Polymerase kettingreactie
PCR - Recente ontwikkelingen in de moleculaire genetica, gebruikt om het DNA te versterken en stelt u in staat om snel te verspreiden in vitro
specifiek stuk DNA( dat wil zeggen, elk gen van belang) is meer dan 200 000 keer. Voor het uitvoeren van de reactie is het voldoende om het DNA-materiaal van één cel te hebben;de hoeveelheid DNA geamplificeerd door PCR is zo groot dat dit DNA eenvoudig kan worden gekleurd( met behulp van radioactieve sondes nadat elektroforese niet vereist is).Een vereiste voor het uitvoeren van PCR is de kennis van de nucleotidesequentie van het geamplificeerde DNA-gebied voor de juiste selectie van kunstmatig gesynthetiseerde primers.
moment PCR is een proces dat optreedt in een enkele buis bestaande uit herhalende cycli van amplificatie( reproductie, kopiëren) van specifieke DNA-sequenties om een voldoende groot aantal kopieën dat kan worden geïdentificeerd door elektroforese verkrijgen. Een van de belangrijkste componenten van de reactie - "primers" - synthetische oligonukleoti-dy bestaande uit 20-30 basen complementair "sites"( gebieden) annealing( verbinding) aan de identificeerbare gedeelte van het matrijs-DNA.
PCR wordt automatisch uitgevoerd in een programmeerbare thermostaat - thermocycler( thermocycler).De driestapscyclus, die resulteert in replica's van het identificeerbare gedeelte van het matrijs-DNA, wordt 30-50 keer herhaald in overeenstemming met het vooraf ingestelde programma van de thermische cycler. In de eerste cyclus hybridiseren de oligoprameren met het oorspronkelijke matrijs-DNA en vervolgens( in daaropvolgende cycli) en met de nieuw gesynthetiseerde DNA-moleculen terwijl ze zich in het reactiemengsel verzamelen. In het laatste geval doet DNA-synthese eindigt als gevolg van temperatuurveranderingen en bij het bereiken van het DNA-polymerase geamplificeerd vannogo grensgedeelte, die de grootte van de nieuw gesynthetiseerde DNA-gebied bepaalt binnen één nucleotide.
Als een werkwijze voor het detecteren van DNA moleculen verkregen middels elektroforese, waarbij de scheiding wordt uitgevoerd versterker-materiaal opgeleide sized amplicons( amplificatie producten).
Met behulp van PCR kan direct onderzoeken lokalisatie vermeende mutatie of polymorfe site, evenals de aanwezigheid van andere DNA specifieke kenmerken te bestuderen.