Karyotyping

Para o estudo de cromossomos, as preparações de cultura de sangue a curto prazo, bem como as células da medula óssea e as culturas de fibroblastos são mais utilizadas. O sangue entregue ao laboratório com anticoagulante é submetido a centrifugação para precipitação de glóbulos vermelhos e os leucócitos são incubados no meio de cultura durante 2-3 dias. Phytohemag-glutinin é adicionado à amostra de sangue, pois acelera a aglutinação de eritrócitos e estimula a divisão de linfócitos. A fase mais adequada para o estudo de cromossomos é a metafase da mitose, de modo que a colchicina é usada para parar a divisão de linfócitos nesta fase. A adição desta droga à cultura leva a um aumento na proporção de células que estão na metafase, ou seja, nessa fase do ciclo celular, quando os cromossomos são melhor vistos. Cada cromossoma se replica( produz sua própria cópia) e após a coloração apropriada é visível sob a forma de duas cromátides ligadas ao centrómero ou constrição central. As células são então tratadas com uma solução hipotônica de cloreto de sódio, fixada e corada.

Para os cromossomos de tingimento, o corante Romanovsky-Giemsa, 2% acetaminomina ou 2% acetazarina são mais utilizados. Eles mancham os cromossomos inteiramente, uniformemente( o método de rotina) e podem ser usados ​​para identificar anomalias numéricas de cromossomos humanos.

Para obter uma imagem detalhada da estrutura dos cromossomos, identificação( determinação) de cromossomos individuais ou seus segmentos, são utilizados vários métodos de coloração diferencial. Os métodos mais utilizados são Giemsa, bem como G- e Q-dobrando. Quando o pré-

microscópico ao longo do comprimento do cromossomo, uma série de bandas coradas( heterochromatin) e não pintadas( euchromatin) é revelada. A natureza da estração transversal, obtida desta forma, permite identificar cada cromossomo no conjunto, uma vez que a alternância de listras e seus tamanhos são estritamente individuais e constantes para cada par.

rata ao longo do comprimento do cromossomo revela uma série de bandas coloridas( heterochromatin) e não pintadas( euchromatin).A natureza da estração transversal, obtida desta forma, permite identificar cada cromossomo no conjunto, uma vez que a alternância de listras e seus tamanhos são estritamente individuais e constantes para cada par.

Fig. Mapas esquemáticos de cromossomos humanos com coloração diferencial de

Fig. São fotografados mapas esquemáticos de cromossomos humanos com coloração diferencial de placas

Metaphase de células individuais. Os cromossomos individuais são cortados das fotografias e colados na folha de papel em ordem;Essa imagem dos cromossomos é chamada de cariotipo.

O uso de coloração adicional, bem como novos métodos para a obtenção de fármacos cromossômicos que permitem o alongamento dos cromossomos no comprimento, aumentam significativamente a precisão do diagnóstico citogenético.

Uma nomenclatura especial foi desenvolvida para descrever o cariotipo humano. O cariotipo normal de um homem e uma mulher é designado como 46, XY e 46, XX, respectivamente. Na síndrome de Down, caracterizada pela presença de um cromossomo adicional 21( trissomia 21), o cariótipo feminino é descrito como 47, XX 21 + e homens - 47, XY, 21+.Na presença de uma anomalia estrutural do cromossomo, é necessário indicar um braço longo ou curto alterado: a letra p designa um braço curto, q um braço longo e uma translocação. Assim, quando o braço curto do cromossomo 5( a síndrome do "gato-grito") é excluído, o cariótipo feminino é descrito como 46, XX, 5p-.A mãe de uma criança com translocação Síndrome de Down - um portador de uma translocação equilibrada de 14/21 tem um cariotipo de 45, XX, t( 14q; 21q).O cromossomo de translocação é formado quando os braços longos do cromossomo 14 e 21 se fundem, os ombros curtos são perdidos.

Cada ombro é dividido em distritos, e eles, por sua vez, em segmentos, e aqueles e outros são denotados por algarismos arábicos. O centrómero do cromossomo é o ponto de partida para a contagem de regiões e segmentos.

Assim, são usados ​​quatro marcadores para topografia cromossômica: número de cromossomo, símbolo de ombro, número de área e número de segmento dentro de uma determinada região. Por exemplo, o registro 6p21.3 significa que é um cromossomo do sexto par, seu ombro curto, área 21, segmento 3. Existem símbolos adicionais, em particular pter - o final do braço curto, qter - o fim do braço longo.

O método de investigação citogenética permite detectar deleções e outras alterações nos cromossomos apenas no tamanho de aproximadamente 1 milhão de bases( nucleotídeos).