Analisi del liquido cerebrospinale( liquido cerebrospinale)

liquore( o liquido spinale cerebrospinale CSF) - liquido biologico, necessaria per il funzionamento del sistema nervoso centrale. La sua ricerca è uno dei più importanti tipi di ricerca di laboratorio. Si compone di fase pre-analitica( preparazione del soggetto, la raccolta del materiale e la sua consegna al laboratorio), analisi( in realtà fare ricerca) e postanalytical( trascrizione del risultato).Solo la corretta esecuzione di tutte le manipolazioni su ciascuno di questi passaggi determina la qualità dell'analisi.

fluido cerebrospinale( CSF) è formata nel plesso coroide dei ventricoli cerebrali. Negli umani adulti spazi subarhnoidalnyh simultaneamente e circola nei ventricoli del cervello di 110-160 ml CSF, nel canale spinale - 50-70 ml. Liquore è formata in modo continuo ad una velocità 0,2-0,8 ml / min, a seconda della pressione intracranica. Un giorno in una persona sana, si formano 350-1150 ml di liquido cerebrospinale.

liquore ottenuto mediante puntura del canale spinale, più spesso - lombare - secondo i metodi ben noti neurologi e neurochirurghi. Le sue prime gocce vengono rimosse( sangue "da viaggio").Quindi, il liquido raccolto almeno due tubi: tubo convenzionale( chimica, centrifuga) per analisi cliniche e chimiche generale, sterile - esame batteriologico. Nel modulo di riferimento sul medico esame del liquor dovrebbe specificare non solo il nome del paziente, ma anche la diagnosi clinica e lo scopo dello studio.

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Nota che consegnato ai campioni di liquore di laboratorio deve essere protetto da pergrevaniya o raffreddato e campioni per rilevare polisaccaridi batterici serogicheskih test dovrebbero essere riscaldato a bagnomaria per 3 min.

realtà studio di laboratorio di fluido cerebrospinale( fase analitica) viene effettuata secondo le modalità adottate nel laboratorio clinico nell'analisi di eventuali fluidi biologici, e comprende le seguenti fasi:

- analisi macroscopica - valutazione delle proprietà fisico-chimiche( dimensioni, colore, carattere),
- contando il numero di cellule,
- preparazione nativo di microscopia e di prodotto citologia colorato;
- biochimica,
- esame microbiologico( se indicato).

Abbiamo ritenuto opportuno e informativo, in alcuni casi completano lo studio del QCS immunologica e, eventualmente, - altri test, il cui significato viene discusso nella letteratura. Spiegazione indicatori

liquore

CSF normale incolore e porozrachna( come acqua distillata, confrontati con cui le proprietà fisiche generalmente descrivono CSF).

grigiastro o liquore grigioverde è generalmente causata da una miscela di batteri e leucociti. CSF Red intensità variabile( eritrohromiya) guidato da mescolanza di eritrociti che si verificano quando l'emorragia cerebrale o fresco infortunio.viene rilevata visivamente eritrociti pristutstvuyut quando un contenuto di più di 500-600 microlitri. Nei processi patologici

liquido può essere ksantohromnoy - colorato in prodotti di colore giallo o giallo-marrone di rottura dell'emoglobina. Considera anche xanthosis false - liquore di colore causata da farmaci. Meno frequentemente incontriamo CSF verdastro( purulenta meningite, ascesso cerebrale).La letteratura descrive il colore e liquori korchnevy - cisti Craniofaringioma breakout nel percorso di fluido cerebrospinale.

liquore torbidità può essere dovuto ai globuli impurità o microrganismi. In quest'ultimo caso, la torbidità può essere rimossa mediante centrifugazione. Quando il contenuto nel liquor maggiore quantità di proteine grossolane diventa opalescente. Densità relativa

fluido spinale ottenuta tramite puntura lombare, 1,006-1,007.Quando l'infiammazione delle meningi, trauma cerebrale densità relativa dei cerebrospinale fluido aumenta a 1.015.Diminuisce con sovrapproduzione di liquido cerebrospinale( idrocefalo).

