Imunoenzimska analiza( EIA) - Uzroci, simptomi i liječenje. MFS.

imunosorbent testa( ELISA) - moderne laboratorijskog ispitivanja, u kojima je pretraživanje specifičan antitijela ili antigena u krvi na određene bolesti prepoznati ne samo etiologija, ali i u fazi bolesti. Rezultati ELISA mogu se dati kvalitativno i kvantitativno. Trenutno

EIA primjenjuje u sljedećim uvjetima: 1)

pretraživati ​​za specifična protutijela za infektivnih bolesti;
2) traži antigene svih bolesti( infektivne, veneralne);
3) pregled hormonskog stanja pacijenta;
4) ispitivanje onomarkera;
5) ispitivanje prisutnosti autoimunih bolesti. Prednosti

ELISA metoda:

1) visoka specifičnost i osjetljivost ELISA( preko 90%).
2) sposobnost da se odredi i praćenje dinamike proces bolesti, tj usporedbom količine antitijela u različitim vremenskim intervalima.
3) Dostupnost ELISA dijagnostike u bilo kojoj medicinskoj ustanovi. Relativna

Nedostatak:

1) Otkrivanje imunog odgovora( antitijela), ali ne i od patogena.

Koncepti

Prije pojasniti suštinu ELISA metodom, kratko je shvatiti neke pojmove.

antitijela( imunoglobulini ili - Ig) - specifični proteini proizvedeni B -
limfociti( imunološke stanice) kao odgovor na unos u tijelo infektivnog uzročnika( virusa, bakterija, gljivica itd,).Luče imunoglobulin A( IgA), imunoglobulin E( IgE), imunoglobulin M( IgM), imunoglobulin G( IgG), imunoglobulin D( IGD).Oni razlikuju jedan od drugoga i tvore molekularnu masu poluživota sudjelovanje / nonparticipation u infektivnog procesa detektirati vrijeme od vremena infekcije. Ako uzmemo u obzir molekularne težine, najviše on IgM - je pentametar( 950.000 Da), za razliku od ostatka Ig( 150-200 000 Da), pa IgM jednostavno ne mogu proći kroz placentu. Stoga je otkrivanje IgM u djece od 1 godine života je uvijek znak infekcije fetusa. Većina serumskih imunoglobulina predstavljen IgG( 75-85%), a najniža - IgE( 0,003%).Infektivni proces izravno uključeni samo da IgA, M, G. IgE su znak alergijskih reakcija i uvjeta, i IgD - može se otkriti tek u limfnom čvoru i tonzila tkiva, igra važnu ulogu u oblikovanju lokalnog imuniteta.

klasa imunoglobulina

Antigeni - visoke molekulske mase organskih tvari, posebno su infektivni patogeni i druge bolesti, kao i različite tvari modificirane stanice se proizvode u određenom bolesti( autoimune bolesti, raka).

imuni kompleks - antigen-antitijelo koji su uključeni u imunološkom procesu. Koja se temelji IFA metoda?

Nekoliko različitih ELISA sorte( izravne, blokiranje metoda natjecateljima), ali u praksi se najčešće koriste heterogenu enzimski imunološki test ili ELISA( enzimski vezanog imunosorbentnog ispitivanja)

temelju imunoanalize imunog odgovora antigen i protutijela kako bi se dobilo imunološki kompleks: antigendvostruko specifičnih antitijela, što rezultira promjenom enzimske aktivnosti specifičnih oznaka na površini antitijela. Postupak

ELISA

najjednostavnije ovaj proces se može podijeliti u nekoliko faza:

1) na površini ploče liječnik rupa, ispitivač je pročišćen antigen specifičnih bolesti. Prilikom dodavanja biološkog materijala( krv) u serumu za pacijenta specifične reakcije nastaje između antigena i željenog antitijela( imunoglobulina).Ovaj spoj će djelovati kao "poseban antigen" u sljedećoj fazi.

2) U ovoj fazi formiranja je IR( Imunološki kompleksi) - reakcijska između „specifičan antigen” i konjugata( za imunoglobulin obilježen s peroksidazom enzima).Dodan je poseban kromogen. Rezultat ove enzimske reakcije je formiranje obojenih tvari u jamice ploče, čiji je intenzitet boje ovisi o broju pacijenata imunoglobulina( antitijela) sadržanih u materijalu.

