Imunofenotipagem de hemoblastose
O progresso significativo na pesquisa de hematologia está conectado nos últimos anos com o uso de métodos imunológicos modernos e meios automatizados para análise e triagem de células de sangue periférico e citometros de medula óssea.morfológica tradicional e estudo citoquímica da doença das células de substrato( sangue, medula vermelha óssea, nódulos linfáticos, baço, etc), em muitos casos, especialmente em doenças linfoproliferativas, não revelam toda a gama de opções de entre formas morfologicamente semelhantes e identificar a origem do clone patológico. Esses problemas podem ser resolvidos apenas estudando as características imunológicas das células. Cada estágio de diferenciação de células hemo-poéticas corresponde ao seu próprio conjunto de Ar, que, de acordo com a classificação internacional, é chamado de diferenciação e é dividido em clusters de diferenciação, CD denotado. Com mudanças neoplásicas, o bloqueio de diferenciação pode ocorrer em qualquer fase do desenvolvimento celular normal, resultando na formação de um clone de células patológicas que determinam o substrato da doença e possuem a mesma característica imunológica( ou fenotípica).Depois de um estudo de estes marcadores nas células pode ser determinado por qualquer forma ou forma de realização da doença são consistentes, ou seja, na base do diagnóstico fenótipo celular diferencial imunológica, que é o mais difícil em desordens linfoproliferativas, porque as doenças patológicas de células de substrato principal são quase o mesmo tipo de células morfologicamente. A fenotipagem permite a digitação de células sanguíneas e células maduras da série mielo, mono- e linfocítica com a ajuda de anticorpos monoclonais pela presença de diferenciação Ag( receptores) na parede celular. Nas membranas das células do sangue e da medula óssea vermelha, os seguintes Ar( marcadores) podem ser identificados.
■ CD2 é uma glicoproteína transmembranar monomérica. Está presente na superfície de todos os linfócitos T circulantes e alguns linfócitos NK.CD2 participa do processo de ativação alternativa de linfócitos T.A detecção de CD2 utilizando anticorpos monoclonais na prática clínica é utilizada para o fenotípico de leucemias de células T agudas, linfomas, doenças crônicas inflamatórias e imunodeficientes.
■ CD3 - um complexo de proteína associado ao receptor de células T específico de Ar, este é o principal marcador funcional de linfócitos T.Facilita a transmissão do sinal de ativação da membrana
para o citoplasma da célula. A detecção de CD3 é indicada para o diagnóstico de leucemia aguda de células T, linfoma( o CD3 não é expresso em tumores linfoides de células não-T) e doenças de imunodeficiência.
■ CD4 é uma glicoproteína transmembranar expressa por uma subpopulação de T helper( indutores) que constituem 45% dos linfócitos do sangue periférico. Nos estágios iniciais do desenvolvimento de linfócitos no timo, Ar CD4, bem como CD8, é expresso por todos os linfócitos corticais. Os timócitos medulares, cujo fenótipo é semelhante às células T CD4 + maduras do sangue periférico( T-helpers), expressam os receptores CD4 ou CD8.No sangue periférico, até 5% das células são simultaneamente rotuladas CD4 e CD8.É possível uma leve expressão de CD4 em algumas células de monócitos. O CD4 é expresso na maioria dos casos por linfomas de células T, incluindo micoses de cogumelos, bem como leucemia de células T associadas a HTLV( HTLV-vírus T-linfotrópico humano).
■ CD5 - uma glicoproteína de cadeia simples presente em todos os linfócitos T maduros e na maioria dos timócitos, é expressivamente expressa pelos linfócitos B.O CD5 é detectado em células neoplásicas de leucemia linfocítica crônica de células B e linfoma centrocítico. Em outros tipos de doenças linfoides malignas - linfoma folicular, leucemia de células pilosas, linfoma de células grandes - o CD5 não é expresso.
■ CD7 é uma proteína de cadeia simples, o primeiro marcador de diferenciação de células T.É expressado por linfócitos pró-T mesmo antes de migrar para o timo. O CD7 é detectado na maioria das células NK, observa-se uma expressão fraca em monócitos. Os linfócitos B e os granulócitos não contêm este Ag. A definição de CD7 é utilizada para o diagnóstico de linfomas, leucemia linfoblástica de células T de crianças.
■ CD8 é uma proteína que consiste em duas cadeias polipeptídicas ligadas por pontes dissulfureto.É expressa por uma subpopulação de linfócitos T citotóxicos e supressores, que compreendem 20-35% dos linfócitos do sangue periférico. Este Ar também tem linfócitos NK, timócitos corticais, 30% de timócitos medulares e uma subpopulação de células vermelhas da medula óssea. CD8 foi testado para quantificar o conteúdo de supressores T
■ CD 10 - associado à membrana celular da endopeptidase. CD10 expressa formas jovens de linfócitos B e uma subpopulação de linfócitos corticais. CD10 expressa todas as células de ALL.
