Análisis de inmunoenzimas( EIA) - Causas, síntomas y tratamiento. MF.
ensayo inmunoenzimático( ELISA) - investigación moderna de laboratorio, durante el cual la búsqueda es ser anticuerpos o antígenos específicos en la sangre para enfermedades específicas para identificar no sólo etiología sino también la etapa de la enfermedad. Los resultados de ELISA se pueden dar de forma cualitativa y cuantitativa.
Actualmente, ELISA se usa en las siguientes situaciones:
1) Buscar anticuerpos específicos contra cualquier enfermedad infecciosa;
2) búsqueda de antígenos de cualquier enfermedad( infecciosa, venérea);
3) examen del estado hormonal del paciente;
4) examen para oncomarkers;
5) examen para la presencia de enfermedades autoinmunes.
Ventajas del método ELISA:
1) Alta especificidad y sensibilidad del método ELISA( más del 90%).
2) La capacidad de determinar la enfermedad y controlar la dinámica del proceso, es decir, la comparación del número de anticuerpos en diferentes intervalos de tiempo.
3) Disponibilidad de diagnósticos ELISA en cualquier institución médica.
Deficiencia relativa:
1) Identificación de la respuesta inmune( anticuerpos), pero no del propio patógeno.
Conceptos básicos de
Antes de aclarar la esencia del método ELISA, examinemos brevemente algunos conceptos. Los anticuerpos
( o inmunoglobulinas - Ig) - proteínas específicas producidas por B - linfocitos
( células inmunes) en respuesta a la entrada en el cuerpo de un patógeno infeccioso( virus, bacterias, hongos, etc.).Secretar inmunoglobulina A( IgA), inmunoglobulina E( IgE), inmunoglobulina M( IgM), inmunoglobulina G( IgG), inmunoglobulina D( IgD).Se diferencian entre sí en forma molecular y masa, vida media, participación / no participación en procesos infecciosos, el momento de la detección desde el momento de la infección. Si tenemos en cuenta el peso molecular, el más él es IgM - es un pentámero( 950.000 Da), en contraste con el resto de Ig( de 150 a 200 000 Da), por lo IgM simplemente no puede pasar a través de la barrera placentaria. Por lo tanto, la detección de IgM en un niño de 1 año de edad siempre es un signo de infección en el feto. En el suero, la mayor parte de las inmunoglobulinas está representada por IgG( 75-85%) y la menor IgE( 0,003%).El proceso infeccioso implicado directamente tomando sólo IgA, M, G. IgE son un signo de reacciones y condiciones alérgicas, y IgD - sólo se puede detectar en el ganglio linfático y tejido de las amígdalas, desempeña un papel en la formación de la inmunidad local.clases de inmunoglobulinas
Antígenos - sustancias orgánicas de alto peso molecular, en particular los patógenos infecciosos y otras enfermedades, así como diferentes sustancias modificadas células producidas en una enfermedad dada( enfermedad autoinmune, cáncer).
El complejo inmune es un complejo antígeno-anticuerpo involucrado en el proceso inmune.¿En qué se basa el método IFA?
Varias variedades de ELISA distintos( ,null, método de bloqueo indirecto directo competidores), pero en la práctica los más comúnmente utilizados inmunoensayo enzimático heterogéneo o ELISA( ensayo enzimático de inmunoabsorción ligado) base
de inmunoensayo de la respuesta inmune del antígeno y anticuerpo para formar un complejo inmune: antígeno-anticuerpo, que da como resultado un cambio en la actividad enzimática de etiquetas específicas en la superficie de los anticuerpos. El método
ELISA
términos más simples, este proceso se puede dividir en varias etapas:
1) en la superficie de la placa médico hoyos, el examinador es antígeno purificado patógeno específico. Cuando se agrega un material biológico( suero sanguíneo) al paciente, se produce una reacción específica entre este antígeno y el anticuerpo deseado( inmunoglobulina).Este compuesto actuará como un "antígeno especial" en la próxima etapa.
2) En esta etapa de formación es IR( complejos inmunes) - la reacción entre el "antígeno específico" y el conjugado( esto inmunoglobulina marcada con la enzima peroxidasa).Se agrega un cromógeno especial. El resultado de esta reacción enzimática es la formación de sustancias coloreadas en los pocillos de la placa, la intensidad del color de los cuales depende del número de las inmunoglobulinas del paciente( anticuerpos) contenidos en el material.
3) Además hay Interpretación: fotometría utilizando un espectrofotómetro multicanal comparando la densidad óptica del material de ensayo con una densidad óptica de las muestras de control, resultados de procesamiento matemático. La cantidad de anticuerpo en el paciente depende de la altura de la densidad óptica de los pocillos.
práctica común utilizar las placas de 96 pocillos.se calcula cantidad
( o concentración) de anticuerpos en una unidad de volumen particular, cuando se mide la densidad óptica( OD) de la muestra de líquido. El resultado se compara entonces con una muestra control.
