Polymerase-Kettenreaktion
-PCR ist eine neue Errungenschaft in der Molekulargenetik, die für die DNA-Amplifikation verwendet wird und die schnelle Expansion der spezifischen
-DNA-Region( dh jedes Gen von Interesse) in vitro mehr als 200.000 Mal ermöglicht. Um die Reaktion durchzuführen, ist es ausreichend, das DNA-Material einer Zelle zu haben;die Menge an DNA, die durch PCR amplifiziert wird, ist so groß, dass diese DNA einfach gefärbt werden kann( unter Verwendung von radioaktiven Sonden, nachdem eine Elektrophorese nicht erforderlich ist).Eine Voraussetzung für die Durchführung der PCR ist die Kenntnis der Nukleotidsequenz der amplifizierten DNA-Region für die korrekte Auswahl künstlich synthetisierter Primer.
Derzeit PCR ist ein Verfahren, das in einem einzigen Rohr auftritt, und bestehend aus sich wiederholenden Zyklen der Amplifikation( Vervielfältigung, Kopie) spezifischer DNA-Sequenzen, um eine ausreichend große Anzahl von Kopien zu erhalten, die durch Elektrophorese identifiziert werden kann. Eine der Schlüsselkomponenten der Reaktion sind "Primer" - synthetische Oligonukleotide, bestehend aus 20-30 Basen, komplementär zu "Stellen"( Abschnitten) der Anlagerung( Anheftung) an der identifizierten Stelle der Matrizen-DNA.
PCR läuft automatisch in einem programmierbaren Thermostaten - Thermocycler( Thermocycler).Der Drei-Stufen-Zyklus, der zu Replikaten des identifizierbaren Teils der Matrizen-DNA führt, wird 30 bis 50 Mal gemäß dem voreingestellten Programm des Thermocyclers wiederholt. Im ersten Zyklus hybridisieren die Oligopramere mit der ursprünglichen Matrizen-DNA und dann( in nachfolgenden Zyklen) und mit den neu synthetisierten DNA-Molekülen, wenn sie sich in der Reaktionsmischung anreichern. Im letzteren Fall wird die DNA-Synthese nicht aufgrund von Temperaturänderungen beenden, und auf die DNA-Polymerase-amplifizierte vannogo Grenzbereich erreicht, die innerhalb von einem Nukleotid der Größe der neu synthetisierten DNA-Region bestimmt.
Als Nachweismethode für die erhaltenen DNA-Moleküle wird eine Elektrophorese verwendet, mit der das amplifizierte Material entsprechend der Größe der Amplikons( Amplifikationsprodukte) aufgetrennt wird.
Mit Hilfe der PCR ist es möglich, die Lokalisationsorte mutmaßlicher Mutationen oder polymorpher Stellen direkt zu untersuchen und das Vorhandensein anderer spezifischer Merkmale der DNA zu untersuchen.