karyotyping
Pentru studiul cromozomilor, cel mai adesea se utilizează preparate de culturi de sânge pe termen scurt, precum și celule de măduvă osoasă și culturi fibroblaste. Sângele livrat în laborator cu anticoagulant este supus centrifugării pentru precipitarea celulelor roșii din sânge și leucocitele sunt incubate în mediul de cultură timp de 2-3 zile. Phytohemag-glutinina este adăugată la proba de sânge, deoarece accelerează aglutinarea eritrocitelor și stimulează divizarea limfocitelor. Faza cea mai potrivită pentru studiul cromozomilor este metafaza mitozei, astfel încât colchicina este utilizată pentru a opri divizarea limfocitelor în această etapă.Adăugarea acestui medicament în cultură conduce la o creștere a proporției de celule care sunt în metafază, adică în stadiul ciclului celular, când cromozomii sunt cel mai bine văzuți. Fiecare cromozom replică( produce o copie proprie) și după o colorare corespunzătoare este vizibilă sub forma a două cromatide atașate la centromere sau constricție centrală.Celulele sunt apoi tratate cu o soluție hipotonică de clorură de sodiu, fixată și colorată.Pentru colorarea cromozomi
utilizate frecvent Romanowsky-Giemsa colorant, 2% sau 2% atsetarsein atsetkarmin. Ei pătrund în întregime cromozomii, uniform( metoda de rutină) și pot fi utilizați pentru a identifica anomaliile numerice ale cromozomilor umane.
Pentru a obține o imagine detaliată a structurii cromozomilor, identificarea( determinarea) cromozomilor individuali sau a segmentelor acestora, se utilizează diferite metode de colorare diferențială.Metodele cele mai frecvent utilizate sunt Giemsa, precum și G-și Q-îndoire. Atunci când rata microscopie
preparativă pe lungimea cromozomului relevă un număr de colorat( heterocromatină) și benzi nevopsită( eucromatină).Natura translucției transversale, obținută în acest fel, face posibilă identificarea fiecărui cromozom din set, deoarece alternanța dungilor și dimensiunile lor sunt strict individuale și constante pentru fiecare pereche. Rata
de-a lungul lungimii cromozomului dezvăluie o serie de benzi colorate( heterochromatin) și nevăzute( eucromatin).Natura translucției transversale, obținută în acest fel, face posibilă identificarea fiecărui cromozom din set, deoarece alternanța dungilor și dimensiunile lor sunt strict individuale și constante pentru fiecare pereche.
Fig. Scheme schematice ale cromozomilor umani cu colorare diferențială a
Fig. Schemele hatice ale cromozomilor umani cu colorare diferențială a plăcilor metaphase
ale celulelor individuale sunt fotografiate. Cromozomii individuali sunt tăiați din fotografii și lipiți pe foaia de hârtie în ordine;o astfel de imagine a cromozomilor se numește un cariotip.
Aplicație de colorare suplimentară, precum și noi metode de preparare a preparatelor cromozomiale, care sa permita intindere a cromozomului în lungime, crește semnificativ acuratețea diagnosticului citogenetic.
Sa elaborat o nomenclatură specială pentru a descrie cariotipul uman. Cariotipul normal al unui bărbat și al unei femei este desemnat ca 46, XY și 46, respectiv XX.Când sindromul Down caracterizat prin prezența unui cromozom suplimentar 21( trisomia 21), o femeie descrisă ca un cariotip 47, XX + 21 și bărbați - 47, XY, 21+.În prezența unor anomalii structurale ale cromozomilor trebuie să specifice un umăr modificat lung sau scurt cu litera p sunt brațul scurt, q - brațe lungi, t - translocare. Astfel, atunci când bratul scurt al cromozomului 5( sindromul "scânteie pisică") este șters, cariotipul feminin este descris ca 46, XX, 5p-.Mama unui copil cu translocație Sindromul Down - un purtător cu o translocație echilibrată de 14/21 are un cariotip de 45, XX, t( 14q, 21q).Cromozomul de translocație se formează atunci când brațele lungi ale cromozomului 14 și 21 se îmbină, în timp ce umerii scurți se pierd.
Fiecare umăr este împărțit în cartiere, iar pe rând - în segmente, iar cele și altele sunt marcate cu cifre arabe. Centromerele cromozomului reprezintă punctul de plecare pentru numărarea regiunilor și segmentelor.
Astfel, patru topografiere sunt utilizate pentru topografia cromozomilor: numărul cromozomilor, simbolul umărului, numărul zonei și numărul de segment într-o anumită regiune. De exemplu, 6p21.3 de înregistrare înseamnă că vorbim despre pereche sasea de cromozomi, brațul său scurt, zona 21, segmentul 3. Există mai multe caractere opționale, în special PTER - capătul brațului scurt, qter - capătul brațului lung.
Metoda citogenetică de investigare permite detectarea ștergerilor și a altor modificări ale cromozomilor numai în mărimea de aproximativ 1 milion de baze( nucleotide).