Analys av restriktionsfragmentlängdspolymorfism

Den vida användningen av olika restriktionsendonukleaser för analys av kromosomalt DNA avslöjade en stor variation i det mänskliga genomet.Även små förändringar i den kodande och reglerande regioner av de strukturella generna kan leda till uppsägning av en specifik proteinsyntes eller till förlust av dess funktion i den mänskliga kroppen som vanligtvis påverkar fenotypen hos patienten. Emellertid ungefär 90% av det humana genomet består av ickekodande sekvenser som är mer flyktiga och ger ett flertal så kallade neutrala mutationer eller polymorfismer och har ingen fenotypisk expression. Sådana polymorfa ställen( loci) används vid diagnos av ärftliga sjukdomar som genetiska markörer. Polymorfa loci finns närvarande i alla kromosomer och är kopplade till en specifik plats för

-genen. Efter att ha bestämt lokaliseringen av det polymorfa locuset, är det möjligt att bestämma med vilket genom en mutation är associerad som orsakade sjukdomen i patienten.

För att isolera polymorfa regioner av DNA används bakteriella enzymer - restriktionsenzymer, vars produkt är restriktionsställen. Spontana mutationer som uppträder på polymorfa ställen gör dem resistenta eller omvänt känsliga för verkan av ett specifikt restriktionsenzym.

Mutationsvariabilitet i restriktionsställen kan detekteras genom ändring av längden av de bundna DNA-fragmenten genom att separera dem med användning av elektrofores och efterföljande hybridisering med specifika DNA-prober. I frånvaro av restriktion på en polymorf plats kommer ett stort fragment att detekteras på elektroforegrammerna och, om närvarande, kommer ett mindre fragment att vara närvarande. Närvaron eller frånvaron av en restriktionsplats i identiska loci av homologa kromosomer gör det möjligt att på ett tillförlitligt sätt märka mutant- och normalgenen och spåra dess överföring till avkomman. I studien av DNA hos patienter, i både kromosomer, av vilka en restriktionsplats är närvarande i den polymorfa regionen, kommer detekteras korta DNA-fragment på elektroforen. Patienter homozygota för mutationen, som ändrar ett polymorft restriktionsställe kommer att identifieras fragment av större längd och heterozygot - kort och lång fragment.