Analiza polimorfismului lungimii fragmentului de restricție

Utilizarea pe scară largă a diferitelor endonucleaze de restricție pentru analiza ADN-ului cromozomial a evidențiat o variabilitate uriașă în genomul uman. Chiar și modificările mici în regiunile de codificare și reglare ale genelor structurale pot duce la terminarea sintezei unei anumite proteine ​​sau la pierderea funcției sale în organismul uman, care afectează de obicei fenotipul pacientului. Totuși, aproximativ 90% din genomul uman constă din secvențe necodificatoare care sunt mai variabile și conțin multe așa numite mutații neutre sau polimorfisme și nu au o expresie fenotipică.Astfel de situri polimorfe( loci) sunt utilizate în diagnosticul bolilor ereditare ca markeri genetici. Locurile polimorfe sunt prezente în toate cromozomii și sunt legate de un situs specific al genei

.După determinarea localizării locusului polimorf, este posibil să se stabilească cu care genom este asociată o mutație care a cauzat boala la pacient.

Pentru a izola regiunile polimorfe ale ADN-ului, se folosesc enzime bacteriene - enzime de restricție, ale căror produse sunt situsuri de restricție. Mutațiile spontane care apar în locurile polimorfe le fac rezistente sau, invers, sensibile la acțiunea unei enzime de restricție specifice.variabilitate

mutaționale în situri de restricție pot fi detectate printr-o schimbare a lungimii fragmentelor de ADN restriktsirovannyh prin separarea lor prin electroforeză urmată de hibridizare cu sonde ADN specifice.În absența unei restricții într-un sit polimorfic, un fragment mare va fi detectat pe electroforegrame și, dacă este prezent, va fi prezent un fragment mai mic. Prezența sau absența unui situs de restricție în locurile identice ale cromozomilor omologi face posibilă etichetarea fiabilă a genei mutante și normale și urmărirea transmiterii acesteia la descendenți. Astfel, în studiul ADN-ului pacienților, în ambele cromozomi din care este prezent un situs de restricție în regiunea polimorfă, fragmente de ADN scurte vor fi detectate pe electrophore. Pacienții homozigoți pentru mutația, care se schimbă un situs de restricție polimorfe vor fi identificate fragmente de lungime mai mare și în heterozigotă - scurt și fragmente lungi.