Análise de imunoenzimas( EIA) - Causas, sintomas e tratamento. MF.
ensaio imunoenzimático( ELISA) - moderna investigação laboratorial, durante os quais a pesquisa está a ser anticorpos ou antigénios específicos no sangue para doenças específicas para identificar não só etiologia mas também do estádio da doença. Os resultados do ELISA podem ser dados de forma qualitativa e quantitativa.
Atualmente, o ELISA é usado nas seguintes situações:
1) Pesquise anticorpos específicos contra qualquer doença infecciosa;
2) pesquisa de antígenos de qualquer doença( infecciosa, venérea);
3) exame do estado hormonal do paciente;
4) exame para inquiridores;
5) exame para a presença de doenças auto-imunes.
Vantagens do método ELISA:
1) Alta especificidade e sensibilidade do método ELISA( mais de 90%).
2) A capacidade de determinar a doença e monitorar a dinâmica do processo, ou seja, a comparação do número de anticorpos em diferentes intervalos de tempo.
3) Disponibilidade de diagnósticos ELISA em qualquer instituição médica.
Deficiência relativa:
1) Identificação da resposta imune( anticorpos), mas não o próprio patógeno.
Conceitos básicos de
Antes de esclarecer a essência do método ELISA, vamos examinar brevemente alguns conceitos.
Os anticorpos( ou imunoglobulinas - Ig) - proteínas específicas produzidas por linfócitos B -
( células imunes), em resposta à entrada para dentro do corpo de um agente patogénico infeccioso( vírus, bactérias, fungos, etc.).Segregam a imunoglobulina A( IgA), a imunoglobulina E( IgE), imunoglobulina M( IgM), imunoglobulina G( IgG), imunoglobulina D( IgD).Eles diferem um do outro em forma molecular e massa, semi-vida, participação / não participação em processos infecciosos, o momento da detecção a partir do momento da infecção. Se considerarmos o peso molecular, o mais ele é IgM - é um pentâmero( 950.000 Da), em contraste com o resto do Ig( 150-200 000 Da), então IgM simplesmente não pode passar através da barreira placentária. Portanto, a detecção de IgM em uma criança de 1 ano de idade é sempre um sinal de infecção no feto. No soro, a maior parte das imunoglobulinas é representada por IgG( 75-85%) e a menor IgE( 0,003%).O processo infeccioso envolvido directamente tendo apenas IgA, M, G. IgE são um sinal de reacções e condições alérgicas, e IgD - pode ser detectada apenas no nó de linfa e tecido tonsilar, desempenha um papel na formação de imunidade local.as classes de imunoglobulinas
Antígenos - substâncias orgânicas de elevado peso molecular, em particular os agentes infecciosos e outras doenças, assim como substâncias diferentes modificados células produzidas em uma dada doença( doença autoimune, cancro).
O complexo imune é um complexo antígeno-anticorpo envolvido no processo imune. Em que consiste o método IFA?
Várias variedades de ELISA distintas( concorrentes, método indirecto, o bloqueio directo), mas, na prática, mais comumente utilizado imunoensaio enzima heterogéneo ou ELISA( Enzyme linked immunosorbent assay) com base
de imunoensaio da resposta imunitária do antigénio e anticorpo para formar um complexo imunológico: antigénio- anticorpo, o que resulta em uma alteração na atividade enzimática de rótulos específicos na superfície dos anticorpos. O método ELISA
termos mais simples, este processo pode ser dividido em várias etapas:
1) sobre a superfície da placa de médico-furo, o examinador é o antigénio purificado agente patogénico específico. Quando um material biológico( soro sanguíneo) é adicionado ao paciente, ocorre uma reação específica entre esse antígeno e o anticorpo desejado( imunoglobulina).Este composto atuará como um "antígeno especial" na próxima etapa.
2) Nesta fase de formação é IR( imunocomplexos) - a reacção entre o "antigio especico" e de conjugado( esta imunoglobulina marcada com a enzima da peroxidase).Um cromogênio especial é adicionado. O resultado desta reacção enzimática é a formação de substâncias de cor nos poços da placa, a intensidade da cor que depende do número de pacientes imunoglobulinas( anticorpos) contidos no material.
