Analiza immunoenzymatyczna( EIA) - przyczyny, objawy i leczenie. MF.

test immunosorpcyjny( ELISA) - nowoczesne badań laboratoryjnych, podczas której poszukiwane są specyficzne przeciwciała i antygeny krwi do poszczególnych chorób, które nie tylko zidentyfikować etiologii, lecz także stadium choroby. Wyniki ELISA można podać jakościowo i ilościowo.

Obecnie EIA jest stosowany w następujących sytuacjach:

1) Szukaj przeciwciałami specyficznymi dla każdej choroby zakaźnej;
2) poszukiwanie antygenów wszelkich chorób( zakaźnych, wenerycznych);
3) badanie stanu hormonalnego pacjenta;
4) badanie na obecność markerów onkarków;
5) badanie na obecność chorób autoimmunologicznych. Zalety

metoda ELISA:

1) wysoka specyficzność i czułość testu ELISA( ponad 90%).
2) Zdolność do oznaczania i monitorowania choroby dynamiki procesu, to porównanie ilości przeciwciał w różnych odstępach czasowych.
3) Dostępność diagnostyki ELISA w dowolnej placówce medycznej. Brak względem

:

1) wykrywanie odpowiedzi odpornościowej( przeciwciał), ale nie z patogenu.

Concepts

Przed wyjaśnić istotę metody ELISA, krótko to zrozumieć pewne koncepcje.
przeciwciała lub immunoglobuliny -( Ig) - poszczególne białka wytwarzane przez limfocyty B -
( komórki układu odpornościowego), w odpowiedzi na wprowadzenie do organizmu patogenów zakaźnych( wirusów, bakterii, grzybów, itp.);Wydzielają immunoglobuliny A( IgA), immunoglobulinę E( IgE), immunoglobulinę M( IgM) immunoglobuliny G( IgG), immunoglobulinę D( IgD).Różnią się od siebie i tworzą Masa cząsteczkowa półtrwania / odstąpienie od udziału w procesach zakaźnych wykrywania czasu od chwili zakażenia. Jeśli weźmiemy pod uwagę masę cząsteczkową, najbardziej on IgM - jest to pentamer( 950000 Da), w przeciwieństwie do reszty Ig( od 150 do 200 000 Da), więc po prostu IgM nie mogą przechodzić przez barierę łożyskową.Dlatego wykrycie IgM u 1-rocznego dziecka jest zawsze oznaką zakażenia płodu. Większość immunoglobulin surowicy reprezentowane IgG( 75-85%), a najniższa - IgE( 0,003%).Proces zakaźne bezpośrednio zaangażowane biorąc tylko IgA, M, G IgE są oznaką reakcji i stanów alergicznych i IgD - można było wykryć jedynie w węźle limfatycznym i tkanki migdałków, odgrywa rolę w tworzeniu odporności lokalnego.

klas immunoglobulin

Antygeny - wielkocząsteczkowych substancji organicznych, w szczególności zakaźnych patogenów i innych chorób, jak również różne substancje zmodyfikowane komórki wytworzone w danej choroby( choroby autoimmunologiczne, raka).

Kompleks immunologiczny to kompleks antygen-przeciwciało zaangażowany w proces immunologiczny. Na czym opiera się metoda IFA?

kilka różnych odmian ELISA( bezpośrednia, pośrednia, sposób blokowania konkurentów), ale w praktyce, najczęściej stosowane heterogeniczne immunoenzymatycznego lub ELISA( enzymatyczny test immunosorpcyjny) Podstawa

testów immunologicznych odpowiedzi immunologicznej wobec antygenu i przeciwciała, z wytworzeniem kompleksu immunologicznego antygen-przeciwciało, które powoduje zmianę aktywności enzymatycznej specyficznych znaczników na powierzchni przeciwciał.Sposób

ELISA

najprościej, proces ten może być podzielony na kilka etapów:

1) na powierzchni płyty lekarz otwór, ekspert jest oczyszczony antygen specyficzny patogenu. Podczas dodawania materiału biologicznego( morfologia krwi) specyficznej reakcji pacjenta występuje pomiędzy antygenem i pożądanego przeciwciała( immunoglobuliny).Związek ten będzie działał jako "specjalny antygen" w następnym etapie.

