Polimerazės grandininė reakcija

PGR - Naujausi pasiekimai molekulinės genetikos, naudojamas sustiprinti DNR ir leidžia jums greitai sklinda in vitro

konkretų gabalas DNR( ty, apie bet kokį interesų genas) yra daugiau nei 200 000 kartų.Norėdami atlikti reakciją, pakanka turėti vienos ląstelės DNR medžiagą;PGR amplifikuotas DNR kiekis yra toks didelis, kad ši DNR gali būti tiesiog dažoma( naudojant radioaktyviuosius zondus po elektroforezės nereikia).Būtinas PGR vykdymas yra žinomos amplifikuotos DNR srities nukleotidų sekos, siekiant tinkamai parinkti dirbtinai sintetines pradmenis.

Šiuo metu, PGR yra procesas, vykstantis į vieną vamzdį ir susidedantis iš pasikartojančių pagausinimo ciklų( reprodukcijai, kopija) konkrečios DNR sekų, siekiant gauti pakankamai didelį kopijų skaičių, kad gali būti nustatytas naudojant elektroforezę.Vienas iš pagrindinių elementų reakcijos - "ptadmenis" - sintetiniai oligonukleoti-Dy, susidedantis iš 20-30 bazių Papildomas "svetainės"( vietovės), atkaitinimo( prijungimo) į identifikuojančia dalį šablono DNR.

PCR automatiškai įsijungia į programuojamą termostatą - termociklerį( termociklerį).Trijų pakopų ciklo, kurioje kopijos yra gaunamas identifikuojančią dalį DNR šablono, buvo pakartotas 30-50 kartų pagal iš anksto nustatytą šilumos ciklo programos-RA.Pirmoje ciklo oligoprimer hibridizuojasi su pirminiu DNR šablono, ir tada( vėlesnėse ciklų) ir naujai susintetintų DNR molekulių kaip jų kaupimosi reakcijos mišinio. Pastaruoju atveju, DNR sintezė nesibaigia dėl temperatūros pokyčių, ir pasiekus DNR polimerazės-amplifikuoti vannogo kontūro dalį, pagal kurį nustatoma naujai susintetintas DNR srities dydį, kad per vieną nukleotido.

Kaip aptikti DNR molekulių, gautų naudojant elektroforezę, pagal kurį atskyrimas yra atliktų amplifi-medžiaga kvalifikacijos dydžio amplikonų( amplifikaoijos produktų) metodu.

Naudojant PGR gali tiesiogiai ištirti lokalizacijos tariamų mutaciją arba polimorfinę svetainę, taip pat mokytis bet kurių kitų DNR ypatybes buvimą.