Réaction en chaîne de la polymérase
PCR est une nouvelle réalisation en génétique moléculaire, utilisée pour l'amplification de l'ADN et permet l'expansion rapide de la région spécifique de l'ADN
( c.-à-d. Tout gène d'intérêt) in vitro plus de 200 000 fois. Pour effectuer la réaction, il suffit d'avoir le matériel d'ADN d'une cellule;la quantité d'ADN amplifié par PCR est si grande que cet ADN peut simplement être coloré( en utilisant des sondes radioactives après l'électrophorèse n'est pas nécessaire).Une condition préalable à la réalisation de la PCR est la connaissance de la séquence nucléotidique de la région d'ADN amplifiée pour la sélection correcte des amorces synthétisées artificiellement.
Actuellement, la PCR est un processus qui se déroule dans un seul tube et consiste en des cycles répétés d'amplification( duplication, copie) de la séquence spécifique de la molécule d'ADN afin d'obtenir un nombre suffisant de copies identifiables par électrophorèse. L'un des composants clés de la réaction est "amorces" - oligonucléotides synthétiques, constitués de 20-30 bases, complémentaires de "sites"( sections) d'hybridation( fixation) au site identifié de l'ADN matrice.
PCR fonctionne automatiquement dans un thermostat programmable - thermocycleur( thermocycleur).Le cycle en trois étapes, qui aboutit à des répliques de la partie identifiable de l'ADN matrice, est répété 30 à 50 fois en fonction du programme prédéfini du thermocycleur. Dans le premier cycle, les oligopramères s'hybrident avec l'ADN matrice d'origine, puis( dans les cycles subséquents) et avec les molécules d'ADN nouvellement synthétisées lorsqu'elles s'accumulent dans le mélange réactionnel. Dans ce dernier cas, la synthèse d'ADN ne se termine pas par un changement du régime de température, mais par l'atteinte de la limite d'ADN polymérase de la région amplifiée, qui détermine la taille de la région d'ADN nouvellement synthétisée à moins d'un nucléotide.
En tant que méthode de détection des molécules d'ADN obtenues, on utilise une électrophorèse, au moyen de laquelle le matériau amplifié est divisé en fonction de la taille des amplicons( produits d'amplification).
A l'aide de la PCR, il est possible d'étudier directement les sites de localisation de mutations suspectées ou de sites polymorphes, et également d'étudier la présence de toute autre spécificité de l'ADN.