Polymerázová řetězová reakce v diagnostice infekčních onemocnění

PCR - jedna z metod pro diagnostiku DNA, které umožňují zvýšit počet kopií detekovatelné části genomu( DNA) bakterií nebo virů, je miliónkrát za použití DNA polymerázy. Segment nukleové kyseliny testované pro daný genom je mnohokrát( zesílen), což umožňuje identifikaci. Za prvé, je molekula DNA bakterie nebo viry zahříváním rozdělena do dvou řetězců, pak v přítomnosti syntetizovaných DNA primerů( sekvence nukleotidů specifických pro definované genomového) je se vazba s komplementárními úseky DNA, syntetizuje druhé vlákno nukleové kyseliny po každého primeru v přítomnosti termostabilní DNA polymerázy. Získaly se dvě molekuly DNA.Proces se opakuje mnohokrát. Pro diagnózu postačí jedna molekula DNA, tedy jedna bakterie nebo virové částice. Reakcí další krok - syntéza DNA v molekule RNA za použití enzymu reverzní transkriptázy - umožnila testovat RNA viry, jako je virus HCV.PCR je třístupňový proces, opakuje se cyklicky: denaturace, žíhání primeru, syntéza DNA( polymerace).Syntetizované množství DNA se identifikuje ELISA nebo elektroforézou.

PCR lze použít různé biologického materiálu - sérum nebo krevní plazmy, škrábání z močové trubice, biopsie, pleurální tekutiny, cerebrospinální tekutiny, atd. První PCR byla použita pro diagnostiku infekčních chorob, jako je HBV, HCV, HBV, CMV infekce, infekční sexuálně přenášené infekce( kapavka, odpadky diynaya, Myco plazmy, ureaplasmal infekce), tuberkulóza, HIV, a tak dále.e.

PCR výhodou v diagnostice infekčních onemocnění než ostatní metody studie je následující:

■ infekční agens může být detekována v jakémkoli biologickém prostředí organismu, včetně těch materiálů, získaných biopsií;

■ Diagnostika infekčních onemocnění v nejranějších stádiích onemocnění;

■ možné kvantitativní vyhodnocení výsledků výzkumu( jako je virus nebo bakterie obsažené v materiálu);

■ vysoká citlivost metody;například citlivost PCR pro detekci HBV virové DNA v krvi, je 0,001 pg / ml( přibližně 4h102 kopií / ml), zatímco citlivost metody DNA hybridizací za použití sond rozvětvené - 2,1 pg / ml( přibližně 7h105 kopií / ml).