Immunoenzymanalyse( EIA) - Årsaker, symptomer og behandling. MFS.
immunosorbent-analyse( ELISA) - moderne laboratorieundersøkelse, hvor søket er å være spesifikke antistoffer eller antigener i blodet til bestemte sykdommer for å identifisere ikke bare etiologi, men også det stadium av sykdommen. ELISA-resultater kan utstedes både kvalitativt og kvantitativt.
tiden EIA anvendes i følgende situasjoner:
1) Søk etter spesifikke antistoffer mot enhver smittsom sykdom;
2) søkte antigener av noen sykdommer( infeksjonssykdommer, veneriske sykdommer);
3) undersøkelse av pasientens hormonelle status
4) undersøkelse for oncomarkers;
5) undersøkelse for forekomst av autoimmune sykdommer. Fordeler
ELISA-metode:
1) høy spesifisitet og sensitivitet av ELISA( over 90%).
2) Evne til å bestemme og overvåke sykdomsprosessdynamikken, dvs. sammenligning av mengden av antistoffer i forskjellige tidsintervaller.
3) ELISA diagnostisk tilgjengelighet til enhver medisinsk institusjon. Den relative mangel
:
1) Påvisning av en immunrespons( antistoffer), men ikke av organismen.
Konsepter
Før avklare essensen av ELISA-metoden, kort er å forstå noen begreper.
antistoffer( eller immunoglobuliner - Ig) - spesifikke proteiner produsert av B -
lymfocytter( immunceller) i respons til inntreden i kroppen av en infeksiøs patogen( virus, bakterier, sopp, etc.).Utsondre immunoglobulin A( IgA), immunoglobulin E( IgE), immunoglobulin M( IgM), immunoglobulin G( IgG), immunoglobulin D( IgD).De skiller seg fra hverandre og danner en molekylær masse halveringstid deltakelse / nonparticipation i smittsomme prosesser, detektere den tids fra tidspunktet for infeksjon. Hvis vi ser på molekylvekt, den mest han er IgM - er en pentamer( 950 000 Da), i motsetning til resten av Ig( 150 til 200 000 Da), så IgM simpelthen ikke kan passere gjennom placenta. Derfor påvisning av IgM i et barn en leveår er alltid et tegn på infeksjon hos fosteret. Størstedelen av serum-immunglobuliner er representert IgG( 75-85%), og den laveste - IgE( 0,003%).Smitteprosess direkte involvert kun IgA, M, G. IgE er et tegn på allergiske reaksjoner og betingelser, og IgD - kan påvises bare i lymfeknuten og mandel vev, spiller en rolle i dannelsen av lokal immunitet.
klasser av immunoglobuliner
Antigener - høymolekylære organiske stoffer, særlig infeksiøse patogener og andre sykdommer, så vel som forskjellige stoffer modifiserte celler som produseres i en gitt sykdom( autoimmun sykdom, kreft).
Immunkompleks - antigen-antistoff som er involvert i immunprosessen. Hva er IFA-metoden basert på?
flere forskjellige ELISA-varianter( direkte eller indirekte, blokkerende metode Konkurrenters), men i praksis som oftest brukes heterogen enzym-immunanalyse eller ELISA( enzymbundet immunosorbent analyse)
basis av immunoanalyse av immunresponsen til antigenet og antistoffet for å danne et immunkompleks: antigenbispesifikke antistoffer, noe som resulterer i en endring av enzymatisk aktivitet av bestemte merker på antistoffet overflate. Fremgangsmåten
ELISA
enkleste form, kan denne prosessen deles opp i flere trinn:
1) på overflaten av det lege-hullplaten, er det sensor renset antigen spesifikk patogen. Ved tilsetting av biologisk materiale( blodserum) av en pasient på en spesifikk reaksjon mellom antigen og det ønskede antistoff( immunoglobulin).Denne forbindelsen vil fungere som et "spesielt antigen" i neste trinn.
2) På dette stadium av formasjonen er IR( immunkompleks) - reaksjonen mellom den "spesifikke antigen" og konjugat( dette immunoglobulin merket med peroksidase-enzym).En spesiell kromogen er lagt til. Resultatet av denne enzymatiske reaksjon er dannelse av fargede stoffer i brønnene på platen, fargeintensiteten som avhenger av antall pasient immunglobuliner( antistoffer) som inneholdes i materialet.
3) videre er det Tolkning: fotometrisk ved hjelp av en flerkanals spektrofotometer som sammenligner den optiske tetthet av testmaterialet med en optisk tetthet på kontrollprøver matematisk behandling som resultat. Mengden av antistoff i pasientens avhenger av høyden av den optiske tetthet av brønnene.
vanlig praksis å bruke 96 brønners plater.
mengde( eller konsentrasjon) av antistoffer i en bestemt volumenhet ved å måle den optiske tetthet( OD) av prøvevæsken beregnes. Resultatet blir så sammenlignet med en kontrollprøve.
må huskes: for hver test system utviklet for å ta hensyn til individuelle resultatutvikling, ytelsesstandarder og patologi( dvs. "referanseverdi").Dette bør vurderes når man skal vurdere resultatene av hver case study. Tolke resultatene av et laboratorium "referanseverdier" et annet laboratorium. Det er også feil å sammenligne resultater fra ulike laboratorier sammen. Ved innstilling
ELISA-reaksjoner, og har en verdi slik konsept som antistoff aviditet. Aviditet
antistoff - dette antistoff antigen-bindingsstyrke og den mengde av antigenet som ligger i innbyrdes forbindelse med immnoglobulinami( antistoffer).Grådighet er av stor betydning ved vurdering av den påståtte infeksjon av begrepet, som er svært viktig i diagnostisering av primær infeksjon hos gravide kvinner.
