med utseendet av IgM-antikroppar är aktivering( eller exacerbation) av den kroniska processen. IgM-antikroppar cirkulerar i genomsnitt cirka 3 månader, så försvinner deras antal gradvis. Men hos vissa patienter kan spårmängder av IgM detekteras inom 1-2 år från infektionsdagen.

Moderna testsystem är mycket känsliga, vilket resulterar i icke-specifika falskt positiva resultat( ofta hos gravida kvinnor).I denna grupp av patienter bör därför positivt IgM kontrolleras igen!

antikroppar IgA visas 2-4 veckor efter infektion, men i en tillräcklig mängd för att upptäcka - i månaden. Serum-IgA syntetiseras av plasmaceller från mjälten, lymfkörtlar och mukosala sekretoriska IgA koncentrerade på slemhinnor för att utföra sin skyddande funktion - inblandade i lokal immunitet.

Från den 4: e veckan efter infektion börjar -antikroppar IgG att dyka upp. I de flesta infektioner titer av gradvis ökande, med ett maximum vid olika tidpunkter( ett genomsnitt av 1,5-2 månader), då titern låg kvar på en låg nivå och indikerar immunitet. I vissa sjukdomar( mykoplasmos, chlamydia, trichomoniasis) är inte hög IgG nivå, reduceras signifikant på grund av bristen av immunitet i dessa infektioner. Utföringsformer

påvisande av antikroppar av olika klasser:

- Isolerad IgM antikroppsdetektering förutsätter
primär infektion.
- Samtidig detektering av blod IgM och IgG karakteristiska
primär infektion i de föregående 2-3 månaderna, liksom exacerbation av kronisk sjukdom. Därför är förekomsten av IgM inte alltid ett tecken på primär infektion under graviditeten.
- Påvisande av IgG isolerad och kan peka på en immunitet mot sjukdomen,
och en kronisk infektion. I den andra situationen är inställd och mängden antikropp( titer) och förändringen i dynamiken av titern. Vanligtvis genomförs studier med intervall av 2-4-6 veckor.
- Detektion av IgA isolerad eller med IgM indikerar en primär infektion. När
utseende med IgG IgA antas aktivering av en kronisk infektion( medeltal 2 veckor från tiden för exacerbation).

Definition aviditet IgG-antikroppar är ett utmärkt komplement till diagnosstadiet av primär infektion från den långvariga infektion som har sin klinisk betydelse, i synnerhet vid bedömningen av risken för intrauterin infektion av fostret. Detektion av lågkvalitativ IgG indikerar en primär infektion och detekteras i genomsnitt 4-6 månader efter infektion, mindre ofta längre. Lågdos IgG kräver andra laboratoriebevis för primär infektion( IgM).Höga antikroppar är antingen ett tecken på en kronisk sjukdom och dess förvärring eller av en formad immunitet.

särskilt hos spädbarn: hos barn under ett år, och ibland även 1,5 år i blodet cirkulerande maternella IgG-antikroppar mot olika infektioner( dvs det var deras penetration genom moderkakan från moder till foster i livmodern).Det är inte i sig ett tecken på förekomst av infektion i nuet. Om vid en ålder av takjm detekterade IgM( minns att maternal IgM passera moderkakan kan inte), är det ett tecken på infektion eller intrauterin infektion förvärvad efter födseln.

Kvantitativ ELISA-metod

ELISA diagnostiska resultat( med hjälp av enzymimmunoanalys analysator) utfärdas i särskilda enheter:
- Optisk densitet( OD) av provet - koncentrationen av specifik antikropp per volymenhet. Ju högre OP-provet desto högre koncentration av antikroppar. Några resultat avser positivitetskoefficienten( KP) - det här är också den optiska densiteten hos provet.
- Enheter av antikroppskoncentration( nanogram / milliliter eller ng / ml).
- i ett serum titer: 1:20, 1:40, 1: 100, 1: 200, 1: 400, 1: 800, 1: 1200 och så vidare. Diagnostiska titrar( där sjukdomen diagnostiseras och inte infektionen) för olika sjukdomar är olika.
- I form av symboler - "+", "-", "?"( +, ++, +++, ++++).
- I form av en kvalitativ bedömning baserad på ett givet kriterium( positivt eller negativt).

korrekt uppskatta mängden antikroppsvariant immunoglobuliner av identifieringsklass, och följaktligen exponera stadium av sjukdomen och behovet av endast en läkare kan behandla.

får inte glömma att deras "referensvärde"( utföringsformer norm), och över vilken en speciell diagnostiserad sjukdom( varianter patologi) som utvecklats för någon testsystemet. För olika testsystem är "referensvärdena" olika.

En korrekt jämförelse av ELISA-resultaten som tas i dynamik är endast möjlig om de tillverkas i samma laboratorium.

Läkare infektsionist Bykova N.I.