Analisis immunoenzyme( EIA) - Penyebab, gejala dan pengobatan. MF.

Immunosorbent Assay( ELISA) - penyelidikan laboratorium modern, di mana pencarian sedang antibodi atau antigen tertentu dalam darah untuk penyakit tertentu untuk mengidentifikasi tidak hanya etiologi tetapi juga tahap penyakit. Hasil ELISA dapat diberikan secara kualitatif dan kuantitatif.

Saat ini, ELISA digunakan dalam situasi berikut:

1) Mencari antibodi spesifik terhadap penyakit menular;
2) mencari antigen dari penyakit apapun( menular, venereal);
3) pemeriksaan status hormonal pasien;
4) pemeriksaan untuk oncomarker;
5) pemeriksaan untuk mengetahui adanya penyakit autoimun.

Keuntungan dari metode ELISA:

1) Spesifisitas dan sensitivitas metode ELISA yang tinggi( lebih dari 90%).
2) Kemampuan untuk menentukan penyakit dan memantau dinamika proses, yaitu perbandingan jumlah antibodi dalam interval waktu yang berbeda.
3) Ketersediaan diagnostik ELISA di institusi medis manapun.

Kekurangan relatif:

1) Identifikasi respon imun( antibodi), tapi bukan patogen itu sendiri.

Konsep dasar

Sebelum mengklarifikasi esensi metode ELISA, marilah kita secara singkat memeriksa beberapa konsep.
Antibodi( atau imunoglobulin - Ig) - protein tertentu yang dihasilkan oleh B - limfosit
( sel imun) dalam menanggapi masuknya ke dalam tubuh dari patogen infeksius( virus, bakteri, jamur, dll).Mensekresi imunoglobulin A( IgA), imunoglobulin E( IgE), imunoglobulin M( IgM), imunoglobulin G( IgG), imunoglobulin D( IgD).Mereka berbeda satu sama lain dalam bentuk molekul dan massa, paruh, partisipasi / non-partisipasi dalam proses infeksi, waktu deteksi dari saat infeksi. Jika kita mempertimbangkan berat molekul, maka sebagian besar di IgM adalah pentamer( 950.000 dalton), tidak seperti sisa Ig( dari 150 sampai 200.000 Da), sehingga IgM tidak dapat melewati penghalang plasenta. Oleh karena itu, pendeteksian IgM pada bayi berumur 1 tahun selalu merupakan pertanda infeksi pada janin. Dalam serum, sebagian besar imunoglobulin diwakili oleh IgG( 75-85%), dan IgE terendah( 0,003%).Dalam proses infeksius, hanya IgA, M, dan G. IgE yang terlibat langsung dalam proses infeksi, dan IgD hanya dapat dideteksi di jaringan kelenjar getah bening dan amandel, berperan dalam pembentukan imunitas lokal.kelas

imunoglobulin

Antigen - zat organik berat molekul tinggi, di patogen infeksius tertentu dan penyakit lainnya, serta zat-zat yang berbeda dimodifikasi sel yang dihasilkan dalam penyakit tertentu( penyakit autoimun, kanker).

Kompleks imun adalah kompleks antigen-antibodi yang terlibat dalam proses kekebalan tubuh. Apa metode berbasis IFA?

Beberapa varietas ELISA yang berbeda( langsung, tidak langsung, metode pemblokiran Pesaing), tetapi dalam prakteknya paling umum digunakan heterogen immunoassay enzim atau ELISA( enzyme linked immunosorbent assay) secara

dari immunoassay dari respon imun antigen dan antibodi untuk membentuk kompleks imun: antigen-antibodi, yang berakibat pada perubahan aktivitas enzimatik dari label tertentu pada permukaan antibodi. Metode

ELISA

istilah sederhana, proses ini dapat dibagi menjadi beberapa tahap:

1) Pada permukaan pelat dokter-lubang, pemeriksa adalah antigen dimurnikan patogen tertentu. Bila bahan biologis( serum darah) ditambahkan ke pasien, reaksi spesifik terjadi antara antigen ini dan antibodi yang diinginkan( imunoglobulin).Senyawa ini akan bertindak sebagai "antigen khusus" pada tahap selanjutnya.

