karyotypning
För studier av kromosomer används ofta kortsiktiga blodkulturpreparat, liksom benmärgsceller och fibroblastkulturer. Blodet som levereras till laboratoriet med antikoagulant utsätts för centrifugering för utfällning av röda blodkroppar, och leukocyter inkuberas i odlingsmediet i 2-3 dagar. Phytohemag-glutinin sättes till blodprovet, eftersom det accelererar agglutinationen av erytrocyter och stimulerar uppdelningen av lymfocyter. Den lämpligaste fasen för studier av kromosomer är mitos metafas, så colchicin används för att stoppa uppdelningen av lymfocyter vid detta skede. Att tillsätta detta läkemedel till kulturen leder till en ökning av andelen celler som är i metafas, det vill säga i det skedet i cellcykeln, när kromosomerna ses bäst. Varje kromosomreplikat( producerar sin egen kopia) och efter lämplig färgning är synlig i form av två kromatider kopplade till centromerer eller central förträngning. Cellerna behandlas sedan med en hypotonisk natriumkloridlösning, fixerad och färgad.
För färgning av kromosomer används Romanovsky-Giemsa-färgen, 2% acetaminomin eller 2% acetazarin, oftare. De plettar helt och hållet kromosomer, likformigt( rutinmetoden) och kan användas för att identifiera numeriska anomalier av mänskliga kromosomer.
För att få en detaljerad bild av kromosomernas struktur, identifiering( bestämning) av enskilda kromosomer eller deras segment används olika metoder för differentiell färgning. De vanligaste metoderna är Giemsa, G- och Q-böjning. När mikroskopisk prepa-
rata längs kromosomens längd avslöjas en serie färgade( heterochromatin) och omaintade( eukromatin) band. Naturen av tvärgående strimman, som erhålls på detta sätt, gör det möjligt att identifiera varje kromosom i uppsättningen, eftersom randväxlingen och deras storlekar är strikt individuella och konstanta för varje par.
rata längs kromosomens längd avslöjar en serie färgade( heterochromatin) och omaintade( eukromatin) band. Naturen av tvärgående strimman, som erhålls på detta sätt, gör det möjligt att identifiera varje kromosom i uppsättningen, eftersom randväxlingen och deras storlekar är strikt individuella och konstanta för varje par.
Fig. Schematiska kartor över mänskliga kromosomer med differentialfärgning av
Fig. Schematiska kartor över mänskliga kromosomer med differentiell färgning av
-metafasplattor av enskilda celler fotograferas. Individuella kromosomer skärs av fotografierna och klistras på pappersarket i ordning;En sådan bild av kromosomer kallas en karyotyp.
Användningen av ytterligare färgning, liksom nya metoder för att erhålla kromosomala läkemedel som tillåter sträckande kromosomer i längd, ökar signifikantheten av cytogenetisk diagnostik.
En särskild nomenklatur har utvecklats för att beskriva den mänskliga karyotypen. Den normala karyotypen hos en man och en kvinna betecknas som 46, XY respektive 46, XX.I Downs syndrom, som kännetecknas av närvaron av en ytterligare kromosom 21( trisomi 21) beskrivs kvinnkaryotypen som 47, XX 21 + och män - 47, XY, 21+.I närvaro av en strukturell anomali hos kromosomen är det nödvändigt att ange en ändrad lång eller kort arm: bokstaven p betecknar en kort arm, q en lång arm och t en translokation. Således, när den korta armen av kromosom 5( "kattskrimsyndromet") raderas, beskrivs kvinnkaryotypen som 46, XX, 5p-.Moderen till ett barn med translokations Downs syndrom - en bärare med en balanserad translokation av 14/21 har en karyotyp av 45, XX, t( 14q, 21q).Översättningskromosomen bildas när de långa armarna av kromosom 14 och 21 sammanfogar, korta axlar försvinner.
Varje axel är uppdelad i distrikt, och i sin tur - i segment, och de och andra betecknas med arabiska siffror. Kromosomens centromer är utgångspunkten för räkning av regioner och segment.
Således används fyra markörer för kromosomtopografi: kromosomnummer, axelsymbol, områdesnummer och segmentnummer inom en given region. Rekordet 6p21.3 betyder till exempel att det är en kromosom av det 6: e paret, dess korta arm, region 21, segment 3. Det finns ytterligare symboler, i synnerhet pter - slutet av den korta armen, qter - slutet av den långa armen.
Den cytogenetiska metoden för undersökning gör det möjligt att upptäcka deletioner och andra förändringar i kromosomer endast i storleken av cirka 1 miljon baser( nukleotider).