Immunoenzyme-analyse( EIA) - Oorzaken, symptomen en behandeling. MFS.
immunosorbent assay( ELISA) - moderne laboratoriumonderzoek, waarbij het onderzoek wordt specifiek antilichamen of antigenen in het bloed van specifieke ziekten niet alleen etiologie, maar ook de fase van de ziekte te identificeren. De resultaten van ELISA kunnen kwalitatief en kwantitatief worden gegeven.
Momenteel EIA wordt toegepast in de volgende situaties:
1) Zoeken naar specifieke antilichamen aan een besmettelijke ziekte;
2) zoeken naar antigenen van welke ziektes dan ook( infectieus, venerisch);
3) onderzoek van de hormonale status van de patiënt;
4) onderzoek voor oncomarkers;
5) onderzoek naar de aanwezigheid van auto-immuunziekten. Voordelen
ELISA-werkwijze:
1) hoge specificiteit en gevoeligheid van de ELISA( meer dan 90%).
2) De mogelijkheid om te bepalen en te controleren ziekteproces dynamiek, d.w.z. vergelijken van de hoeveelheid antilichamen in verschillende tijdsintervallen.
3) Beschikbaarheid van ELISA-diagnostiek in een medische instelling. Het relatieve gebrek
:
1) Detectie van een immuunreactie( antilichamen), maar niet van het pathogeen.
Concepts
Voordat verduidelijken de essentie van de ELISA-methode kort is begrijpen dat sommige concepten.
Antilichamen( of immunoglobulinen - lg) - specifieke eiwitten geproduceerd door B -
lymfocyten( immuuncellen) als reactie op het van het lichaam van een besmettelijke pathogeen( virus, bacteriën, schimmels, etc.).Scheiden immunoglobuline A( IgA), immunoglobuline E( IgE), immunoglobuline M( IgM), Immunoglobuline G( IgG), immunoglobuline D( IgD).Ze verschillen van elkaar en vormen een molecuulmassa halfwaardetijd deelname / nonparticipation in infectieuze werkwijzen, detecteert het tijdstip vanaf het moment van infectie. Als we kijken naar het moleculair gewicht, de meest hij is IgM - is een pentameer( 950.000 Da), in tegenstelling tot de rest van Ig( 150-200 000 Da), zodat IgM kan gewoon niet door de placenta passeren. Daarom is de detectie van IgM bij een kind van 1 jaar oud altijd een teken van infectie bij de foetus. Het grootste deel van serum immunoglobulinen is voorgesteld IgG( 75-85%) en de laagste - IgE( 0,003%).Het infectieproces direct betrokken die slechts IgA, M, G IgE is een teken van allergische reacties en aandoeningen, en IgD - kan alleen worden aangetoond in de lymfeknoop en tonsil weefsel, speelt een rol bij de vorming van lokale immuniteit.
klassen van immunoglobulinen
Antigenen - hoogmoleculaire organische stoffen, in het bijzonder infectueuze pathogenen en andere ziekten, alsook andere stoffen die gemodificeerde cellen die in een bepaalde ziekte( autoimmuunziekte, kanker).
Het immuuncomplex is een antigeen-antilichaamcomplex dat betrokken is bij het immuunproces. Waar is de IFA-methode op gebaseerd?
Verscheidene verschillende ELISA variëteiten( directe, indirecte, blokkeren werkwijze concurrenten), maar in de praktijk meest gebruikte heterogene enzym-immunoassay of ELISA( enzyme linked immunosorbent assay)
basis van immunoassay van de immuunrespons van het antigeen en antilichaam aan een immuuncomplex te vormen: antigen-antilichaam, wat resulteert in een verandering in de enzymatische activiteit van specifieke labels op het oppervlak van antilichamen. Werkwijze
ELISA
eenvoudige termen, kan dit proces worden verdeeld in verscheidene fasen:
1) Op het oppervlak van de dokter-gatenplaat heeft de onderzoeker gezuiverd antigen specifieke ziekteverwekker. Bij het toevoegen van het biologisch materiaal( bloedserum) van een patiënt specifieke reactie plaatsvindt tussen het antigeen en het gewenste antilichaam( immunoglobuline).Deze verbinding zal in de volgende fase als een "speciaal antigeen" fungeren.