3) Nadalje tu Tumačenje: fotometrija pomoću višekanalnog spektrofotometar uspoređujući optičku gustoću ispitivanog materijala sa optičke gustoće od kontrolnih uzoraka, matematičke obrade rezultata. Količina protutijela u pacijenta ovisi o visini optičke gustoće u jažice.

uobičajena praksa za korištenje Ploče s 96 jažica.

količina( ili koncentracija) protutijela na određeni jedinici volumena kod mjerenja optičke gustoće( OD) od tekućine uzorka je izračunata.onda je rezultat u usporedbi s kontrolnim uzorkom.

treba imati na umu: za svaki ispitni sustav razvijen je uzeti u obzir rezultate pojedinačne izvedbe, standarda učinka i patologije( tj „referentna vrijednost”).To treba uzeti u obzir prilikom ocjenjivanja rezultata svake analize slučaja. Ispravno tumačenje rezultata laboratorijskih „vrijednosti” drugi laboratorij. Također je netočna usporediti rezultate iz različitih laboratorija zajedno. Prilikom postavljanja ELISA

reakcije i ima vrijednost takvog koncepta kao afinitetom antitijela. Avidnost
antitijelo - to protutijelo veže antigen snaga i količina antigena koji se nalazi u međusobnoj s immnoglobulinami( antitijela).Pohlepnost je od velike važnosti pri procjeni navodnu zarazu pojma, što je iznimno važno u dijagnostici primarne infekcije u trudnica. Osnova

stupnja afiniteta protutijela test se sastoji od liječenja imunog kompleksa( antigen-antitijelo) otopini uree kako bi se uništio proteina. Vysokoavidnye veze ostaju netaknuti i nisku sklonost uništen. Rezultat se navodi kao indeks sklonost, izražen kao postotak( %).

Koje bolesti se detektira ELISA dijagnostiku?1.

Infektivne bolesti
1,1 Virusni hepatitis A( IgM, G), B antigene -HBsAg, HBsAg, protutijela IgM - HBcorAg, Ig, ukupni HBcorAg IgG HBeAg), C( antitijela Ig M, G, D HCV)( IgM,G), E( Ig M, G) i drugi.
1.2 HIV infekcija( IgG)
1,3 infekcije citomegalovirusom( protutijela IgM, G)
1.4 Epstein-Barr infekcija ili mononkleoz( antitijela IgM, G EA, VCA, NA proteini virusa)
1,5 herpetične zaraze( protutijela IgM, G)
1,6 toksoplazmoza( antitijela IgM, G)
1,7 Rubeola( IgM, G)
1,8 Morbile( IgM, G), bruceloza( IgM, G), Pseudotuberculosis( IgM, G), SALMONELOZE( IgM, G), šigeloze i dizenterija(IgM, G), aspergiloza( IgM, G), krpeljnog encefalitis, borreliozu, i mnogi drugi.
1,9 parazitoze( giardijaza, toxocariasis, trihinoza, opistorhoz, ehinokokoza, alveococcosis i drugi) u kojoj je detektiran IgG
1,10 STD( spolno prenosivih bolesti kroz) - mikoplazmoza( IgM, G), Ureaplasmosis( IgM, G), Chlamydia( IgA, M, G), sifilis( IgG)
1.11 Helicobacter infekcija( IgG)

2. Oznake autoimune bolesti i indeksa humanih imunitet ( ukupni IgE, ukupno IgG, ukupni IgA, ukupno IgM, ukupno IgD, izlučeni IgA, IgG 2, IgG4, CRC cirkulira imuno komplekse, IgA i IgG antitijela na glutenski epitopi i ostalo)

3. Onkologichsekie markeri ( FNO - faktor nekroze tumora, CEA - karcinoembrionski antigen, PSA - prostata specifičnog antigena, hCG - humani korionski gonadotropin, CA 125, alveomutsin i mnogi drugi)

4. reproduktivni poremećaji I( estradiol, progesteron, prolaktin, testosteron, AFP AFP-FSH - folikul stimulirajući hormon i druge)

5. bolesti štitnjače ( slobodan i vezani T3, T4, tiroglobulin, štitnjače peroksidazu - TPO, tiroidni stimulirajući hormon - tTG).

Ovaj popis nipošto nije sve bolesti dijagnosticira pomoću ELISA.

materijal za ELISA analiza i pravilo ograda

najčešćih materijala za ELISA reakcije - pacijenta serumu, uzeti na prazan želudac. Materijal također može poslužiti kao likvora, amnionske tekućine staklastog sadržaja, sluz iz cervikalnog kanala i uretre briseva.