Quando i livelli elevati di fibrinogeno nel CSF è formata pellicola fibrinosa o un coagulo che si verifica più frequentemente in meningite tubercolare. A volte il tubo con il liquido è stato lasciato a temperatura ambiente per un giorno( se necessario per impostare con precisione -? I film formato).In presenza di fibrina dell'ago dissezione sua pellicola viene trasferita su un vetrino e colorate con Ziehl-Neelsen o un altro metodo per identificare i micobatteri. Un CSF normale è il 98-99% di acqua.

Tuttavia, lo studio della sua composizione chimica è un compito importante. Include la determinazione dei livelli di proteine, glucosio e cloruro e in alcuni casi è integrata da altri indicatori.

Proteine in liquore

Oltre l'80% della proteina CSF proviene dal plasma mediante ultrafiltrazione. tasso contenuto proteico in porzioni diverse: un ventricolare - 0,05-0,15 g / l, cisternal 0,15-0,25 g / L, lombare 0,15-0,35 g / l. Per determinare la concentrazione di proteine nel liquido cerebrospinale può essere utilizzato uno qualsiasi dei metodi standardizzati( con acido salicilsolfonico e solfato di ammonio, e altri).L'aumento del contenuto proteico nel liquido cerebrospinale( iperproteinarchia) può essere dovuto a vari fattori patogenetici( Tabella 1).

studio delle proteine CSF permette non solo di chiarire la natura del processo patologico, ma anche per valutare le condizioni della barriera emato-encefalica. L'indicatore per questi scopi può servire da albumina a condizione che il suo livello nel QCS sia determinato mediante metodi immunochimici. Determinazione di albumina viene effettuata in relazione al fatto che, come la proteina sangue non viene sintetizzato localmente e può quindi essere un "marker" immunoglobuline infiltrati dal flusso di sangue a causa di barriera di permeabilità alterata.determinazione simultanea di albumina nel siero( plasma) sangue e albumina nel liquor permette di calcolare l'indice:

Quando la barriera ematoencefalica intatta, questo indice è inferiore a 9, con la sua moderata danni - 9-14, con un notevole - 14-30, con grave danno - 30-100 e un aumento di oltre 100 indica un danno completo alla barriera.

Negli ultimi anni, è aumentato l'interesse in specifici CNS proteine liquore - neurone enolasi, proteina S-100, proteina basica della mielina( MBP), e altri. Uno dei promettenti tra loro per scopi clinici è OBM.Nel normale liquore è praticamente assente( la sua concentrazione non supera i 4 mg / l) e compare solo in condizioni patologiche. Questo attributo di laboratorio non è specifico per alcune forme nosologiche, ma riflette l'estensione della lesione( associata principalmente alla distruzione della sostanza bianca).Alcuni autori considerano promettente la definizione di MBP nel liquido cerebrospinale per il monitoraggio della neurospida. Sfortunatamente, oggi ci sono ancora problemi legati alla determinazione diretta della concentrazione di questa proteina.

Glucosio nel liquore

Il glucosio è contenuto nel normale liquore in una concentrazione di 200-4,18 mmol / l. Questo valore è soggetto a fluttuazioni significative, anche in una persona sana, a seconda della dieta, dell'esercizio fisico, di altri fattori. Per una corretta valutazione del livello di glucosio nel liquido cerebrospinale, si raccomanda di determinare simultaneamente il suo livello nel sangue, dove è normalmente 2 volte più alto. Elevati livelli di glucosio nel sangue( giperglikoarhiya) si verifica nel diabete mellito, l'encefalite acuta, disturbi circolatori ischemiche ed altre malattie. Gipoglikoarhiya visto con la meningite di varie eziologie, o infiammazione asettica, lesioni neoplastiche del cervello e le membrane, almeno - con l'infezione da herpes, emorragia subaracnoidea.

qualche vantaggio sopra glucosio come marcatore diagnostico è lattato( acido lattico) come la sua concentrazione nel fluido cerebrospinale( 1,2-2,1 mmol / l) è indipendente da quella nel sangue. Il suo livello è aumentato significativamente in varie condizioni associate con il metabolismo energetico alterato - la meningite, soprattutto - causata da flora Gram-positivi, ipossia cerebrale e alcuni altri.

Cloruri in liquore

Cloruri - contenuto in normale acqua - 118-132 mmol / l.aumento della concentrazione CSF osservata in violazione della loro rimozione dal corpo( rene, cuore), in malattie degenerative e tumori del sistema nervoso centrale. La riduzione del contenuto di cloruro è osservata con encefalite e meningite.

