karyotypebestemmelse
Til undersøgelse af kromosomer anvendes kortfristede blodkulturpræparater, såvel som knoglemarvsceller og fibroblastkulturer oftest. Blodet leveret til laboratoriet med antikoagulant underkastes centrifugering til udfældning af røde blodlegemer, og leukocytter inkuberes i dyrkningsmediet i 2-3 dage. Phytohemag-glutinin tilsættes til blodprøven, da det accelererer agglutination af erythrocytter og stimulerer opdelingen af lymfocytter. Den mest egnede fase til undersøgelsen af kromosomer er mitos metafase, så colchicin anvendes til at standse opdelingen af lymfocytter på dette stadium. Tilføjelse af dette lægemiddel til kulturen fører til en forøgelse af andelen af celler, der er i metafase, det vil sige på scenen af cellecyklussen, når kromosomerne ses bedst. Hver kromosom replikerer( producerer sin egen kopi), og efter passende farvning er synlig i form af to kromatider fastgjort til centromeren eller den centrale indsnævring. Cellerne behandles derefter med en hypotonisk natriumchloridopløsning, fast og farvet.
For farvning af kromosomer anvendes Romanovsky-Giemsa-farvestoffet, 2% acetaminomin eller 2% acetazarin hyppigere. De pletter helt og holdent kromosomer, ensartet( rutinemetoden) og kan bruges til at identificere numeriske anomalier af menneskelige kromosomer.
For at få et detaljeret billede af strukturen af kromosomer, identifikation( identifikation) af individuelle kromosomer eller deres segmenter, anvendes forskellige metoder til differentiel farvning. De mest anvendte metoder er Giemsa, såvel som G- og Q-bøjning. Når mikroskopi præparativ
rata langs længden af kromosomet afslører en række farvede( heterochromatin) og umalet( eukromatin) bånd. Karakter tværgående ischerchennos opmærkes opnået således gør det muligt at identificere hvert kromosom i sættet, fordi vekslen af bands og deres dimensioner er strengt individuelle og er konstant for hvert par.
rata langs længden af kromosomet afslører en række farvede( heterochromatin) og umalet( euchromatin) bånd. Karakter tværgående ischerchennos opmærkes opnået således gør det muligt at identificere hvert kromosom i sættet, fordi vekslen af bands og deres dimensioner er strengt individuelle og er konstant for hvert par.
Fig. Skematiske kort over menneskelige kromosomer med differentiel farvning af
Fig. Skematiske kort over menneskelige kromosomer med differentiel farve af
-metafaseplader af individuelle celler fotograferes. Individuelle kromosomer skæres fra fotografierne og indsættes på papirarket i rækkefølge;Et sådant billede af kromosomer kaldes en karyotype. Ansøgning
yderligere farvning, samt nye fremgangsmåder til fremstilling af kromosomale præparater, der tillader strækning af kromosom i længden, øge nøjagtigheden af cytogenetiske diagnose.
En særlig nomenklatur er blevet udviklet for at beskrive den menneskelige karyotype. Den normale karyotype af en mand og en kvinde er udpeget som henholdsvis 46, XY og 46, XX.Når Downs syndrom karakteriseret ved tilstedeværelsen af et ekstra kromosom 21( trisomi 21), en kvinde beskrives som en karyotype 47, XX + 21 og mændene - 47, XY, 21+.I nærvær af kromosom strukturelle abnormiteter skal angive en ændret lang eller kort skulder med bogstavet p er korte arm, q - de lange arme, t - translokation. Når den korte arm af kromosom 5( "cat-scream" syndromet) er slettet, beskrives den kvindelige karyotype som 46, XX, 5p-.Moderen til et barn med translokations Down syndrom - en bærer med en afbalanceret translokation på 14/21 har en karyotype på 45, XX, t( 14q, 21q).Translokation kromosomet dannes ved at sammenlægge den lange arm af kromosom 14 og 21, er de korte arme tabt.
Hver skulder er opdelt i distrikter, og de til gengæld - ind i segmenter, og de og andre betegnes af arabiske tal. Kromosomens centromere er udgangspunktet for tælling af regioner og segmenter.
Således anvendes fire markører til kromosomtopografi: kromosomnummer, skuldersymbol, områdenummer og segmentnummer inden for en given region. For eksempel 6p21.3 rekord betyder, at vi taler om det 6. kromosompar, dens korte arm, område 21, segment 3. Der er flere valgfrie tegn, især pter - enden af den korte arm, qter - for enden af den lange arm. Cytogenetiske undersøgelser
fremgangsmåde tillader at detektere sletninger og andre ændringer i kromosomer kun en størrelse på ca. 1 million baser( nukleotider).