2) In deze fase van formatie IR( immuuncomplexen) - de reactie tussen het "antigeen" en conjugaat( het immuunglobuline gelabeld met peroxidase-enzym).Er is een speciaal chromogeen toegevoegd. Het resultaat van deze enzymatische reactie is de vorming van gekleurde stoffen in de putjes van de plaat, de kleurintensiteit afhangt van het aantal patiënten immunoglobulinen( antilichamen) in het materiaal.
3) Verder zijn Interpretatie fotometrie gebruik van een meerkanaals spectrofotometer vergelijkt de optische dichtheid van het testmateriaal met een optische dichtheid van controlemonsters, wiskundige verwerkingsresultaten. De hoeveelheid antilichaam in de patiënt afhankelijk van de hoogte van de optische dichtheid van de putjes.
gebruikelijk van 96 putsplaten gebruikt.
hoeveelheid( of concentratie) van antilichamen in een bepaald eenheidsvolume wanneer de optische dichtheid( OD) van de monstervloeistof wordt berekend. Het resultaat wordt dan vergeleken met een controlemonster.
moet niet vergeten: voor elk testsysteem ontwikkeld om rekening te houden met de individuele prestaties resultaten, prestaties normen en pathologie( ie "referentiewaarde").Dit moet worden meegewogen bij de beoordeling van de resultaten van elke case study. Correct de resultaten van een laboratorium "referentiewaarden" ander laboratorium interpreteren. Het is ook onjuist om de resultaten van verschillende laboratoria met elkaar te vergelijken. Bij het instellen
ELISA reacties en een zodanige waarde heeft concept antilichaam aviditeit. Aviditeit
antilichaam - dit antilichaam de antigeen bindende kracht en de hoeveelheid van het antigeen in wisselwerking met immnoglobulinami( antilichamen).Avidity is van groot belang bij de beoordeling van de vermeende infectie van het woord, dat is van groot belang bij de diagnose van primaire infectie bij zwangere vrouwen.
Basis antilichaam aviditeitstest omvat behandeling van immuuncomplex( antigeen-antilichaam) ureumoplossing om het eiwit te vernietigen. Vysokoavidnye koppelingen blijven intact, en lage aviditeit vernietigd. Het resultaat wordt gegeven als de aviditeit index, uitgedrukt in procenten( %).
Welke ziektes worden gedetecteerd door middel van ELISA-diagnostiek?
1. Infectieziekten
1.1 Virale hepatitis A( IgM, G), B antigenen -HBsAg, HBeAg, antilichaam - HBcorAg IgM, totaal Ig HBcorAg, IgG HBeAg), C( Ig antilichaam M, G HCV), D( IgM,G), E( Ig M, G) en anderen.
1.2 HIV-infectie( IgG)
1,3 Cytomegalovirus infectie( antilichamen IgM, G)
1,4 Epstein-Barr infectie of mononkleoz( antilichaam IgM, G EA, VCA, NA eiwitten van het virus)
1,5 herpetische infecties( antilichaam IgM, G)
1.6 toxoplasmose( antilichaam IgM, G)
1,7 Rubella( IgM, G)
1,8 Measles( IgM, G), brucellose( IgM, G), pseudotuberculosis( IgM, G), salmonellose( IgM, G), Shigellosis of dysenterie(IgM, G), aspergillose( IgM, G), door teken overgedragen encefalitis, borreliose, en vele anderen.