Enzimi in liquore

Il liquore è caratterizzato dalla bassa attività degli enzimi in esso contenuti. Modificando attività enzimatica nel CSF in varie malattie sono generalmente aspecifica e paralleli descritti spostamenti nel sangue in queste malattie( Tabella 2).approccio diverso merita interpretazione delle variazioni dell'attività di creatina( CPK).Questo enzima nei tessuti delle tre fazioni, caratterizzati non solo da differenze molecolari, ma anche la natura della distribuzione nei tessuti: CK-MB( miocardio), CK-MM( muscolare), CK-BB( cervello).Se l'attività totale della CK nel CSF non ha valore diagnostico di base( che può essere aumentata quando un tumore, infarto cerebrale, epilessia e altre malattie), la frazione di CK-BB è marcatore relativamente specifica del tessuto cerebrale danneggiata e la sua attività nel CSF è correlata con la scala Glasgow.numero

di cellule e citogramma

liquore Nello studio di fluidi biologici e CSF compreso tipicamente contare il numero di cellule nel citogramma e strisci azureozinom colorati( Romanovsky-Giemsa Nocht, Pappenheim).Conteggio di elementi di cella nel fluido cerebrospinale( citosi determinazione) prodotti utilizzando una camera di Fuchs-Rosenthal, pre-riproduttiva è Samson reagente 10 volte. Uso di questo particolare colorante, non di altri.consente alle cellule di colorare per 15 minuti e mantenere le cellule invariate fino a 2 ore.numero

di cellule in tutta la cella viene divisa per 3 citosi così ottenuto in 1 ul. Per una maggiore precisione, la citosi è considerata in tre camere. Quando Fuchs-Rosenthal assenza camera Goryaeva possibile utilizzare la fotocamera, contando le cellule attraverso la griglia come nelle tre camere, il risultato viene moltiplicato per 0,4.Fino ad ora, ci sono differenze in unità di conteggio delle cellule - il numero di cellule nella camera, in 1 mm o da 1 litro.È probabilmente consigliabile esprimere comunque la citosi per il numero di cellule in μl. Per calcolare il numero di globuli bianchi e globuli rossi nel CSF può impiegare sistemi automatizzati. Aumento cellule

contenuto nel liquido cerebrospinale( pleocytosis) appare frequentemente nelle malattie infiammatorie, in misura minore - con irritazione meningea. Il pleiocitosi più importante visto con infezioni batteriche, lesioni cerebrali fungine e meningite tubercolare. In epilessia, aracnoidite, idrocefalo, processi degenerativi, e alcune altre malattie del conteggio delle cellule del sistema nervoso centrale rimane normale.

cellule colorazione nativa preparazione dei reagenti Samson permette abbastanza cellule differenziate in modo affidabile. Ma le loro caratteristiche morfologiche sono più accurate dopo la fissazione e la colorazione dei preparati citologici preparati. Un approccio moderno alla preparazione di tali farmaci comporta l'uso di un citocentrifuga. Tuttavia, anche negli Stati Uniti sono dotati solo del 55% dei laboratori. Pertanto, in pratica, viene utilizzato un metodo più semplice: la deposizione di cellule su una diapositiva. I farmaci dovrebbero essere ben asciugati nell'aria e poi dipinti.

Nella preparazione colorata vengono contati i conteggi delle cellule. Sono rappresentati principalmente dalle cellule del sangue( solitamente - linfociti e neutrofili, almeno - monociti, eosinofili, basofili) può soddisfare le plasmacellule e mastociti, macrofagi, palle granulare( forma degenerativa un tipo speciale di macrofagi - lipofagov grado di degenerazione grassa), le cellule arahnoendoteliya, epindimy. La morfologia di questi elementi di cella sono generalmente ben noti ai medici e diagnosi di laboratorio è descritto in dettaglio in molti manuali. Il livello e la natura del CSF citogramma pleocytosis permette di specificare la natura del processo patologico( Tabella 3).