■ CD11c expressa macrófagos, monócitos, granulócitos, células NK e células de leucemia de células pilosas na membrana celular.
■ CD13 é uma glicoproteína expressa por células mielomonocíticas( células progenitoras, neutrófilos, basófilos, eosinófilos, monócitos e células de leucemia mielóide).Está ausente nos linfócitos T. B, eritrócitos e plaquetas.
■ CD14 - glicoproteína de membrana de superfície.É expressa principalmente por monócitos e macrófagos. CD14 é determinado por mais de 95% de sangue periférico e monócitos de medula óssea em
.A forte expressão de CD14 é observada na leucemia mieloblástica aguda. Na leucemia linfoblástica aguda e crônica, este Ar não é expresso.
■ CD15 é um oligossacarídeo. Ele participa dos processos de fagocitose e quimiotaxia. Este Ar está presente na superfície de granulócitos maduros e células Berezovsky-Sternberg. A expressão de Ar CD15 é detectada na doença de Hodgkin. Em limfomas não-Hodgkin, o CD15 não é detectado na maioria dos casos.
■ O CD16 é expresso na superfície de granulócitos, monócitos, macrófagos e células NK.Todos os linfócitos que expressam este Ar são capazes de uma citotoxicidade celular dependente de anticorpos. CD16 é determinado ao digitar leucemias mielocíticas crônicas, para caracterizar células NK.
■ CD 19 é uma glicoproteína presente em todos os linfócitos B periféricos, bem como em todos os precursores de células B.Está ausente nas células plasmáticas. Este é o marcador mais antigo das células B, desempenha um papel importante na regulação da ativação e proliferação de linfócitos B.O CD19 é expresso em todas as células neoplásicas de leucemia aguda de origem de células B e também está presente em algumas formas de leucemia monoblástica aguda.
■ CD20 é uma proteína não glicosilada. Na ontogênese dos linfócitos B, Ar CD20 aparece após CD19 no estágio de diferenciação pré-B-célula de linfócitos. Está ausente na membrana plasmática das células plasmáticas.É expressa em ALL, leucemia linfocítica crônica de células B, leucemia de células pilosas, linfoma de Burkitt e muito raramente em leucemia monoblástica aguda.
■ CD21 é uma glicoproteína, em quantidade significativa está presente nos linfócitos B em órgãos linfóides e em pequena quantidade nas células B do sangue periférico. CD21 é um receptor para o vírus Epna-Stein-Barr.
■ CD22 é uma proteína que consiste em duas cadeias polipeptídicas.É expresso na membrana da maioria dos linfócitos B, incluindo células progenitoras( pró-hematócitos).Ar não é expresso em linfócitos B( células plasmáticas) após a sua ativação. A expressão mais pronunciada de CD22 é detectada em células com leucemia precisa do folículo piloso, leucemias mieloides fracas e LLA de células não-T.
■ CD23 é uma glicoproteína expressa por limfócitos B ativados de sangue periférico em muito maior extensão. CD23 medeia citotoxicidade e fagocitose dependentes de IgE por macrófagos e eosinófilos.
■ CD25 é uma glicoproteína de cadeia única identificada como um receptor de baixa afinidade para a IL-2.Este receptor é expresso em linfócitos T ativados e, em menor densidade, em células B ativadas. No sangue periférico de pessoas saudáveis, Ar está presente em mais de 5% das células linfóides.
■ CD29 - receptor de fibronectina.É amplamente distribuído em tecidos, é expressado por leucócitos. A determinação de CD29 em células Perida
de sangue férrico é usada para tipificar uma subpopulação de células T com um fenótipo CD4 + CD29 +, chamado helper tipo 2( Th2).Essas células, através da produção de linfocinas, participam da realização da resposta imune humoral.
■ CD33 - glicoproteína transmembranar. Está presente na superfície das células da série mielóide e monocítica. Encontra-se na superfície de monócitos e, em menor grau, granulócitos de sangue periférico. Aproximadamente 30% das células vermelhas da medula óssea expressam CD33, incluindo mieloblastos, promielócitos e mielócitos. Ar está ausente em membranas de células-tronco polipotentes. CD33 é usado para caracterizar células em leucemias mielóides. As células de leucemia de origem linfóide e eritroide não expressam CD33.