3) Além disso, há Interpretação: fotometria utilizando um espectrofotómetro multicanal comparando a densidade óptica do material de teste com uma densidade óptica de amostras de controlo, resultados de processamento matemático. A quantidade de anticorpo no doente depende da altura da densidade óptica dos poços.
prática comum o uso de placas de 96 poços.
quantidade( ou concentração) de anticorpos em uma unidade de volume particular, quando a medição da densidade óptica( DO) da amostra de líquido é calculado. O resultado é, em seguida, em comparação com uma amostra de controlo.
deve ser lembrado: para cada sistema de teste desenvolvido para levar em conta os resultados de desempenho individuais, padrões de desempenho e patologia( ou seja, "valor de referência").Isto deve ser considerado quando se avalia os resultados de cada estudo de caso. Interpretar correctamente os resultados de um laboratório de "os valores de referência" outro laboratório. Também é incorreta a comparação de resultados de diferentes laboratórios juntos. Ao configurar reacções
ELISA e tem um valor de tal conceito de avidez dos anticorpos. Avidez
anticorpo - este anticorpo a força de ligação ao antigénio e a quantidade do antigénio localizado na inter-relação com immnoglobulinami( anticorpos).Avidez é de grande importância quando se avalia a suposta infecção do prazo, o que é extremamente importante para o diagnóstico da infecção primária em mulheres grávidas.
base em testes anticorpo avidez consiste no tratamento do complexo imune( antigénio-anticorpo) de solução de ureia, a fim de destruir a proteína.ligações Vysokoavidnye permanecem intactos, e baixa avidez destruído. O resultado é dado como o índice de avidez, expressa como uma percentagem( %).doenças
quais são detectados por ELISA para diagnóstico?
1. As doenças infecciosas
1,1 viral da hepatite A( IgM, L), B antigénios -HBsAg, HBeAg, anticorpo - IgM HBcorAg, Ig total de HBcorAg, IgG HBeAg), C( anticorpo Ig M, L HCV), D( IgM,L), e( Ig M, L) e outros.
1,2 infecção por HIV( IgG)
1,3 infecção pelo citomegalovírus( anticorpos IgM, G)
1,4 Epstein-Barr infecção ou mononkleoz( anticorpo IgM, G para EA, VCA, proteínas de NA do vírus)
1,5 infecções herpéticas( anticorpo IgM, L)
1,6 Toxoplasmose( anticorpo IgM, L)
1,7 rubéola( IgM, L)
1,8 Sarampo( IgM, L), brucelose( IgM, L), pseudotuberculosis( IgM, L), de salmonelose( IgM, L), Shigelose ou disenteria(IgM, L), aspergilose( IgM, L), encefalite, borreliose, e muitos outros Tick-borne.
1,9 parasitose( giardíase, toxocaríase, triquinose, opistorhoz, equinococose, alveococcosis e outros), em que a IgG detectado
1,10 DST( doenças sexualmente transmitidas através) - Micoplasmose( IgM, L), Ureaplasmosis( IgM, L), clamídia( IgA, M, L), sífilis( IgG)
1,11 infecção por Helicobacter( IgG)
2. Os marcadores de doença auto-imune e índices de imunidade humana ( total de IgE, IgG total, IgA total, IgM total, total de IgD, IgA secretora, IgG 2, IgG4, CRC complexos imunes circulantes, anticorpos IgG e IgA para gliadina e outros)
3. marcadores Onkologichsekie ( FNSobre - factor de necrose do tumor, CEA - antigénio carcinoembrionário, PSA - antigénio específico da próstata, a hCG - gonadotrofina coriónica humana, CA 125, alveomutsin e muitos outros)
4. distúrbios reprodutivos I( estradiol, progesterona, prolactina, testosterona, AFP AFP-FSH - hormona estimuladora do folículo e outra
) 5. Doenças tiróide( T3 livre e ligado, T4, tiroglobulina, peroxidase da tiróide - TPO, hormona estimulante da tiróide - TTG).
Esta lista é de nenhuma maneira todas as doenças são diagnosticadas por ELISA.material de
por ELISA e análise regra cerca
material mais comum para as reacções de ELISA - soro de um paciente, tomados com o estômago vazio. O material também pode servir como fluido cefalorraquidiano, fluido amniótico, o conteúdo vítreo, muco das do canal cervical e uretrais cotonetes.pacientes Preparando
para a entrega de material para IFA
sangue é tomado com o estômago vazio. Antes da entrega de sangue não precisa de tomar qualquer droga. O tratamento específico( antibacteriano, antiviral, antiparasitário, e assim por diante) deve ser interrompido pelo menos 2 semanas antes do estudo.
fabricação Datas IFA
O imunoensaio enzimático é realizado rapidamente, durante o dia. Os atrasos podem ser em diferentes laboratórios devido ao acúmulo de um certo número de soros.
Possíveis resultados do diagnóstico ELISA
Ao avaliar os resultados para infecções específicas, a classe de anticorpos detectados e seu número são importantes. Depende não apenas da etiologia da infecção( seja ela existente ou não), mas também a fase esperada da doença( aguda, crônica), bem como a presença de infecção ativa( aguda ou exacerbação da crônica) no momento do exame.
Quais são os termos aproximados para o aparecimento de anticorpos( imunoglobulinas-Ig)?