La leucocitosi neutrofila spesso accompagna un'infezione acuta( meningite locale e diffusa).Eosinofilia CSF è osservato abbastanza raramente - con echinococcosi del cervello, meningite eosinofila. L'eosinofilia del liquido cerebrospinale non è correlata, di regola, con il numero di eosinofili nel sangue. Linfocitica pleiocitosi CSF si verifica in meningite virale, sclerosi multipla, fase cronica di meningite tubercolare dopo interventi sulle membrane cerebrali. Con i processi patologici dal lato del sistema nervoso centrale, c'è un polimorfismo dei linfociti, tra i quali ci sono quelli attivati. Essi sono caratterizzati dalla presenza di abbondante citoplasma con singoli granuli pallido azzurrofili, alcune cellule hanno otshnurovku o frammentazione del citoplasma( clasmatosis).Le cellule plasmatiche compaiono nel citogramma per meningite virale o batterica, processi infiammatori lenti, durante il recupero con neurosifilide. I monociti esposti al liquido cerebrospinale nel liquido cerebrospinale sono più veloci dei linfociti, sono osservati con sclerosi multipla, panencefalite progressiva, processi infiammatori cronici a bassa intensità.I macrofagi - liquori "sanitari", appaiono con emorragie, infezioni, necrosi traumatica e ischemica.

A volte nel CSF ci sono cellule atipiche - elementi, che nelle loro caratteristiche morfologiche non possono essere attribuiti a certe forme cellulari. Le cellule atipiche si trovano nei processi infiammatori cronici( meningite tubercolare, sclerosi multipla, ecc.) E spesso sono cellule tumorali. La probabilità di trovare cellule tumorali nel liquido cerebrospinale è piccola( non più dell'1,5%).La rilevazione di cellule di blast nel liquido cerebrospinale in emooblastosi ci permette di parlare di neuroleucemia.

Quando si analizza la composizione del liquido cerebrospinale, è importante valutare il rapporto tra proteine e elementi cellulari( dissociazione).Nella dissociazione cellula-proteina, si osserva una pleocitosi pronunciata con un contenuto proteico normale o leggermente aumentato. Questo è caratteristico della meningite. La dissociazione di Belkovokletochnaya è caratterizzata da hyperproteinarchy in cytosis normale. Questa condizione è tipica dei processi stagnanti nel liquido cerebrospinale( tumore, aracnoidite, ecc.).

Le situazioni cliniche a volte richiedono il conteggio del numero di eritrociti nel liquido cerebrospinale sanguinante( per oggettivare il volume di emorragia).Contare i globuli rossi è lo stesso del sangue. Come indicato sopra, i cambiamenti di colore liquore se a 1 mm contiene più di 500-600 eritrociti colorazione evidente avviene in presenza di circa 2000, e quando diventa livello eritrociti emorragica di oltre 4000 / L.

Analisi microbiologica del CSF

Una delle frequenti malattie del SNC è la meningite purulenta. In questi casi, la ricerca mycorobiological diventa particolarmente rilevante. Include un test di orientamento - bacterioscopia delle droghe e tecniche di cultura classica. La batterioscopia del liquido cerebrospinale ha un valore diagnostico limitato, soprattutto quando si ottiene un CSF chiaro. Striscio preparato da liquore fanghi ottenuta per centrifugazione okarshivayut metilene colorazione blu o Gram, anche se alcuni autori ritengono che l'ultima versione del colore "traumatizzare" elementi formati e crea artefatti. Con la meningite e gli ascessi, si trova una flora diversa che corrisponde alla natura della malattia. A prescindere dai risultati della microscopia di diagnosi meningite batterica deve essere confermato dal saggio di coltura che diventa il fattore determinante nella diagnosi di questo gruppo di malattie e selezionando terapia appropriata. Si è condotta in accordo con l'Ordine № 375 del Ministero della Salute della Federazione Russa 23.12.98 "sulle misure per rafforzare la sorveglianza e la prevenzione delle infezioni da meningococco e la meningite batterica purulenta."La causa più comune di meningite batterica è una diplococcus Gram-negativi Neisseria meningitidis, che è 80% dei casi può essere rilevata anche quando microscopia. Liquido

CSF

Normalmente, solo i linfociti e i monociti sono presenti nel liquido cerebrospinale. Con diverse malattie e condizioni patologiche nel liquido cerebrospinale, possono apparire altri tipi di cellule. Le dimensioni dei linfociti

sono simili ai globuli rossi. I linfociti hanno un grande nucleo e un bordo del citoplasma stretto e non verniciato. Normalmente, il liquore contiene 8-10 cellule di linfociti. Il numero di essi aumenta con i tumori del sistema nervoso centrale. I linfociti si trovano nei processi infiammatori cronici delle membrane( meningite tubercolare, aracnoidite da cisticercosi).