Debe recordarse: para cada sistema de prueba diseñada para tener en cuenta los resultados de rendimiento individual, normas de funcionamiento y la patología( es decir, "valor de referencia").Esto debe tenerse en cuenta al evaluar los resultados de cada estudio de caso. Interpretar correctamente los resultados de un laboratorio "valores de referencia" otro laboratorio. También es incorrecto comparar los resultados de diferentes laboratorios juntos. Al configurar reacciones
ELISA y tiene un valor concepto como avidez de los anticuerpos.anticuerpo Avidez
- este anticuerpo la fuerza de unión a antígeno y la cantidad del antígeno situado en interrelación con immnoglobulinami( anticuerpos).Avidez es de gran importancia en la evaluación de la supuesta infección del término, que es extremadamente importante en el diagnóstico de la infección primaria en mujeres embarazadas.
base de pruebas avidez del anticuerpo consiste en el tratamiento de complejo inmune( antígeno-anticuerpo) solución de urea con el fin de destruir la proteína. Vysokoavidnye vínculos permanecen intactos, y la baja avidez destruidos. El resultado se da como el índice de avidez, expresada como un porcentaje( %).
¿Qué enfermedades se detectan mediante ELISA-diagnóstico?
1. Las enfermedades infecciosas
1,1 hepatitis viral A( IgM, G), B antígenos -HBsAg, HBeAg, anticuerpo - IgM HBcorAg, Ig total de HBcorAg, IgG HBeAg), C( anticuerpo Ig M, G HCV), D( IgM,G), e( Ig M, G) y otros.
1,2 infección por el VIH( IgG)
1,3 infección por citomegalovirus( anticuerpos IgM, G)
1,4 Epstein-Barr infección o mononkleoz( IgM de anticuerpos, G para EA, VCA, proteínas de NA del virus)
1,5 infecciones herpéticas( anticuerpo IgM, G)
1,6 toxoplasmosis( IgM de anticuerpos, G)
1,7 rubéola( IgM, G)
1,8 sarampión( IgM, G), brucelosis( IgM, G), pseudotuberculosis( IgM, G), salmonelosis( IgM, G), shigelosis o disentería(IgM, G), aspergilosis( IgM, G), encefalitis, borreliosis, y muchos otros transmitidas por garrapatas.
1,9 parasitosis( giardiasis, toxocariasis, triquinosis, opistorhoz, equinococosis, alveococcosis y otros) en la que el detectado IgG
1,10 STD( enfermedades de transmisión sexual a través de) - Micoplasmosis( IgM, G), Ureaplasmosis( IgM, G), Chlamydia( IgA, M, G), la sífilis( IgG)
1,11 infección por Helicobacter( IgG)
2. Los marcadores de la enfermedad autoinmune y los índices de la inmunidad humana ( IgE total, el total de IgG, IgA total, IgM total, el total de IgD, IgA secretora, IgG 2, IgG4, CRC complejos inmunes circulantes, anticuerpos IgA e IgG a la gliadina y otros)
3. marcadores Onkologichsekie ( FNAcerca - factor de necrosis tumoral, CEA - antígeno carcinoembrionario, PSA - antígeno específico de la próstata, la hCG - gonadotropina coriónica humana, CA 125, alveomutsin y muchos otros)
4. Trastornos Reproductivos I( estradiol, progesterona, prolactina, testosterona, AFP AFP-FSH - hormona estimulante del folículo y otra
) 5. Enfermedades tiroides( T3 libre y unido, T4, tiroglobulina, peroxidasa tiroidea - TPO, hormona estimulante del tiroides - TTG).
Esta lista no es de ninguna manera todas las enfermedades se diagnostican mediante ELISA.material de
para ELISA análisis y regla valla
material más común para las reacciones de ELISA - suero de un paciente, tomada en un estómago vacío. El material también puede servir como líquido cefalorraquídeo, líquido amniótico, contenidos vítreas, moco del canal y uretrales hisopos cervicales.
pacientes que se preparan para el suministro de material para IFA
sangre se toma en un estómago vacío. Antes de la entrega de la sangre no es necesario tomar ninguna droga. El tratamiento específico( antibacteriano, antiviral, antiparasitario, etc.) debe ser detenido al menos 2 semanas antes del estudio.
fabricación IFA Fechas
El inmunoensayo enzimático se lleva a cabo rápidamente, durante el día. Los retrasos pueden ser en diferentes laboratorios debido a la acumulación de un cierto número de sueros.
Posibles resultados del diagnóstico de ELISA
Al evaluar los resultados para infecciones específicas, la clase de anticuerpos detectados y su número son importantes. No solamente afecta a la cuestión de la etiología de la infección( es decir, o no), pero la etapa estimada de la enfermedad( aguda y crónica), así como la presencia de infección activa( aguda o exacerbación de la crónica) en el momento de la encuesta.
¿Cuáles son los términos aproximados para la aparición de anticuerpos( inmunoglobulinas-Ig)?