2) W tym etapie formowania jest IR( kompleksów immunologicznych), - reakcja pomiędzy „specyficzny antygen” i koniugatu( ta immunoglobulina znakowane enzymem peroksydazą).Dodawany jest specjalny chromogen. Wynikiem tej reakcji enzymatycznej jest powstawanie zabarwionych substancji w studzienkach płytki, przy czym intensywność zabarwienia zależy od liczby pacjentów immunoglobuliny( przeciwciała), znajdujących się w materiale.

3) dalej znajduje interpretacja fotometryczne przy użyciu spektrofotometru wielokanałowego porównanie gęstości optycznej badanej substancji o gęstości optycznej próbki kontrolne, matematyczne przetwarzania wyników. Ilość przeciwciała w organizmie pacjenta zależy od wysokości gęstość optyczną studzienek.

Zazwyczaj w praktyce stosuje się 96-studzienkowe płytki.

ilość( lub stężenia) przeciwciał określonej jednostce objętości przy pomiarze gęstości optycznej( OD), płynu próbki jest obliczana. Następnie wynik jest porównywany z próbką kontrolną.

należy pamiętać: dla każdego systemu testowego opracowany w celu uwzględnienia wyników indywidualnych osiągnięć, standardów wydajności i patologii( czyli „wartość referencyjna”).Należy to wziąć pod uwagę przy ocenie wyników poszczególnych badań.Poprawnie zinterpretować wyniki laboratoryjnych „Wartości referencyjne” innym laboratorium. Nieprawidłowe jest również porównywanie wyników różnych laboratoriów. Podczas ustawiania reakcji

ELISA i ma wartość taką koncepcję jako zachłannością wiązania przeciwciała. Awidność
przeciwciało - przeciwciało wiążące antygen wytrzymałość i ilość antygenu znajduje się powiązania z immnoglobulinami( przeciwciała).Zachłanność ma wielkie znaczenie przy ocenie rzekomej infekcji pojęcia, co jest niezwykle ważne w diagnostyce infekcji pierwotnej u kobiet w ciąży.

wyrywkowy zachłanność przeciwciała obejmuje traktowanie kompleksem immunologicznym( antygen-przeciwciało) roztworu mocznika w celu rozłożenia białka.linki Vysokoavidnye pozostają nienaruszone i niski zachłanność zniszczone. Wynik podaje się jako indeks zachłanności, wyrażona w procentach( %).

Jakie choroby diagnozuje się przy pomocy diagnostyki IFA?

1. Choroby zakaźne
1,1 wirusowe zapalenie wątroby typu A( IgM, G), B antygenów -HBsAg, HBeAg przeciwciało - HBcorAg IgM, IgG, IgG całkowitej HBcorAg HBeAg), C( przeciwciała Ig M, G, D) HCV( IgMG), E( Ig M, G) i inne.
1,2 zakażenie HIV( IgG)
1,3 cytomegalii( przeciwciała IgM, G)
1,4 Epsteina-Barra infekcji lub mononkleoz( IgM G EA VCA białka NA wirusa)
1,5 infekcji opryszczki( przeciwciało IgM, G)
1,6 toksoplazmoza( przeciwciało IgM, G)
1,7 Różyczka( IgM, G)
1,8 Odra( IgM, G), brucelozy( IgM G) pseudotuberculosis( IgM, G), salmonellozy( IgM, G), zakażenie pałeczkami Shigella lub biegunka(IgM, G), aspergiloza( IgM, G), kleszczowego zapalenia mózgu, boreliozy, i wiele innych.
1,9 parazytozy( lambliozę, toksokaroza, włośnica, opistorhoz, Echinokokoza, alveococcosis i inni), w których wykrytej IgG
STD 1,10( przez choroby przenoszone drogą płciową) - mikoplazmozy( IgM G) Ureaplasmosis( IgM, G), Chlamydia( IgA, F, G), kiła( IgG)
1,11 zakażenie Helicobacter( IgG)