Os primeiros anticorpos são IgM .Identificá-los pode ser 1-3 semanas após possível infecção, que caracteriza a fase aguda do processo infeccioso. A segunda situação com o aparecimento de anticorpos IgM é a ativação( ou exacerbação) do processo crônico. Os anticorpos IgM circulam em média cerca de 3 meses, então seu número desaparece gradualmente. No entanto, em alguns pacientes, quantidades de traço de IgM podem ser detectadas dentro de 1-2 anos a partir do momento da infecção.
Os sistemas de teste modernos são altamente sensíveis, resultando em resultados falsos positivos não específicos( muitas vezes em mulheres grávidas).Portanto, neste grupo de pacientes, IgM positiva deve ser revisada!
IgA anticorpos aparecem 2-4 semanas após a infecção, mas em uma quantidade suficiente para detecção - em um mês. A IgA sérica é sintetizada por células plasmáticas do baço, gânglios linfáticos e membranas mucosas, concentrado secretor de IgA nas mucosas para desempenhar sua função protetora - participar da imunidade local.
A partir da 4ª semana após a infecção, os anticorpos IgG começam a aparecer. Na maioria das infecções, seu título aumenta gradualmente com um máximo em diferentes momentos( em média após 1,5-2 meses), então o título permanece em um nível baixo e indica imunidade. Com algumas doenças( micoplasmose, clamídia, tricomoníase), o nível de IgG não é alto, diminui substancialmente devido à falta de imunidade nessas infecções.
Variantes de detecção de anticorpos de diferentes classes:
- A detecção isolada de anticorpos IgM pressupõe a presença de infecção primária por
.
- A detecção simultânea de IgM e IgG no sangue é característica da infecção primária de
nos 2-3 meses anteriores, bem como na exacerbação de uma doença crônica. Portanto, na gravidez, a presença de IgM nem sempre é um sinal de infecção primária.
- A detecção de IgG isolada pode indicar imunidade à doença,
e infecção crônica. Na segunda situação, o número de anticorpos( título) também é importante e a mudança neste título está em dinâmica. Geralmente, os estudos são conduzidos em intervalos de 2-4-6 semanas.
- A detecção de IgA isolada ou com IgM indica uma infecção primária. Com
, espera-se que o aparecimento de IgA em conjunto com IgG ative a infecção crônica( uma média de 2 semanas a partir do momento da exacerbação).
A definição de anticorpos IgG IgG é uma excelente etapa complementar no diagnóstico de infecção primária por infecção de longo prazo, que tem seu significado clínico, especialmente na avaliação do risco de infecção fetal intra-uterina. A detecção de IgG de baixo grau indica uma infecção primária e é detectada em média 4-6 meses após a infecção, menos frequentemente por mais tempo. A IgG de baixa dose requer outras evidências laboratoriais de infecção primária( IgM).Os altos anticorpos são um sinal de uma doença crônica e seu agravamento, ou de uma imunidade formada.
Características em lactentes: em crianças menores de um ano, e às vezes 1,5 anos no sangue, a IgG materna está circulando para diferentes infecções( ou seja, sua penetração através da placenta da mãe ao feto durante o período de desenvolvimento fetal).Não é, por si só, um sinal de infecção no presente. Se na mesma idade forem encontradas IgM( lembre-se que a IgM materna não pode penetrar na placenta), então é um sinal de infecção intra-uterina ou infecção adquirida após o nascimento.
Método quantitativo ELISA
O resultado do diagnóstico de ELISA( com a ajuda do imunoensaio enzimático) é dado em certas unidades:
- A densidade óptica( OP) da amostra é a concentração de anticorpos específicos por unidade de volume. Quanto maior a amostra OP, maior a concentração de anticorpos. Alguns resultados referem-se ao coeficiente de positividade( KP) - esta é também a densidade óptica da amostra.
- Unidades de concentração de anticorpos( nanograma / mililitro ou ng / ml).
- Na forma de títulos de soro: 1:20, 1:40, 1: 100, 1: 200, 1: 400, 1: 800, 1: 1200 e assim por diante. Os títulos de diagnóstico( em que a doença é diagnosticada e não o fato de infecção) para diferentes doenças são diferentes.
- Na forma de símbolos - "+", "-", "?"( +, ++, +++, ++++).
- Na forma de uma avaliação qualitativa baseada em um determinado critério( positivo ou negativo).
É correto estimar o número de anticorpos, a variante da detecção de classes de imunoglobulinas e, conseqüentemente, expor o estágio da doença e a necessidade de tratamento só pode ser feita por um médico.
Não deve ser esquecido que para qualquer sistema de teste, seus "valores de referência"( variantes da norma) são desenvolvidos, quando excedem qual ou outra doença é diagnosticada( variantes de patologia).Para diferentes sistemas de teste, os "valores de referência" são diferentes.
Uma comparação correta dos resultados de ELISA em dinâmica é possível somente se forem fabricados no mesmo laboratório.
Infectante do médico Bykova N.I.