Polymerasekjedereaksjon

PCR - Nylige fremskritt innen molekylær genetikk, anvendt for å amplifisere DNA, og gjør det mulig å raskt forplante in vitro

bestemt del av DNA( dvs. hvilket som helst gen av interesse) er mer enn 200 000 ganger. For å utføre reaksjonen er det tilstrekkelig å ha DNA-materialet i en celle;mengden av DNA forsterket av PCR er så stor at dette DNAet enkelt kan bli farget( ved bruk av radioaktive prober etter elektroforese er ikke nødvendig).En nødvendig betingelse for PCR-- kjennskap til nukleotidsekvensen av den amplifiserte regionen av DNA til det riktige valg av kunstig syntetiserte primere-merer.

For tiden er PCR-en prosess som skjer i et enkelt rør og som består av gjentatte sykluser med amplifikasjon( reproduksjon, kopiering) av spesifikke DNA-sekvenser for å oppnå et tilstrekkelig stort antall kopier som kan identifiseres ved hjelp av elektroforese. En av de viktigste komponentene i reaksjons - "primere" - syntetisk oligonukleoti-dy bestående av 20-30 baser av komplementære "områder"( områder) gløding( forbindelse) til den identifiserbare del av templat-DNA.

PCR kjører automatisk i en programmerbar termostat - termocykler( termocykler).Tre-trinns syklus der kopier oppnås identifiserbar del av templat-DNA, ble gjentatt 30-50 ganger i overensstemmelse med et forutbestemt program termisk syklus-ra. I den første syklus oligo hybridisere med det opprinnelige templat-DNA, og deretter( i påfølgende sykluser), og de nylig syntetiserte DNA-molekyler som deres akkumulering i reaksjonsblandingen. I sistnevnte tilfelle slutter syntesen av DNA ikke på grunn av en endring i temperaturregimet, men ved å nå DNA-polymerasegrensen av det amplifiserte område, som bestemmer størrelsen på det nylig syntetiserte DNA-området til innenfor ett nukleotid.

Som en metode for å detektere de oppnådde DNA-molekyler, anvendes elektroforese, ved hjelp av hvilket det amplifiserte materialet deles i henhold til størrelsen av amplikoner( amplifikasjonsprodukter).

Ved hjelp av PCR er det mulig å undersøke lokaliseringsstedene for mistenkte mutasjoner eller polymorfe områder, og også å studere tilstedeværelsen av andre spesifikke egenskaper av DNA.