2. Znaczniki choroby autoimmunologiczne, oraz wskaźników odporności człowieka ( całkowitej IgE, całkowitej IgG, całkowitej IgA, całkowitej IgM, całkowite IgD wydzielnicze IgA, IgG, 2, lgG4, CRC krążących kompleksów immunologicznych, IgA i IgG przeciwciała do gliadyny i inni)

3. markery Onkologichsekie ( FNO - czynnika martwicy nowotworu, CEA - antygen karcynoembrionalny, PSA - prostatę specific antygen, hCG - ludzka gonadotropina kosmówkowa, CA 125, alveomutsin i wiele innych)

4. zaburzenia rozrodcze I( estradiol, progesteron, prolaktyna, testosteron, AFP AFP-FSH - hormon folikulotropowy i inne)

5. Choroby tarczycy( wolnej i związanej T3, T4, tyroglobuliną tarczycy peroksydazy - TPO, hormon tyreotropowy - TTG).

Ta lista nie jest bynajmniej wszystkie choroby są diagnozowane za pomocą testu ELISA.Materiał

do analizy ELISA i zasada ogrodzenia

najczęściej materiału do reakcji ELISA - surowica pacjenta, wykonane na czczo. Materiał ten może również służyć jako płyn mózgowo-rdzeniowy, płyn owodniowy, szklistych zawartości śluzu szyjkowego kanał i cewki wymazów.

Przygotowanie pacjentów do dostarczania materiału do IFA

pobiera się krew na czczo. Przed oddaniem krwi nie musisz brać żadnych leków. Specyficzne leczenie( przeciwbakteryjne, przeciwwirusowe, przeciwpasożytnicze, i tak dalej), muszą zostać przerwane przez co najmniej 2 tygodnie przed rozpoczęciem badania.

produkcji IFA Daty

Test immunoenzymatyczny przeprowadzany jest szybko, w ciągu dnia. Opóźnienia mogą występować w różnych laboratoriach ze względu na nagromadzenie pewnej liczby surowic. Wyniki możliwe

ELISA

diagnostyczny Przy ocenie wyników na konkretnej infekcji jest ważną klasą przeciwciała wykrywane i ich liczbę.To ma wpływ nie tylko kwestią etiologia infekcji( to znaczy, czy nie), lecz szacuje stopień choroby( ostre i przewlekłe), a także w obecności aktywnego zakażenia( ostre lub zaostrzenia przewlekłej) w czasie badania.

Jakie są przybliżone terminy pojawiania się przeciwciał( immunoglobuliny-Ig)?

Najwcześniejszymi przeciwciałami są IgM .Zidentyfikowanie ich może nastąpić 1-3 tygodni po możliwej infekcji, co charakteryzuje ostrą fazę procesu zakaźnego. Drugą sytuacją związaną z pojawieniem się przeciwciał IgM jest aktywacja( lub zaostrzenie) przewlekłego procesu. Przeciwciała IgM krążą średnio około 3 miesięcy, a następnie ich liczba stopniowo zanika. Jednak u niektórych pacjentów śladowe ilości IgM można wykryć w ciągu 1-2 lat od momentu zakażenia.

Nowoczesne systemy testowe są bardzo czułe, co powoduje niespecyficzne wyniki fałszywie dodatnie( często u kobiet w ciąży).Dlatego w tej grupie pacjentów należy ponownie sprawdzić obecność IgM!

Przeciwciała IgA pojawiają się 2-4 tygodnie po zakażeniu, ale w ilości wystarczającej do wykrycia - w ciągu miesiąca. Surowicy IgA syntetyzowana przez komórki krwi w śledzionie, węzłach chłonnych i śluzówkowych IgA wydzielnicza koncentrowały się na błonach śluzowych, do pełnienia swojej funkcji ochronnej - zaangażowane w odporności lokalnego.

