Kariotipēšana
Hromosomu pētīšanai visbiežāk tiek izmantoti īslaicīgi asins kultūru preparāti, kā arī kaulu smadzeņu šūnas un fibroblastu kultūras. Asins, kas tiek nogādāts laboratorijā ar antikoagulantu, tiek centrifugēts sarkano asins šūnu izgulsnēšanai, un leikocītus inkubē kultūras barotnē 2-3 dienas. Asins paraugam pievieno Phytohemag-glutinin, jo tas paātrina eritrocītu aglutināciju un stimulē limfocītu sadalīšanu. Vispiemērotākais hromosomu pētīšanas fāze ir mitozes metafāze, tāpēc kolhicīns tiek izmantots, lai pārtrauktu limfocītu sadalīšanu šajā posmā.Šīs zāles pievienošana kultūrai palielina to šūnu īpatsvaru, kas atrodas metafāzē, tas ir, šajā stadijā šūnu ciklā, kad hromosomas ir vislabāk redzamas. Katra hromosoma atkārtojas( ražo savu eksemplāru) un pēc atbilstošas krāsas ir redzama divu hromatīdu veidā, kas piestiprināti centromeram vai centrālajai sašaurinājumam. Pēc tam šūnas tiek apstrādātas ar hipotonisku nātrija hlorīda šķīdumu, kas ir fiksēts un krāsots.
Hromosomu krāsošanai tiek izmantots Romanovska-Giemsa krāsa, 2% acetaminomīns vai 2% acetazarīns. Tās pilnībā izolē hromosomas vienādi( parastā metode), un tās var izmantot, lai noteiktu cilvēka hromosomu ciparu anomālijas.
Lai iegūtu detalizētu priekšstatu par hromosomu struktūru, individuālo hromosomu identifikāciju( noteikšanu) vai to segmentiem, tiek izmantotas dažādas diferenciālas krāsošanas metodes. Visbiežāk izmantotās metodes ir Giemsa, kā arī G- un Q-locīšana. Ja mikroskopiskais prepa-
tiek novietots gar hromosomas garumu, tiek atklāta virkne krāsainu( heterohromatīnu) un krāsainu( euchromatin) lentu. Tādā veidā iegūtais šķērsvirziena svītra veids ļauj identificēt katru komplektā iekļauto hromosomu, jo svārstību svārstības un to lielumi katram pāri ir stingri individuāli un nemainīgi.
rata gar garumā hromosomu atklāj virkni iekrāso( heterochromatin) un krāsu( euchromatin) joslām. Tādā veidā iegūtais šķērsvirziena svītra veids ļauj identificēt katru komplektā iekļauto hromosomu, jo svārstību svārstības un to lielumi katram pāri ir stingri individuāli un nemainīgi.
AttēlsHumānās hromosomu shēmu kartes ar
diferenciālo krāsojumu. Zīm. Tika fotografētas cilvēka hromosomu shēmas ar atsevišķu šūnu metafāzes plātņu
diferenciālas krāsošanas shēmām. Atsevišķas hromosomas tiek sagrieztas no fotogrāfijām un ielīmētas uz papīra lapas kārtībā;šādu hromosomu attēlu sauc par kariotipu.
Papildu krāsošanas izmantošana, kā arī jaunas metodes hromosomu zāļu iegūšanai, kas ļauj garenizēt hromosomas, ievērojami palielina citoģenētiskās diagnostikas precizitāti.
Ir izveidota īpaša nomenklatūra, kas raksturo cilvēka kariotipu. Normāls vīrieša un sievietes kariotips ir attiecīgi 46, XY un 46, XX.Down's sindromā, kam raksturīga papildu hromosoma 21( trisomija 21) klātbūtne, sievietes kariotips aprakstīts kā 47, XX 21 + un vīriešiem - 47, XY, 21+.Hromosomas strukturālās anomālijas klātbūtnē ir jānorāda mainīta garā vai īsā rokas: burts p apzīmē īsu roku, q garu roku un t pārvietošanos. Tādējādi, kad tiek izdzēsta īsā hromosomas 5 daļa( "kaķu spiediena" sindroms), sievietes kariotips tiek raksturots kā 46, XX, 5p-.Bērna māte ar translokāciju. Dauna sindroms - 14/21 līdzsvarotas pārvietošanas nesējs ar 45, XX, t( 14q; 21q) kariotipu. Pārnēsājamā hromosoma veidojas, ja ilgstošās hromosomas 14 un 21 apvienojas, īsie pleci tiek zaudēti.
Katrs plecs ir sadalīts rajonos, un tie savukārt - segmentos, un tos un citus apzīmē ar arābu cipariem. Hromosomas centromērs ir sākumpunkts reģionu un segmentu skaitīšanai.
Tādējādi hromosomu topogrāfijā tiek izmantoti četri marķieri: hromosomu skaits, plecu simbols, platības numurs un segmenta numurs konkrētajā reģionā.Piemēram, ieraksts 6p21.3 nozīmē, ka tas ir 6. pāra hromosoms, tā īsais plecs, 21. apgabals, 3. segments. Ir papildu simboli, it īpaši pter - īsās rokas beigas, qter - garās rokas beigas.
Citogēniskā pētījuma metode ļauj atklāt deletions un citas izmaiņas hromosomās tikai apmēram 1 miljona bāzu( nukleotīdu) lielumā.