Polymerase-Kettenreaktion bei der Diagnose von Infektionskrankheiten

PCR - eine der Methoden zur DNA-Diagnostik ermöglicht, um die Anzahl von Kopien eines detektierbaren Teil des Genoms( DNA) von Bakterien oder Viren zu erhöhen, ist eine Million Mal eines DNA-Polymerase-Enzym verwendet wird. Das Segment der für ein gegebenes Genom getesteten Nukleinsäure wird mehrfach multipliziert( amplifiziert), wodurch es identifiziert werden kann. Zunächst wird ein DNA-Molekül von Bakterien oder Viren durch Erhitzen in zwei Ketten geteilt, dann in Gegenwart der synthetisierten DNA-Primer( Sequenz von Nukleotiden, die spezifisch für den definierte genomisch) ist, sie mit komplementären Abschnitten der DNA-Bindung, synthetisierte, um den zweiten Strang der Nukleinsäure nach jedem Primer in Gegenwart einer thermostabilen DNA-Polymerase. Zwei DNA-Moleküle werden erhalten. Der Prozess wird viele Male wiederholt. Zur Diagnose genügt ein Molekül DNA, also ein Bakterium oder ein Viruspartikel. Umsetzen eines zusätzlichen Schritt - die DNA-Synthese auf dem RNA-Molekül unter Verwendung des Enzyms Reverse Transkriptase - hat RNA-Viren, wie HCV-Virus zu testen, erlaubt. Die PCR ist ein dreistufiger Prozess, der zyklisch wiederholt wird: Denaturierung, Primer-Annealing, DNA-Synthese( Polymerisation).Die synthetisierte Menge an DNA wird durch ELISA oder Elektrophorese identifiziert. Serum oder Blutplasma, Abschaben der Harnröhre, Biopsie, Pleuraflüssigkeit, Zerebrospinalflüssigkeit usw. -

Die PCR kann verschiedenes biologisches Material verwendet werden, Die erste PCR wurde für die Diagnose von Infektionskrankheiten, wie HBV, HCV, HBV, CMV-Infektion, infektiösen sexuell übertragbaren Infektionen( Gonorrhoe, trash diynaya, myco Plasma, ureaplasmal Infektion), Tuberkulose, HIV und so weiter verwendet.e.

PCR Vorteil bei der Diagnose von Infektionskrankheiten gegenüber anderen Methoden Untersuchungen ist wie folgt: ■

infektiöses Agens kann in einem beliebigen biologischen Umgebung des Organismus nachgewiesen werden, einschließlich den Materialien, die durch Biopsie erhalten werden;

■ Diagnose von Infektionskrankheiten in den frühesten Stadien der Krankheit;

■ quantitative Auswertung der Studienergebnisse( wie viele Viren oder Bakterien sind im Untersuchungsmaterial enthalten);

■ hohe Empfindlichkeit der Methode;z. B. Empfindlichkeit von PCR HBV Virus-DNA im Blut zu detektieren, ist 0.001 pg / ml( etwa 4h102 Kopien / ml), während die Empfindlichkeit eines DNA-Hybridisierungsverfahren unter Verwendung von verzweigten Sonden - 2,1 pg / ml( etwa 7h105 Kopien / ml).