1,9 parasitosis( Giardia, toxocariasis, trichinose, opistorhoz, echinokokkose, alveococcosis ea) waarin de gedetecteerde IgG
1,10 STD( seksueel overdraagbare aandoeningen through) - mycoplasmose( IgM, G), Ureaplasmosis( IgM, G), Chlamydia( IgA, M, G), Syfilis( IgG)
1,11 Helicobacter-infectie( IgG)
2. Merkers van auto-immuunziekten en humane immuniteit indices ( totaal IgE, totaal IgG, totaal IgA, totaal IgM, totaal IgD, secretorisch IgA, IgG2, IgG4, CRC circulerende immuuncomplexen, IgA en IgG antilichamen tegen gliadine en anderen)
3. Onkologichsekie markers ( FNOver - tumor necrose factor, CEA - carcino antigeen, PSA - prostaat specifiek antigeen, hCG - humaan choriongonadotrofine, CA 125, alveomutsin en vele anderen)
4. Reproductieve stoornissen I( estradiol, progesteron, prolactine, testosteron, AFP AFP-FSH - follikel stimulerend hormoon en andere)
5. Ziekten schildklier( vrije en gebonden T3, T4, thyroglobuline, schildklier peroxidase - TPO, schildklier stimulerend hormoon - TTG).
Deze lijst is lang niet alle ziekten worden gediagnosticeerd door ELISA.
materiaal voor ELISA-analyse en heers hek
meest gebruikte materiaal voor ELISA reacties - serum van een patiënt, genomen op een lege maag. Het materiaal kan ook dienen als cerebrospinale vloeistof, amniotische vloeistof, glasachtige inhoud, slijm van de baarmoederhals en urethrale uitstrijkjes.
Voorbereiding patiënten voor levering van materiaal voor IFA
bloed wordt op een lege maag. Vóór de levering van bloed niet nodig om drugs te nemen. Specifieke behandeling vereist( antibacteriële, antivirale, antiparasitaire, enzovoort) moet worden gestopt ten minste 2 weken voorafgaand aan het onderzoek.
vervaardigen IFA Data
De enzymimmunoassay wordt snel uitgevoerd, gedurende de dag. Vertragingen kunnen voorkomen in verschillende laboratoria vanwege de accumulatie van een bepaald aantal sera. Mogelijke resultaten
ELISA diagnostische
Bij de beoordeling van de resultaten op een specifieke infectie is belangrijk klasse antilichamen opgespoord en hun aantal. Het beïnvloedt niet alleen de vraag naar de etiologie van infectie( dat wil zeggen het of niet), maar de geschatte stadium van de ziekte( acuut en chronisch), evenals de aanwezigheid van actieve infectie( acute of exacerbatie van chronische) op het moment van het onderzoek.
Wat zijn de geschatte timing van antistoffen( immunoglobulinen - Ig)?
De vroegste antilichamen zijn IgM .Ze kunnen identificeren aan de hand 1-3 weken na de eventuele infecties die acute fase van de infectie te karakteriseren. Het tweede geval is het verschijnen van IgM antilichamen - activering( of exacerbatie) chronisch proces. IgM-antilichamen circuleren gemiddeld ongeveer 3 maanden, daarna verdwijnt hun aantal geleidelijk. Bij sommige patiënten kunnen sporen van IgM binnen 1-2 jaar vanaf het moment van infectie worden gedetecteerd.
moderne testsystemen zijn zeer gevoelig, zodat er niet-specifieke vals-positieve resultaten( vaak bij zwangere vrouwen).Daarom moet bij deze groep patiënten de positieve IgM opnieuw worden gecontroleerd!
Antilichamen IgA verschijnen 2-4 weken na de besmetting, maar in een voldoende hoeveelheid op te sporen - per maand. Serum IgA gesynthetiseerd door plasmacellen van de milt, lymfeknopen en mucosale secretoir IgA gericht op slijmvliezen zijn beschermende functie - betrokken bij lokale immuniteit.
Op de 4e week na de infectie beginnen te verschijnen antilichaam IgG .In de meeste infecties titer van geleidelijk toenemende, met een maximum op verschillende tijdstippen( gemiddeld 1,5-2 maanden), dan is de titer bleef op een laag niveau en geeft immuniteit. In sommige ziekten( mycoplasmosis, chlamydia, trichomoniasis) IgG-niveau niet hoog is, wordt aanzienlijk verminderd als gevolg van het ontbreken van immuniteit in deze infecties. Uitvoeringsvormen
detectie van antilichamen van verschillende klassen:
- Geïsoleerde detectie van IgM- antilichamen veronderstelt
primaire infectie.
