Karyotypizace

Pro studium chromozomů se nejčastěji používají krátkodobé přípravky pro kultivaci krve, stejně jako buňky kostní dřeně a fibroblasty. Krev dodaná do laboratoře s antikoagulantem se podrobí odstředění pro srážení červených krvinek a leukocyty se inkubují v kultivačním médiu po dobu 2-3 dnů.Do vzorku krve se přidává fytohemaglutinin, protože zrychluje aglutinaci erytrocytů a stimuluje rozdělení lymfocytů.Nejvhodnější fází pro studium chromozomů je metafáze mitózy, proto se kolchicin používá k zastavení rozdělení lymfocytů v této fázi. Přidání tohoto léčiva do kultury vede ke zvýšení podílu buněk, které jsou v metafázi, tj. Ve fázi buněčného cyklu, kdy jsou chromozomy nejlépe vidět. Každý chromozóm se replikuje( produkuje vlastní kopii) a po patřičném zbarvení je viditelný ve formě dvou chromatid připojených k centroméru nebo centrálnímu zúžení.Buňky se pak ošetřují hypotonickým roztokem chloridu sodného, ​​fixují se a barví se.

Pro barvení chromozomů se častěji používá barvivo Romanovsky-Giemsa, 2% acetaminomin nebo 2% acetazarin. Omezují chromozomy úplně, jednotně( rutinní metoda) a mohou být použity k identifikaci číselných anomálií lidských chromozomů.

Pro získání detailního obrazu struktury chromozomů, identifikace( určení) jednotlivých chromozomů nebo jejich segmentů se používají různé metody diferenciálního barvení.Nejčastěji používané metody jsou Giemsa, stejně jako G-a Q-ohýbání.Při mikroskopické dávce prepa-

podél délky chromozomu je odhalena řada barvených( heterochromatinových) a nelakovaných( euchromatinových) pásů.Takto získaná povaha příčného proužku umožňuje identifikovat každý chromozom v sadě, protože střídání pruhů a jejich velikosti jsou pro každý pár přísně individuální a konstantní.

rata podél délky chromozomu odhaluje řadu barvených( heterochromatin) a nelakovaných( euchromatin) pásů.Takto získaná povaha příčného proužku umožňuje identifikovat každý chromozom v sadě, protože střídání pruhů a jejich velikosti jsou pro každý pár přísně individuální a konstantní.

Obr. Schematické mapy lidských chromozómů s diferenciálním zbarvením

Obr. Schematické mapy lidských chromozomů s diferenciálním zbarvením

Metaphasových destiček jednotlivých buněk jsou fotografovány. Jednotlivé chromozomy jsou vyříznuty z fotografií a vkládány na list papíru;takový obraz chromozomů se nazývá karyotyp.

Použití dodatečného barvení, stejně jako nové metody pro získání chromozomálních léků, které dovolují délku dlouhých chromozomů, významně zvyšují přesnost cytogenetické diagnostiky.

Zvláštní nomenklatura byla vyvinuta pro popis lidského karyotypu. Normální karyotyp muže a ženy je označen jako 46, XY a 46, XX.U Downova syndromu, charakterizovaného přítomností dalšího chromozomu 21( trisomie 21), je karyotyp ženy popsán jako 47, XX 21 + a muži - 47, XY, 21+.Při přítomnosti strukturální anomálie chromozomu je nutné označit změněné dlouhé nebo krátké rameno: písmeno p označuje krátké rameno, q dlouhé rameno a translokaci. Takže když je odstraněno krátké rameno chromozomu 5( syndrom kočky), je ženský karyotyp popsán jako 46, XX, 5p-.Matka dítěte s translokací Downův syndrom - nosičem vyvážené translokace 14/21 má karyotyp 45, XX, t( 14q, 21q).Translokační chromozom se vytváří při spojení dlouhých ramen chromozomu 14 a 21, krátké ramena se ztrácejí.

Každé rameno je rozděleno do okrsků a naopak - na segmenty a ty a další jsou označeny arabskými číslicemi. Centromery chromozomu jsou výchozím bodem pro počítání oblastí a segmentů.

Pro topografii chromozomů se používá čtyři markery: číslo chromosomu, symbol ramen, číslo oblasti a číslo segmentu v dané oblasti. Například záznam 6p21.3 znamená, že se jedná o chromozom 6. páru, jeho krátké rameno, oblast 21, segment 3. Existují další symboly, zejména pter - konec krátkého ramene, qter - konec dlouhého ramene.

Cytogenetická metoda vyšetření umožňuje detekovat delece a jiné změny v chromozomech pouze ve velikosti asi 1 milionu bází( nukleotidů).