Polymerase-kettingreactie bij de diagnose van infectieziekten

PCR - een van de werkwijzen voor DNA-diagnostiek mogelijk maakt om het aantal kopieën van een detecteerbaar gedeelte van het genoom( DNA) bacteriën of virussen te verhogen is een miljoen keer behulp van een DNA polymerase-enzym. Het segment van het geteste nucleïnezuur voor een bepaald genoom wordt vele malen vermenigvuldigd( geamplificeerd), waardoor het kan worden geïdentificeerd. Eerst wordt een DNA-molecuul bacteriën of virussen door verhitting uit twee ketens, dan in aanwezigheid van de gesynthetiseerde DNA-primers( sequentie van nucleotiden die specifiek zijn voor de gedefinieerde genome) wordt deze binden met complementaire stukken DNA, gesynthetiseerd de tweede streng van het nucleïnezuur na elke primer in aanwezigheid van een thermostabiel DNA- polymerase. Twee DNA-moleculen worden verkregen. Het proces wordt vele malen herhaald. Voor diagnose is één DNA-molecuul, dat wil zeggen één bacterie of een viraal deeltje, voldoende. Reactie van een aanvullende stap - DNA-synthese op het RNA-molecuul met behulp van het enzym reverse transcriptase - heeft laten RNA virussen zoals HCV virus testen. PCR is een proces in drie stappen, cyclisch herhaald: denaturatie, primer-hybridisatie, DNA-synthese( polymerisatie).De gesynthetiseerde hoeveelheid DNA wordt geïdentificeerd door ELISA of door elektroforese.

De PCR kan worden gebruik gemaakt van verschillende biologisch materiaal - serum of bloedplasma, schrapen van de urethra, biopsie, pleurale vloeistof, cerebrospinale vloeistof, etc. De eerste PCR werd gebruikt voor de diagnose van infectieziekten, zoals HBV, HCV, HBV, CMV-infectie, infectieuze seksueel overdraagbare aandoening( gonorroe, afval diynaya, myco plasma ureaplasmal infectie), tuberculose, HIV en dergelijke.d.

PCR voordeel bij de diagnose van infectieziekten via andere methoden studies is als volgt: ■

infectieus agens kan worden gedetecteerd in een biologisch milieu van het organisme, waaronder die materialen verkregen uit biopsie;

■ Diagnose van infectieziekten in de vroegste stadia van de ziekte;

■ kwantitatieve evaluatie van de resultaten van onderzoeken( hoeveel virussen of bacteriën zijn er in het onderzochte materiaal);

■ hoge gevoeligheid van de methode;bijvoorbeeld gevoeligheid van PCR detecteren HBV viraal DNA in het bloed is 0.001 pg / ml( bij benadering 4h102 kopieën / ml), terwijl de gevoeligheid van een DNA-hybridisatie onder toepassing vertakte probes - 2,1 pg / ml( bij benadering 7h105 kopieën / ml).