2) Pada tahap ini, pembentukan IR( kompleks imun) adalah reaksi antara "antigen khusus" dan konjugat( ini adalah imunoglobulin yang diberi label dengan enzim peroksidase).Sebuah kromogen khusus ditambahkan. Hasil reaksi enzimatik ini adalah pembentukan zat berwarna di sumur piring, intensitas warnanya bergantung pada jumlah imunoglobulin( antibodi) yang terdapat pada bahan pasien.

3) Selanjutnya ada Interpretasi: fotometri menggunakan spektrofotometer multichannel membandingkan densitas optik dari bahan uji dengan kerapatan optik sampel kontrol, hasil pengolahan matematika. Jumlah antibodi pada pasien tergantung pada ketinggian densitas optik dari sumur.praktek umum

menggunakan 96 piring dengan baik.

jumlah( atau konsentrasi) dari antibodi dalam volume unit tertentu ketika mengukur densitas optik( OD) dari cairan sampel dihitung. Hasilnya kemudian dibandingkan dengan sampel kontrol.

harus diingat: untuk setiap sistem tes yang dikembangkan untuk memperhitungkan hasil kinerja individu, standar kinerja dan patologi( yaitu "nilai referensi").Ini harus dipertimbangkan ketika mengevaluasi hasil dari setiap studi kasus. Benar menafsirkan hasil laboratorium "nilai acuan" laboratorium lain. Hal ini juga salah untuk membandingkan hasil dari laboratorium yang berbeda bersama-sama. Bila pengaturan reaksi

ELISA dan memiliki nilai konsep seperti aviditas antibodi. Aviditas
antibodi - antibodi ini antigen mengikat kekuatan dan jumlah antigen yang terletak di interelasi dengan immnoglobulinami( antibodi).Aviditas sangat penting ketika menilai dugaan infeksi istilah, yang sangat penting dalam diagnosis infeksi primer pada wanita hamil.

Dasar tes aviditas antibodi terdiri dari pengobatan yang kompleks imun( antigen-antibodi) larutan urea untuk menghancurkan protein. Vysokoavidnye link tetap utuh, dan aviditas rendah hancur. Hasilnya diberikan sebagai indeks aviditas, dinyatakan sebagai persentase( %).Penyakit

Apa yang terdeteksi oleh ELISA-diagnosa?

1. Penyakit menular
1.1 Viral hepatitis A( IgM, G), B antigen -HBsAg, HBeAg, antibodi - IgM HBcorAg, Ig Total HBcorAg, IgG HBeAg), C( antibodi Ig M, G HCV), D( IgM,G), E( Ig M, G) dan lain-lain. Infeksi
1,2 HIV( IgG)
1,3 Cytomegalovirus infeksi( antibodi IgM, G)
1,4 Epstein-Barr infeksi atau mononkleoz( antibodi IgM, G EA, VCA, NA protein virus)
1,5 infeksi herpes( antibodi IgM, G)
1,6 Toksoplasmosis( antibodi IgM, G)
1,7 Rubella( IgM, G)
1,8 Campak( IgM, G), Brucellosis( IgM, G), pseudotuberculosis( IgM, G), salmonellosis( IgM, G), Shigellosis atau disentri(IgM, G), aspergillosis( IgM, G), ensefalitis, borreliosis, dan banyak lainnya Tick-borne.
1,9 parasitosis( giardiasis, toxocariasis, trichinosis, opistorhoz, echinococcosis, alveococcosis dan lain-lain) di mana terdeteksi IgG
1.10 STD yang( penyakit menular seksual melalui) - Mycoplasmosis( IgM, G), Ureaplasmosis( IgM, G), Chlamydia( IgA, M, G), Sifilis( IgG)
1.11 infeksi Helicobacter( IgG)