■ CD34 - fosfoglicoproteína, expressa por células progenitoras hematopoiéticas, incluindo células estaminais monopotentes. A expressão mais pronunciada de Ar é observada em progenitores iniciais;Quando as células amadurecem, a expressão do marcador cai. O CD34 também é encontrado em células endoteliais. O CD34 é utilizado para caracterizar células na leucemia mielográfica e linfocítica aguda. Com leucemia linfocítica crônica e expressão de lim-phoma, Ar CD34 não é detectado.
■ A CD41a é expressa por plaquetas e megacariócitos. Os anticorpos monoclonais para a detecção de CD41a são utilizados para diagnosticar leucemia megacariótica. Com Glązmann thrombasthenia, a expressão deste Ar está ausente ou significativamente suprimida.
■ CD42b é uma glicoproteína de membrana constituída por duas cadeias polipeptídicas. O marcador é encontrado na superfície das plaquetas e megacariócitos. Na prática clínica, a detecção de CD42b é utilizada para diagnosticar trombocitopatia - síndrome de Bernard-Soulier.
■ CD45RA pertence à classe de glicoproteínas transmembranques. Este é um agente leucocitário comum.É expresso na membrana celular dos linfócitos B, em menor grau linfócitos T e em timócitos medulares maduros. O marcador não é expresso pelos granulócitos.
■ CD45RF - isoforma de baixo peso molecular CD45RA - leucócitos comuns Ag. Eles são encontrados em células T( linfócitos T de memória), subpopulações de linfócitos B, monócitos e macrófagos. Os anticorpos monoclonais para CD45RO interagem com a maioria dos timócitos, uma subpopulação de linfócitos T CD4 + e CD8 + em repouso e células T ativadas maduras. As células de origem mielomonocítica, granulócitos e monócitos também possuem este Ag.É detectado com linfomas pré-natais e imunoblásticos.
■ CD46 - dímero O-glicosilado.É amplamente distribuída nos tecidos e expressou T e linfócitos B, monócitos, gra-nulotsitami células NK, as plaquetas, células endoteliais, fibroblastos, mas está ausente na superfície de eritrócitos. CD46 fornece proteção de tecido da ação do complemento.
■ CD61 - plaquetas Ag.É expresso em plaquetas de sangue periférico e medula óssea vermelha, bem como em megacariócitos e megacaroblastos. A sua definição é utilizada como marca de
ra para leucemia aguda megakiaroblástica. A expressão de Ar está ausente ou suprimida em pacientes com trombastenia de Glanzmann.
■ CD95, também conhecido como Fas ou APO-1, - koprotein Gli-transmembranar, um membro da família de receptores do factor de necrose tumoral.É expressa em quantidades significativas em linfócitos T de sangue periférico( CD4 + e CD8 +) e, em menor grau, em linfócitos B e células NK.Este Ar também é expresso em granulócitos, monócitos, células de tecido e células neoplásicas. A ligação de CD95 ao ligando Fas( CD95L) induz apoptose nas células.
■ CD95L, ou ligando de Fas, uma proteína de membrana pertencente à família de receptores do fator de necrose tumoral. Este Ag é expresso por linfócitos T citotóxicos, células NK e muitas vezes células tumorais;o principal indutor da apoptose nas células.
■ O HLA-DR é um determinante monomórfico das moléculas Classe II do principal complexo de histocompatibilidade humana( HLA).Etsya marcador é expresso em células de Langerhans, células dendríticas de órgãos linfóides, e certos tipos de macrófagos, linfócitos B, células T activadas e células epiteliais do timo. O teste para este marcador é usado para quantificar linfócitos T ativados com o fenótipo CD3 + HLA-DR +.
Usando uma seleção diferente de anticorpos monoclonais para marcadores, é possível fazer um retrato fenotípico de células características desta forma de leucemia( Tabela 7-30).
Além de utilizar as técnicas de imunofenotipagem para o diagnóstico diferencial e diagnóstico de doenças malignas hematológicas, particularmente importante voltaram sua utilização no processo de tratamento para avaliar o estado de remissão e população residual de células leucémicas. Sabendo o "retrato" fenotípica de células blásticas no período de diagnóstico, a estes marcadores pode encontrar clone leucêmica células em remissão, e do aumento do seu número - para prever o desenvolvimento de recaída longa( para 1-4 meses) até suas características clínicas e morfológicas.
Tabela caracterização imunofenotípicas de leucemia [Myers A. R., 1996]
Tabela caracterização imunofenotípicas de leucemia [Myers A. R., 1996]
Tabela imunofenotipagem ALL [rico R. R., 2001]
Tabela imunofenotipagem ALL [rico R. R., 2001]
final tabela.
Fim da tabela.
Nota: cig q - cadeia citoplasmática de IgC;sig q é uma superfície Ig e uma cadeia.