Basis antistoff aviditet test består i behandling av immunkompleks( antigen-antistoff) urea-løsning for å ødelegge protein. Vysokoavidnye koblinger forblir intakt, og lav aviditet ødelagt. Resultatet er gitt som aviditeten indeks, uttrykt som en prosentandel( %).
Hvilke sykdommer blir oppdaget av ELISA-tester?
1. Infeksjonssykdommer
1.1 Viral hepatitt A( IgM, G), B-antigener -HBsAg, HBeAg, antistoff - IgM HBcorAg, Ig total HBcorAg, IgG HBeAg), C( antistoff lg M, G HCV), D( IgM,G), E( lg M, G) og andre.
1.2 HIV-infeksjon( IgG)
1,3 cytomegalovirusinfeksjon( antistoff IgM, G)
1,4 Epstein-Barr-infeksjon eller mononkleoz( antistoff IgM, G EA, VCA, NA proteiner av virus)
1,5 Herpes- infeksjoner( antistoff IgM, G)
1,6 toksoplasmose( antistoff IgM, G)
1,7 Rubella( IgM, G)
1,8 Meslinger( IgM, G), brucellose( IgM, G), pseudotuberculosis( IgM, G), salmonellose( IgM, G), Shigella eller dysenteri(IgM, G), aspergillose( IgM, G), tick-borne encefalitt, borreliose, og mange andre.
1,9 parasitosis( giardiasis, toxocariasis, trikinose, opistorhoz, echinococcosis, alveococcosis og andre) i hvilken den detekterte IgG
1.10 STD( seksuelt overførbare sykdommer gjennom) - mykoplasmose( IgM, G), Ureaplasmosis( IgM, G), Chlamydia( IgA, M, G), syfilis( IgG)
1,11 Helicobacter-infeksjon( IgG)
2. Markører for autoimmune sykdommer og human immunitet indekser ( total IgE, total IgG, total IgA, total IgM, total IgD, IgA, IgG 2, IgG4, CRC sirkulerende immunkomplekser, IgA og IgG antistoffer mot gliadin og andre)
3. Onkologichsekie markører ( FNOm - tumornekrosefaktor, CEA - karsinoembryonalt antigen, PSA - prostata spesifikt antigen, hCG - humant choriongonadotropin, CA 125, alveomutsin og mange andre)
4. reproduktive forstyrrelser I( østradiol, progesteron, prolaktin, testosteron, AFP AFP-FSH - follikkelstimulerende hormon og andre)
5. Diseases skjoldbruskkjertelen( fritt og bundet T3, T4, thyroglobulin, thyroid peroxidase - TPO, tyroidstimulerende hormon - TTG).
Denne listen er på ingen måte alle sykdommer er diagnostisert av ELISA.
materiale for ELISA-analyse og styre gjerde
vanligste materialet for ELISA-reaksjoner - en pasients serum, tatt på tom mage. Materialet kan også tjene som cerebrospinalvæske, fostervann, glassaktig innhold, slim fra livmorkanalen og uretrale spinner.
Klar pasienter for levering av materiale til IFA
Blod blir tappet på tom mage. Før levering av blod trenger ikke å ta noen medikamenter. Spesifikk behandling( antibakterielle, antivirale, antiparasittisk, og så videre) må stoppes minst 2 uker før undersøkelsen.
fremstilling IFA datoer
Enzymimmunoassayet utføres raskt, om dagen. Forsinkelser kan være i forskjellige laboratorier på grunn av akkumulering av et visst antall sera.
Mulige resultater av ELISA-diagnosen
Ved vurdering av resultatene for bestemte infeksjoner er klassen av antistoffer detektert og deres nummer viktig. Det påvirker ikke bare spørsmål om etiologien av infeksjon( dvs. det eller ikke), men den estimerte fasen av sykdommen( akutt og kronisk), så vel som tilstedeværelse av aktiv infeksjon( akutt eller forverring av kronisk) på tidspunktet for undersøkelsen.
Hva er de omtrentlige betingelsene for utseendet av antistoffer( immunoglobuliner-Ig)?
De tidligste antistoffene er IgM .Identifisere dem kan være 1-3 uker etter mulig infeksjon, som karakteriserer den akutte fasen av den smittsomme prosessen. Den andre situasjonen med utseendet av IgM-antistoffer er aktivering( eller eksacerbasjon) av den kroniske prosessen. IgM antistoffer sirkulerer i gjennomsnitt ca 3 måneder, og deretter forsvinner nummeret gradvis. Imidlertid kan det hos noen pasienter oppdages spormengder av IgM innen 1-2 år fra infeksjonstidspunktet.
