Reazione a catena della polimerasi nella diagnosi delle malattie infettive

PCR - uno dei metodi per la diagnostica del DNA che permettono di aumentare il numero di copie di una porzione rilevabile del genoma( DNA) di batteri o virus è un milione di volte utilizzando un enzima DNA polimerasi. Un test per questo specifico segmento di acido nucleico genomico ripetutamente moltiplicato( amplificato) che permette la sua identificazione. In primo luogo, una molecola di DNA di batteri o virus di riscaldamento diviso in due catene, quindi in presenza di primer di DNA sintetizzati( sequenza di nucleotidi specifici della genomica definita) li vincola con tratti complementari di DNA, sintetizzato secondo filamento di acido nucleico dopo ciascun primer in presenza di una DNA polimerasi termostabile. Si ottengono due molecole di DNA.Il processo viene ripetuto molte volte. Per la diagnosi, è sufficiente una molecola di DNA, cioè un batterio o una particella virale. La reazione di un ulteriore passo - la sintesi del DNA sulla molecola di RNA utilizzando l'enzima trascrittasi inversa - ha permesso di testare virus a RNA come il virus HCV.PCR - processo in tre fasi, cicli ripetuti di denaturazione, appaiamento dei primer, sintesi del DNA( polimerizzazione).La quantità sintetizzata di DNA viene identificata mediante ELISA o elettroforesi.

La PCR può essere utilizzato vario materiale biologico - siero o plasma sanguigno, raschiando dell'uretra, biopsia, fluido pleurico, liquido cerebrospinale, etc. La prima PCR è stato utilizzato per la diagnosi di malattie infettive, come HBV, HCV, HBV, CMV, infezione sessualmente infettiva trasmessa( gonorrea, rifiuti diynaya, plasma mico, infezione ureaplasmal), tubercolosi, HIV e così via.d.vantaggio

PCR nella diagnosi delle malattie infettive oltre studi altri metodi è la seguente: ■

agente infettivo può essere rilevato in qualsiasi ambiente biologico dell'organismo, comprese quelle materiali ottenuti mediante biopsia;

■ Diagnosi di malattie infettive nelle prime fasi della malattia;

■ possibile valutazione quantitativa dei risultati della ricerca( come un virus o batteri contenuti nel materiale);

■ alta sensibilità del metodo;ad esempio, la sensibilità della PCR per rilevare HBV DNA virale nel sangue è 0,001 pg / ml( circa 4h102 copie / ml), mentre la sensibilità di un metodo di ibridazione DNA usando sonde ramificati - 2,1 pg / ml( circa 7h105 copie / ml).