2. Penanda penyakit autoimun dan indeks kekebalan manusia ( IgE total, jumlah IgG, jumlah IgA, jumlah IgM, jumlah IgD, sekretorik IgA, IgG 2, IgG4, CRC beredar kompleks imun, IgA dan IgG antibodi terhadap gliadin dan lain-lain)

3. penanda Onkologichsekie ( FNTentang - tumor necrosis factor, CEA - antigen Carcinoembryonic, PSA - antigen spesifik prostat, hCG - human chorionic gonadotropin, CA 125, alveomutsin dan banyak lainnya)

4. Gangguan Reproduksi I( estradiol, progesteron, prolaktin, hormon testosteron, AFP AFP-FSH - follicle stimulating hormone dan lainnya

) 5. Penyakit tiroid( T3 bebas dan terikat, T4, tiroglobulin, peroksidase tiroid - TPO, thyroid stimulating hormone - TTG).

Daftar ini tidak berarti semua penyakit yang didiagnosis dengan ELISA.bahan

untuk analisis dan aturan ELISA pagar

bahan yang paling umum untuk reaksi ELISA - serum pasien, diambil pada waktu perut kosong. Bahan ini juga dapat berfungsi sebagai cairan serebrospinal, cairan ketuban, isi vitreous, lendir dari serviks kanal dan uretra penyeka.

Mempersiapkan pasien untuk pengiriman bahan untuk IFA

Darah diambil pada waktu perut kosong. Sebelum pengiriman darah tidak perlu mengambil obat-obatan.pengobatan khusus( antibakteri, antivirus, antiparasit, dan sebagainya) harus dihentikan minimal 2 minggu sebelum penelitian.

manufaktur IFA Tanggal

Enzim immunoassay dilakukan dengan cepat, di siang hari. Penundaan bisa terjadi di laboratorium yang berbeda karena akumulasi sejumlah sera.

Kemungkinan hasil diagnostik ELISA

Saat menilai hasil untuk infeksi tertentu, kelas antibodi terdeteksi dan jumlahnya penting. Hal ini tergantung tidak hanya pada etiologi infeksi( entah itu ada atau tidak), tetapi juga tahap yang diharapkan dari penyakit( akut, kronis), dan adanya infeksi aktif( akut atau eksaserbasi kronis) pada saat pemeriksaan.

Apa istilah perkiraan untuk munculnya antibodi( imunoglobulin-Ig)?

Antibodi paling awal adalah IgM .Identifikasi mereka bisa 1-3 minggu setelah kemungkinan infeksi, yang menandai fase akut dari proses infeksi. Situasi kedua dengan munculnya antibodi IgM adalah aktivasi( atau eksaserbasi) proses kronis. Antibodi IgM beredar rata-rata sekitar 3 bulan, kemudian jumlah mereka berangsur-angsur hilang. Namun, pada beberapa pasien, jumlah jejak IgM dapat dideteksi dalam 1-2 tahun sejak saat infeksi.

Sistem uji modern sangat sensitif, menghasilkan hasil positif palsu yang tidak spesifik( seringkali pada wanita hamil).Oleh karena itu, pada kelompok pasien ini, IgM positif harus diperiksa ulang!

Antibodi IgA muncul 2-4 minggu setelah infeksi, namun dalam jumlah yang cukup untuk deteksi - dalam sebulan. IgA serum disintesis oleh sel plasmatik limpa, kelenjar getah bening dan selaput lendir, konsentrat IgA berkonsentrasi pada selaput lendir untuk melakukan fungsi proteksinya - berpartisipasi dalam kekebalan lokal.

Sejak minggu ke 4 setelah infeksi antibodi IgG mulai muncul. Pada kebanyakan infeksi, titer mereka meningkat secara bertahap dengan jumlah maksimum pada waktu yang berbeda( rata-rata setelah 1,5-2 bulan), maka titer tetap pada tingkat rendah dan menunjukkan kekebalan. Dengan beberapa penyakit( mycoplasmosis, chlamydia, trikomoniasis), tingkat IgG tidak tinggi, hal ini menurunkan secara substansial karena kurangnya imunitas pada infeksi ini.

