Кариотинг
За истраживање хромозома најчешће се користе краткотрајни препарати крвне културе, као и ћелије коштане сржи и културе фиброблава.Крв која се испоручује лабораторији антикоагулантом подвргава се центрифугирању за преципитацију црвених крвних зрнаца, а леукоцити се инкубирају у медијуму за културу 2-3 дана.Фитохемаг-глутинин се додаје у узорак крви, јер убрзава аглутинацију еритроцита и подстиче поделу лимфоцита.Најприкладнија фаза за проучавање хромозома је метафаза митозе, тако да се колхицин користи за заустављање поделе лимфоцита у овој фази.Додавање овог лијека култури доводи до повећања пропорције ћелија које се налазе у метафази, односно у фази ћелијског циклуса, када се најбоље виде хромозоми.Сваки хромозом се реплицира( производи сопствену копију) и након одговарајуће боје је видљив у облику два хроматида која су причвршћена за центромере или централну констрикцију.Ћелије се затим третирају хипотоницним раствором натријум хлорида, фиксираним и обојеним.
За бојење хромозома чешће се користи Романовски-Гиемса боја, 2% ацетаминомина или 2% ацетазарина.Они у потпуности обојавају хромозоме, униформно( рутинска метода) и могу се користити за идентификацију нумеричких аномалија хромозома човека.
Да би добили детаљну слику структуре хромозома, идентификацију( одређивање) појединих хромозома или њихових сегмената, користе се различите методе диференцијалног бојења.Најчешће коришћене методе су Гиемса, као и Г- и К-савијање.Када је микроскопска припрема
дуж дужине хромозома откривена серија обојених( хетерохроматин) и необојеног( еухроматин) опсега.Природа попречне стезања, добијена на овај начин, омогућава идентификацију сваког хромозома у скупу, с обзиром да су промене пругама и њихове величине строго индивидуалне и константне за сваки пар.
рата дуж дужине хромозома открива серију обојених( хетерохроматин) и необојеног( еухроматин) опсега.Природа попречне стезања, добијена на овај начин, омогућава идентификацију сваког хромозома у скупу, с обзиром да су промене пругама и њихове величине строго индивидуалне и константне за сваки пар.
Фиг.Схематске мапе хуманих хромозома са диференцијалном бојом
Сл.Сликовне мапе хуманих хромозома са диференцијалном бојом
метафазних плоча појединачних ћелија се фотографишу.Појединачни хромозоми се пресецају са фотографија и залепе на листу папира;Таква слика хромозома се назива кариотипом.
Коришћење додатног бојења, као и нове методе за добијање хромозомских лекова који омогућавају истезање хромозома у дужини, значајно повећавају тачност цитогенетске дијагностике.
Специјална номенклатура развијена је да опише људски кариотип.Нормални кариотип мушкарца и жене означен је као 46, КСИ и 46, КСКС, респективно.У Довновом синдрому, који се карактерише присуством додатног хромозома 21( трисомија 21), кариотип жене је описан као 47, КСКС 21 + и мушкарци - 47, КСИ, 21+.У присуству структурне аномалије хромозома, потребно је указати на измијењену дугу или кратку руку: слово п означава кратку руку, к дугу руку и т а транслокацију.Дакле, када се обриси краћа рука хромозома 5( синдром "мачка-крик"), женски кариотип је описан као 46, КСКС, 5п-.Мајка детета са транслокацијом Довнов синдром - носилац уравнотежене транслокације 14/21 има кариотип од 45, КСКС, т( 14к, 21к).Хромозом транслокације формира се када се дуга крака хромозома 14 и 21 спајају, кратка рамена су изгубљена.
Свако раме дели се на округе, а заузврат - у сегменте, а оне и друге означавају арапским бројевима.Центромера хромозома је полазна тачка за бројање региона и сегмената.
Тако се користе четири маркера за топографију хромозома: број хромозома, симбол рамена, број подручја и број сегмента у датом региону.На пример, запис 6п21.3 значи да је хромозом шестог пара, његов краћи крак, регион 21, сегмент 3. Постоје додатни симболи, посебно птер - крај кратке руке, ктер - крај дугачке руке.
Цитогенетичка метода истраге омогућава детекцију делеција и других промена хромозома само у величини од око милион база( нуклеотида).