cellule plasmatiche in liquore. Cellule più grandi di linfociti, nucleo grande, situate eccentricamente, una grande quantità di citoplasma con una quantità relativamente piccola di nuclei( dimensione cellulare - 6,12 millimetri).le plasmacellule nel CSF si trovano solo in casi patologici, la durata dei processi infiammatori correnti nel cervello e le membrane, con encefalite, meningite tubercolare, aracnoidite tsistitserkoznom e altre malattie nel periodo postoperatorio, quando lenta guarigione della ferita.

Monociti tissutali in liquore. La dimensione delle celle varia da 7 a 10 μm. In un normale fluido, a volte possono verificarsi sotto forma di singoli esemplari. I monociti vengono rilevati nel liquido cerebrospinale dopo un intervento chirurgico sul sistema nervoso centrale, con processi infiammatori a lungo termine nelle membrane. La presenza di monociti tissutali suggerisce una reazione tissutale attiva e una normale cicatrizzazione della ferita.

Macrofagi in liquore. Può avere nuclei di varie forme, di solito si trova alla periferia del nucleo delle cellule citoplasma contiene vacuoli e inclusioni. Nel normale liquore, i macrofagi non sono stati trovati. La presenza di macrofagi con un numero normale di cellule nel liquido cerebrospinale viene osservata dopo sanguinamento o nel processo infiammatorio. Di norma, si verificano nel periodo postoperatorio, che ha un valore prognostico e parla della purificazione attiva del CSF.

Palline granulose in liquore. Cellule con infiltrazione grassa - macrofagi con presenza di goccioline di grasso nel citoplasma. Nelle preparazioni di liquori colorati, le cellule hanno un piccolo nucleo periferico e un citoplasma a grandi cellule. La dimensione delle cellule è diversa e dipende dalle goccioline di grasso incluse. Le sfere granulari si trovano in un fluido patologico ottenuto da cisti cerebrali nei fuochi del decadimento del tessuto cerebrale, con tumori.

Neutrofili in liquore. Nella camera, i neutrofili del sangue periferico sono identici nell'aspetto. La presenza di neutrofili nel liquido cerebrospinale, anche in quantità minime, indica o una reazione infiammatoria precedente o esistente. La presenza di neutrofili alterati indica un'attenuazione del processo infiammatorio.

eosinofili in liquore. Determinare nel liquido cerebrospinale con la granularità uniforme e lucida. Gli eosinofili si verificano in emorragia subaracnoidea, la meningite, la tubercolosi e tumori cerebrali sifilitico.

cellule epiteliali in CSF.Le cellule epiteliali, che limitano lo spazio subaracnoideo, si trovano molto raramente nel liquido cerebrospinale. Queste sono grandi cellule rotonde con piccoli nuclei tondi o ovali. Scoperto da neoplasie, a volte con processi infiammatori.

Cellule tumorali e complessi nel liquido cerebrospinale. Si trovano in una cella e una preparazione colorata di liquore. Le cellule maligne possono riferirsi ai seguenti tipi di tumori: medulloblastoma

;
spongioblastoma;Astrocitoma
;Cancro
.

Cristalli in liquore. Si verificano raramente nel liquido cerebrospinale, in caso di decadimento tumorale.

elementi echinococcus a ganci likvore- scolexes, chitina coperture frammenti - nel fluido cerebrospinale sono rari.

PCR diagnostica

CSF Negli ultimi anni, qualche promessa in neuroinfections diagnosi eziologica associati allo sviluppo di tecniche genetiche molecolari per rivelare acidi nucleici di agenti infettivi nel liquido cerebrospinale( diagnostica PCR).

Quindi, il fluido cerebrospinale è l'ambiente che reagisce chiaramente ai processi patologici nel sistema nervoso centrale. La profondità e la natura dei suoi cambiamenti sono dovuti alla profondità dei disturbi fisiopatologici. Una corretta valutazione dei sintomi liquorologici di laboratorio consente di chiarire la diagnosi e valutare l'efficacia del trattamento.

V.V.Professore di Bazarian di UGMA, vice capo del dottore OKB numero 1