- Gelijktijdige detectie van bloed IgM en IgG karakteristieke primaire infectie
in de voorgaande 2-3 maanden, evenals exacerbatie van chronische ziekten. Daarom is de aanwezigheid van IgM tijdens de zwangerschap niet altijd een teken van primaire infectie.
- Detectie van IgG geïsoleerd en kunnen wijzen op een immuniteit tegen de ziekte,
en een chronische infectie. In de tweede situatie zal de hoeveelheid antilichaam( titer) en de verandering in de dynamiek van de titer. Gewoonlijk worden onderzoeken uitgevoerd met tussenpozen van 2-4-6 weken.
- Detectie van IgA geïsoleerd of met IgM geeft een primaire infectie aan. Wanneer
verschijning met IgG IgA aangenomen activering van een chronische infectie( gemiddelde van 2 weken vanaf het moment van exacerbatie).
Definition aviditeit IgG antilichamen is een uitstekende aanvulling op de diagnose stadium van de primaire infectie van de al lang bestaande infectie die de klinische betekenis heeft, in het bijzonder bij de beoordeling van het risico op intra-uteriene infectie van de foetus. De detectie van lage aviditeit IgG duidt een primaire infectie en identificeert het gemiddelde na 4-6 maanden na infectie zelden langer. Een lage dosis IgG vereist ander laboratorium bewijs van primaire infectie( IgM).Hoge aviditeit antilichamen ofwel tekenen van chronische en acute aandoeningen of gevormd immuniteit.
vooral bij kinderen: bij kinderen jonger dan een jaar, en soms zelfs 1,5 jaar in het bloed circulerende maternale IgG-antilichamen tegen verschillende infecties( dat wil zeggen, er was hun penetratie door de placenta van moeder naar foetus in de baarmoeder).Het is op zich geen teken van infectie in het heden. Als op de leeftijd van takjm gedetecteerd IgM( herinneren dat de moeder IgM passeren de placenta niet kan), het is een teken van infectie of intra-uteriene infectie verworven na de geboorte.
Kwantitatieve ELISA-methode
Het resultaat van de ELISA-diagnose( met behulp van een enzymimmuuntest) wordt gegeven in bepaalde eenheden:
- Optische dichtheid( OP) van het monster is de concentratie van specifieke antilichamen per volume-eenheid. Hoe hoger het OP-monster, des te hoger de concentratie antilichamen. Sommige resultaten verwijzen naar de positiviteitscoëfficiënt( KP) - dit is ook de optische dichtheid van het monster.
- Eenheden van antilichaamconcentratie( nanogram / milliliter of ng / ml).
- in de vorm van serumtiters: 1:20, 1:40, 1: 100, 1: 200, 1: 400, 1: 800, 1: 1200 enzovoort. Diagnostische titers( waarbij de ziekte wordt gediagnosticeerd, en niet het feit van infectie) voor verschillende ziekten zijn verschillend.
- In de vorm van symbolen - "+", "-", "?"( +, ++, +++, ++++).
- In de vorm van een kwalitatieve beoordeling op basis van een bepaald criterium( positief of negatief).
Het is juist om het aantal antilichamen, de variant van klassedetectie van immunoglobulinen, te schatten en bijgevolg het stadium van de ziekte bloot te leggen en de noodzaak voor behandeling alleen door een arts kan worden gedaan.
Er mag niet worden vergeten dat voor elk testsysteem hun "referentiewaarden"( varianten van de norm) worden ontwikkeld, wanneer deze worden overschreden, en deze of gene ziekte wordt gediagnosticeerd( pathologievarianten).Voor verschillende testsystemen zijn de "referentiewaarden" verschillend.
Een juiste vergelijking van de ELISA-resultaten in de dynamiek is alleen mogelijk als ze in hetzelfde laboratorium worden vervaardigd.
Arts infektsionist Bykova N.I.