Od 4 tygodnia po zakażeniu zaczynają pojawiać się przeciwciała IgG .W większości zakażeń ich miano stopniowo wzrasta z maksimum w różnym czasie( średnio po 1,5-2 miesiącach), wtedy miano pozostaje na niskim poziomie i wskazuje na odporność.W niektórych chorób( mykoplazmoza, Chlamydia, rzęsistkowica) Poziom IgG nie jest wysoka, jest znacznie ograniczone z uwagi na brak odporności na tych zakażeń.Przykłady wykonania

wykrywania przeciwciał o różnych klasach:

- pojedyncze wykrywania przeciwciał IgM zakłada
pierwotnego zakażenia.
- jednoczesnego wykrywania IgG i IgM we krwi charakterystycznym
pierwotne zakażenie w poprzednich 23 miesięcy, jak również nasilenie choroby przewlekłej. Dlatego w czasie ciąży obecność IgM nie zawsze jest oznaką pierwotnej infekcji.
- Wykrywanie izolowanej IgG może wskazywać zarówno na odporność na tę chorobę,
, jak i przewlekłą infekcję.W drugiej sytuacji ważna jest również liczba przeciwciał( miana), a zmiana tego miana jest w dynamice. Zazwyczaj badania są prowadzone w odstępach 2-4-6 tygodni.
- Wykrywanie IgA izolowanego lub IgM wskazuje na pierwotną infekcję.W przypadku
oczekuje się, że pojawienie się IgA razem z IgG będzie aktywować przewlekłą infekcję( średnio 2 tygodnie od czasu zaostrzenia).

Definicja zachłanności przeciwciała IgG jest doskonałe uzupełnienie do etapu diagnoza pierwotnego zakażenia od dawna infekcji, która ma swoje znaczenie kliniczne, zwłaszcza przy ocenie zagrożenia wewnątrzmacicznego zakażenia płodów. Wykrycie niskiej klasy IgG wskazuje na pierwotną infekcję i jest wykrywane średnio 4-6 miesięcy po zakażeniu, rzadziej dłużej. Niska dawka IgG wymaga innych laboratoryjnych dowodów pierwotnego zakażenia( IgM).Wysokie przeciwciała są albo znakiem przewlekłej choroby i jej zaostrzenia, albo utworzonej odporności.

zwłaszcza u niemowląt: u dzieci w wieku poniżej jednego roku, a czasami nawet 1,5 lat w krwi krążącej matczynych IgG do różnych zakażeń( np była penetracja przez łożysko od matki do płodu w macicy).Sam w sobie nie jest oznaką infekcji. Jeśli w wieku takjm wykryto IgM( IgM przypomnieć, że matki przez łożysko nie mogą), jest to oznaką infekcji lub zakażenia wewnątrzmacicznego nabyte po urodzeniu.

Ilościowa metoda ELISA

Wynik diagnostyki ELISA( za pomocą testu immunoenzymatycznego) podano w niektórych jednostkach:
- Gęstość optyczna( OP) próbki to stężenie specyficznych przeciwciał na jednostkę objętości. Im wyższa próbka OP, tym wyższe stężenie przeciwciał.Niektóre wyniki odnoszą się do współczynnika dodatniego( KP) - jest to również gęstość optyczna próbki.
- Jednostki stężenia przeciwciał( nanogram / mililitr lub ng / ml).
- W postaci miana surowicy: 1:20, 1:40, 1: 100, 1: 200, 1: 400, 1: 800, 1: 1200 i tak dalej. Miana diagnostyczne( w których choroba jest diagnozowana, a nie fakt zakażenia) dla różnych chorób są różne.
- W postaci symboli - "+", "-", "?"( +, ++, +++, ++++).
- W formie oceny jakościowej opartej na danym kryterium( dodatnim lub ujemnym).

Słusznie należy oszacować liczbę przeciwciał, wariant wykrywający klasy immunoglobulin, a tym samym wystawić stadium choroby, a konieczność leczenia może być wykonana tylko przez lekarza.

Nie należy zapominać, że dla dowolnego systemu testowego opracowywane są ich "wartości referencyjne"( warianty normy), gdy przekraczają one którąś z tych chorób( patologie).W przypadku różnych systemów testowych "wartości odniesienia" są różne.

Prawidłowe porównanie wyników ELISA podjętych w dynamice jest możliwe tylko wtedy, gdy są one wytwarzane w tym samym laboratorium.

Infektasysta lekarz Bykova N.I.