Los primeros anticuerpos son IgM .Identifíquelos puede ser 1-3 semanas después de la posible infección, que caracteriza la fase aguda del proceso infeccioso. La segunda situación con la aparición de anticuerpos IgM es la activación( o exacerbación) del proceso crónico. Los anticuerpos IgM circulan en promedio unos 3 meses, luego su número desaparece gradualmente. Sin embargo, en algunos pacientes, se pueden detectar cantidades mínimas de IgM dentro de 1-2 años desde el momento de la infección.
Los sistemas de prueba modernos son altamente sensibles, lo que da como resultado resultados falsos positivos inespecíficos( a menudo en mujeres embarazadas).Por lo tanto, en este grupo de pacientes, la IgM positiva debe volver a analizarse.
Los anticuerpos IgA aparecen de 2 a 4 semanas después de la infección, pero en una cantidad suficiente para la detección, en un mes. Serum IgA sintetizada por las células plasmáticas del bazo, ganglios linfáticos y IgA de secreción de la mucosa se concentraron en las membranas mucosas para llevar a cabo su función protectora - implicados en la inmunidad local.
A partir de la 4ª semana después de la infección comienzan a aparecer los anticuerpos IgG .En la mayoría de las infecciones, su título aumenta gradualmente con un máximo en diferentes momentos( en promedio después de 1.5-2 meses), luego el título permanece en un nivel bajo e indica inmunidad. En algunas enfermedades( micoplasmosis, la clamidia, la tricomoniasis) Nivel de IgG no es alta, se reduce significativamente debido a la falta de inmunidad en estas infecciones.detección realizaciones
de anticuerpos de diferentes clases:
- detección aislada anticuerpo IgM presupone infección primaria
.
- Detección simultánea de IgM sangre y característico de la infección primaria IgG
en los 2-3 meses previos, así como exacerbación de la enfermedad crónica. Por lo tanto, en el embarazo, la presencia de IgM no siempre es un signo de infección primaria.
: la detección de IgG aislada puede indicar inmunidad a la enfermedad,
e infección crónica. En la segunda situación, la cantidad de anticuerpos( título) también es importante, y el cambio en este título está en la dinámica. Por lo general, los estudios se realizan a intervalos de 2-4-6 semanas.
: la detección de IgA aislada o con IgM indica una infección primaria. Con
, se espera que la aparición de IgA junto con IgG active la infección crónica( un promedio de 2 semanas desde el momento de la exacerbación).
Definición de avidez de anticuerpos IgG es un excelente complemento a la fase de diagnóstico de la infección primaria de la infección de muchos años que tiene su importancia clínica, especialmente cuando se evalúa el riesgo de infección intrauterina del feto. La detección de IgG de bajo grado indica una infección primaria y se detecta en promedio 4-6 meses después de la infección, con menor frecuencia. La IgG a dosis bajas requiere otra evidencia de laboratorio de infección primaria( IgM).Los anticuerpos altos son un signo de una enfermedad crónica y su agravación, o de una inmunidad formada.
especialmente en los lactantes: en niños menores de un año, e incluso a veces 1,5 años en la sangre circulante anticuerpos IgG maternas a diversas infecciones( es decir, no era su penetración a través de la placenta de la madre al feto en el útero).No es en sí mismo un signo de infección en el presente. Si a la misma edad se encuentran IgM( recuérdese que la IgM materna no puede penetrar la placenta), entonces esto es un signo de infección intrauterina o infección adquirida después del nacimiento.
método ELISA cuantitativo
resultados de diagnóstico ELISA( usando un analizador de inmunoensayo enzimático) se emite en unidades específicas:
- densidad óptica( OD) de la muestra - la concentración de anticuerpo específico por unidad de volumen. Cuanto mayor es la muestra OP, mayor es la concentración de anticuerpos. Algunos resultados se refieren al coeficiente de positividad( KP): esta es también la densidad óptica de la muestra.
- Unidades de concentración de anticuerpos( nanogramo / mililitro o ng / ml).
: en forma de títulos séricos: 1:20, 1:40, 1: 100, 1: 200, 1: 400, 1: 800, 1: 1200 y así sucesivamente. Los títulos diagnósticos( en los que se diagnostica la enfermedad, y no el hecho de la infección) para diferentes enfermedades son diferentes.
: en forma de símbolos: "+", "-", "?"( +, ++, +++, ++++).
- En la forma de una evaluación cualitativa basada en un criterio dado( positivo o negativo).
Es correcto estimar el número de anticuerpos, la variante de detección de clase de inmunoglobulinas y, en consecuencia, exponer la etapa de la enfermedad y la necesidad de tratamiento solo puede ser realizada por un médico.
No debe olvidarse que para cualquier sistema de prueba, se desarrollan sus "valores de referencia"( variantes de la norma), cuando se excede cuál de las dos enfermedades se diagnostica( variantes de patología).Para diferentes sistemas de prueba, los "valores de referencia" son diferentes.
Una comparación correcta de los resultados de ELISA en dinámica solo es posible si se fabrican en el mismo laboratorio.
Infectista médico Bykova N.I.