Analisis polimorfisme fragmen fragmen panjang

Penggunaan berbagai macam endonuklease restriksi untuk analisis DNA kromosom menunjukkan variabilitas yang sangat besar pada genom manusia. Bahkan perubahan kecil di daerah pengkodean dan regulasi gen struktural dapat menyebabkan penghentian sintesis protein tertentu atau hilangnya fungsinya dalam tubuh manusia, yang biasanya mempengaruhi fenotipe pasien. Namun, sekitar 90% genom manusia terdiri dari urutan non-coding yang lebih bervariasi dan mengandung banyak mutasi netral, atau polimorfisme, dan tidak memiliki ekspresi fenotipik. Situs polimorfik semacam itu( lokus) digunakan dalam diagnosis penyakit keturunan sebagai penanda genetik. Locus polimorfik hadir di semua kromosom dan terkait dengan tempat spesifik gen

.Setelah menentukan lokalisasi lokus polimorfik, adalah mungkin untuk menetapkan genom mana mutasi dikaitkan yang menyebabkan penyakit pada pasien.

Untuk mengisolasi daerah polimorfik DNA, enzim bakteri digunakan - enzim restriksi, yang merupakan produk restriksi. Mutasi spontan yang terjadi di situs polimorfik membuat mereka resisten atau, sebaliknya, sensitif terhadap tindakan enzim restriksi tertentu.

Variabilitas mutasi pada situs restriktifikasi dapat dideteksi dengan mengubah panjang fragmen DNA yang dibatasi, dengan memisahkannya dengan elektroforesis dan hibridisasi berikutnya dengan probe DNA yang spesifik. Dengan tidak adanya pembatasan di situs polimorfik, satu fragmen besar akan terdeteksi pada elektroforesis, dan jika ada, fragmen yang lebih kecil akan hadir. Adanya atau tidak adanya situs restriksi di lokus kromosom homolog yang identik memungkinkan label gen mutan dan normal yang andal dan melacak penularannya ke keturunannya. Jadi, dalam studi DNA pasien, di kedua kromosom dimana situs restriksi terdapat di wilayah polimorfik, fragmen DNA pendek akan terdeteksi pada elektroforesis. Pada pasien homozigot untuk mutasi yang memodifikasi situs restriksi polimorfik, fragmen dengan panjang lebih besar akan terdeteksi, dan pada fragmen heterozigot, fragmen pendek dan panjang akan diidentifikasi.