Polymerázová reťazová reakcia

PCR je nový úspech molekulárnej genetiky, ktorý sa používa na amplifikáciu DNA a umožňuje rýchlu expanziu špecifickej oblasti

DNA( tj akýkoľvek záujmový gén) in vitro viac ako 200 000 krát. Na uskutočnenie reakcie postačuje mať DNA materiál jednej bunky;množstvo DNA amplifikovanej pomocou PCR je také veľké, že táto DNA môže byť jednoducho zafarbená( použitím rádioaktívnych sond po elektroforéze sa nevyžaduje).Predpokladom na vykonanie PCR je znalosť nukleotidovej sekvencie amplifikovanej oblasti DNA pre správnu selekciu umelo syntetizovaných primérov.

V súčasnej dobe, PCR je proces, ktorý sa vyskytuje v jednej skúmavke a skladajúci sa z opakujúcich sa cyklov amplifikácie( reprodukcia, kópia) špecifických DNA sekvencií, aby sa získal dostatočne veľký počet kópií, ktoré môžu byť identifikované pomocou elektroforézy. Jedným z kľúčových zložiek reakcie - "priméry" - syntetické oligonukleoti-dy skladajúci sa z 20-30 báz komplementárne "stránky"( oblasti) žíhanie( spojenia) k identifikovateľné časti templátu DNA.

PCR beží automaticky v programovateľnom termostate - termocykle( termocykle).Trojstupňový cyklus, ktorý vedie k replikám identifikovateľnej časti templátovej DNA, sa opakuje 30 až 50 krát v súlade s prednastaveným programom tepelného cyklovača. V prvom cykle oligorámy hybridizujú s originálnou templátovou DNA a potom( v nasledujúcich cykloch) as novo syntetizovanými molekulami DNA, ktoré sa hromadia v reakčnej zmesi. V druhom prípade sa syntéza DNA končí nie kvôli zmene v teplotnom režime, ale po dosiahnutí hranice DNA polymerázy amplifikovanej oblasti, ktorá určuje veľkosť novo syntetizovanej DNA oblasti do jedného nukleotidu.

Ako metóda detekcie získaných molekúl DNA sa používa elektroforéza, pomocou ktorej sa amplifikovaný materiál rozdelí podľa veľkosti amplikonov( produkty amplifikácie).

Pomocou PCR sa môže priamo skúmať lokalizačné domnelú mutácii alebo polymorfné miesto, ako aj pre štúdium prítomnosť akýchkoľvek iných špecifických vlastností DNA.