Varian deteksi antibodi pada kelas yang berbeda:

- Deteksi terisolasi antibodi IgM mengandaikan adanya infeksi
primer.
- Deteksi simultan IgM dan IgG dalam darah merupakan karakteristik untuk infeksi primer
dalam 2-3 bulan sebelumnya, dan juga dalam eksaserbasi penyakit kronis. Oleh karena itu, pada kehamilan, keberadaan IgM tidak selalu merupakan pertanda infeksi primer.
- Deteksi IgG terisolasi dapat mengindikasikan kekebalan terhadap penyakit,
dan infeksi kronis. Pada situasi kedua, jumlah antibodi( titer) juga penting, dan perubahan titer ini dalam dinamika. Biasanya, penelitian dilakukan pada interval 2-4-6 minggu.
- Deteksi IgA yang diisolasi atau dengan IgM menunjukkan adanya infeksi primer. Dengan
, kemunculan IgA bersama IgG diharapkan dapat mengaktifkan infeksi kronis( rata-rata 2 minggu dari saat eksaserbasi).

Definisi antibodi IgG IgG adalah tahap pelengkap yang sangat baik dalam diagnosis infeksi primer dari infeksi jangka panjang, yang memiliki signifikansi klinisnya, terutama dalam menilai risiko infeksi janin intrauterine. Deteksi IgG kelas rendah menunjukkan infeksi primer dan terdeteksi rata-rata 4-6 bulan setelah infeksi, kurang sering lagi. IgG dosis rendah memerlukan bukti laboratorium lain untuk infeksi primer( IgM).Antibodi tinggi merupakan pertanda penyakit kronis dan kejengkelannya, atau kekebalan yang terbentuk.

Fitur pada bayi: pada anak di bawah satu tahun, dan kadang-kadang 1,5 tahun dalam darah, IgG ibu beredar pada infeksi yang berbeda( yaitu penetrasi melalui plasenta dari ibu ke janin selama periode perkembangan janin).Itu sendiri bukan tanda infeksi saat ini. Jika pada usia yang sama IgM ditemukan( ingat bahwa IgM ibu tidak dapat menembus plasenta), maka ini adalah tanda infeksi intrauterin atau infeksi yang didapat setelah lahir.

Metode ELISA Kuantitatif

Hasil diagnostik ELISA( dengan bantuan enzim immunoassay) diberikan pada unit tertentu:
- Kepadatan optik( OP) dari sampel adalah konsentrasi antibodi spesifik per satuan volume. Semakin tinggi sampel OP, semakin tinggi konsentrasi antibodi. Beberapa hasil mengacu pada koefisien positif( KP) - ini juga densitas optik sampel.
- Unit konsentrasi antibodi( nanogram / mililiter atau ng / ml).
- Dalam bentuk titer serum: 1:20, 1:40, 1: 100, 1: 200, 1: 400, 1: 800, 1: 1200 dan seterusnya. Titer diagnostik( di mana penyakit didiagnosis, dan bukan fakta infeksi) untuk penyakit yang berbeda berbeda.
- Dalam bentuk simbol - "+", "-", "?"( +, ++, +++, ++++).
- Dalam bentuk penilaian kualitatif berdasarkan kriteria yang diberikan( positif atau negatif).

Adalah tepat untuk memperkirakan jumlah antibodi, varian dari deteksi kelas imunoglobulin, dan, akibatnya, untuk mengekspos stadium penyakit dan kebutuhan akan pengobatan hanya dapat dilakukan oleh dokter.

Seharusnya tidak dilupakan bahwa untuk sistem uji apa pun, "nilai referensi" mereka( varian norma) dikembangkan, bila melebihi satu atau lain penyakit yang didiagnosis( varian patologi).Untuk sistem uji yang berbeda, "nilai referensi" berbeda.

Perbandingan yang benar dari hasil ELISA yang diambil dalam dinamika hanya mungkin dilakukan jika diproduksi di laboratorium yang sama.

Dokter infektsionist Bykova N.I.