Moderne testsystemer er svært følsomme, noe som resulterer i ikke-spesifikke falske positive resultater( ofte hos gravide kvinner).Derfor, i denne gruppen av pasienter, bør positiv IgM kontrolleres!
IgA antistoffer opptrer 2-4 uker etter infeksjon, men i en mengde som er tilstrekkelig til deteksjon - om en måned. Serum IgA syntetisert av plasmaceller i milt, lymfeknuter og slimhinne sekretorisk IgA og konsentrert på slimhinner for å utføre sin beskyttende funksjon - som er involvert i lokal immunitet.
Fra fjerde uke etter infeksjon begynner antistoffer IgG å vises. I de fleste infeksjoner øker deres titer gradvis med et maksimum på forskjellige tidspunkter( i gjennomsnitt etter 1,5-2 måneder), så forblir titeren på et lavt nivå og indikerer immunitet. I noen sykdommer( mykoplasmose, chlamydia, trichomoniasis) er ikke høy IgG-nivå, blir vesentlig redusert på grunn av mangel på immunitet i disse infeksjonene. Utførelsesformer
påvisning av antistoffer av forskjellige klasser:
- Isolated IgM-antistoffpåvisning foruts
primærinfeksjon.
- Samtidig påvisning av blod IgM og IgG karakteristisk
primær infeksjon i de foregå 2-3 måneder, så vel som forverring av kronisk sykdom. Derfor er tilstedeværelsen av IgM i graviditet ikke alltid et tegn på primær infeksjon.
- Deteksjon av isolert IgG kan indikere både immunitet mot sykdommen,
og kronisk infeksjon. I den andre situasjonen er antall antistoffer( titer) også viktig, og endringen i denne titeren er i dynamikk. Vanligvis utføres studier med intervaller på 2-4-6 uker.
- Deteksjon av IgA isolert eller med IgM indikerer en primær infeksjon. Med
forventes utseendet av IgA sammen med IgG å aktivere kronisk infeksjon( i gjennomsnitt 2 uker fra eksacerbasjonstidspunktet).
Definisjon aviditet IgG-antistoffer er et utmerket supplement til diagnostisering stadium av primær infeksjon fra den langvarige infeksjoner som har en klinisk betydning, særlig når man vurderer risiko for intrauterin infeksjon hos fosteret. Påvisning av lav aviditet IgG indikerer en primær infeksjon og identifiserer den gjennomsnittlige etter 4-6 måneder etter infeksjon, sjelden lenger. Lav aviditet IgG kreve andre laboratoriemessig primær infeksjon( IgM).Høy-antistoffer er enten et tegn på en kronisk sykdom og dens forverring, eller av en dannet immunitet.
spesielt hos spedbarn: hos barn under ett år, og noen ganger også 1,5 år i blodet sirkulerer maternelle IgG antistoffer mot ulike infeksjoner( dvs. det var deres penetrasjon gjennom morkaken fra mor til foster i livmoren).Det er ikke i seg selv et tegn på infeksjon i nåtiden. Hvis i en alder av takjm detekterte IgM( husker at moder IgM placenta og kan ikke), er det et tegn på infeksjon eller intrauterin infeksjon ervervet etter fødselen.
Kvantitativ ELISA-metode
Resultatet av ELISA-diagnostikken( ved hjelp av enzymimmunoassayet) er gitt i enkelte enheter:
- Optisk tetthet( OP) av prøven er konsentrasjonen av spesifikke antistoffer per volumdel. Jo høyere OP-prøven, desto høyere er antistoffkoncentrasjonen. Noen resultater refererer til positivitetskoeffisienten( KP) - dette er også den optiske densiteten til prøven.
- Enheter av antistoffkonsentrasjon( nanogram / ml eller ng / ml).
- I form av serum titere: 1:20, 1:40, 1: 100, 1: 200, 1: 400, 1: 800, 1: 1200 og så videre. Diagnostiske titre( hvor sykdommen er diagnostisert, og ikke faktum av infeksjon) for forskjellige sykdommer, er forskjellige.
- I form av symboler - "+", "-", "?"( +, ++, +++, ++++).
- I form av en kvalitativ vurdering basert på et gitt kriterium( positivt eller negativt).
Det er riktig å estimere antall antistoffer, varianten av klassedeteksjon av immunoglobuliner, og følgelig å eksponere scenen av sykdommen, og behovet for behandling kan kun utføres av en lege.
Det bør ikke glemmes at for alle testsystemer blir deres "referanseverdier"( varianter av normen) utviklet når de overskrider hvilken en eller annen sykdom som er diagnostisert( patologiske varianter).For forskjellige testsystemer er "referanseverdiene" forskjellige.
En korrekt sammenligning av ELISA-resultatene tatt i dynamikk er bare mulig hvis de er produsert i samme laboratorium.
Leger infektsionist Bykova N.I.