Priprema bolesnika za isporuku materijala za IFA

Krv se uzima na prazan želudac. Prije dostave krvi ne moraju poduzimati nikakve lijekove. Specifični tretman( antibakterijski, antivirusno, antiparazitno, i slično) mora se zaustaviti najmanje 2 tjedna prije ispitivanja.

proizvodnju IFA Datumi

Immunoassay enzima provodi se brzo tijekom dana. Kašnjenja mogu biti u različitim laboratorijima zbog nakupljanja određenog broja seruma. Mogući rezultati

ELISA dijagnostički

Prilikom procjene rezultata na određenu infekcije je važna klasa antitijela otkrivena i njihov broj. To utječe ne samo na pitanje o nastanku infekcije( tj to ili ne), no procjenjuje se stadij bolesti( akutne i kronične), kao i prisutnosti aktivne infekcije( akutna ili pogoršanja kroničnog) u vrijeme istraživanja.

Koji su približni pojmovi za pojavu protutijela( imunoglobulini-Ig)?

Najranija protutijela su IgM .Identificirati ih može biti 1-3 tjedna nakon moguće infekcije, koja karakterizira akutnu fazu zaraznog procesa. Druga situacija s pojavom IgM protutijela je aktivacija( ili pogoršanje) kroničnog procesa. Protutijela IgM cirkuliraju u prosjeku oko 3 mjeseca, tada njihov broj postupno nestaje. Međutim, kod nekih bolesnika, tragovi IgM mogu se otkriti u roku od 1-2 godine od vremena infekcije.

Suvremeni testni sustavi su vrlo osjetljivi, što rezultira nespecifičnim lažno pozitivnim rezultatima( često u trudnica).Stoga, u ovoj skupini pacijenata, treba provjeriti pozitivan IgM!

IgA antitijela se pojavljuju 2-4 tjedna nakon infekcije, ali u količini dovoljnoj za detekciju - u mjesec dana. Serum IgA sintetiziraju plazma stanice slezene, limfnih čvorova i mukozne sekretornih IgA koncentrira na sluznicu obavljati svoju funkciju - uključeni u lokalnoj imuniteta.

Od 4. tjedna nakon infekcije pojavljuju se antitijela IgG .U većini infekcija, njihov titar postupno povećava s maksimumom u različito vrijeme( prosječno nakon 1.5-2 mjeseca), tada titar ostaje na niskoj razini i ukazuje na imunitet. U nekim bolestima( mikoplazmoza, klamidija, Trihomonijaza) razina IgG nije visoka, znatno je smanjena zbog nedostatka imunosti u ovih infekcija. Izvedbe

detekcija antitijela različitih klasa:

- izoliranim IgM detekcijom antitijela pretpostavlja
primarne infekcije.
- Istovremena detekcija krvi IgM i IgG karakterističnim
primarne infekcije u prethodnim 2-3 mjeseci, kao i pogoršanje kronične bolesti. Stoga, u trudnoći, prisutnost IgM nije uvijek znak primarne infekcije.
- Detekcija izoliranog IgG može ukazivati ​​na imunitet na bolest,
i kroničnu infekciju. U drugoj situaciji, broj antitijela( titar) također je važan, a promjena u tom titru je u dinamici. Obično se studije provode u intervalima od 2-4-6 tjedana.
- Detekcija IgA izoliranog ili s IgM ukazuje na primarnu infekciju. S
, očekuje se da će nastup IgA zajedno s IgG aktivirati kroničnu infekciju( prosječno 2 tjedna od trenutka pogoršanja).

Definicija afiniteta IgG antitijela je odličan dodatak dijagnozi fazi primarne infekcije s dugogodišnjom infekcije koja ima svoje kliničko značenje, osobito pri procjeni rizika od intrauterine infekcije fetusa. Otkrivanje niskim stupnjem afiniteta IgG pokazuje primarne infekcije i identificira prosjeku nakon 4-6 mjeseci nakon infekcije, rijetko duže. IgG s niskim dozama zahtijeva druge laboratorijske dokaze primarne infekcije( IgM).Visoka antitijela su ili znak kronične bolesti i njenog pogoršanja ili formiranog imuniteta.

osobito u dojenčadi: u djece mlađe od jedne godine, a ponekad čak 1,5 godina u krvi cirkuliraju majčinska IgG protutijela na različite infekcije( tj, bilo je njihov prodor kroz placentu od majke na fetus u maternici).Nije sama po sebi znak infekcije u sadašnjosti. Ako u dobi od takjm otkriti IgM( podsjetiti da je majčinska IgM prolaze kroz placentu ne smiju), to je znak infekcije ili intrauterinog infekcije stečene nakon rođenja.

Kvantitativna ELISA metoda

ELISA rezultati dijagnostike( pomoću enzimske imunoanalitičke analizatora) izdaje u posebnim jedinicama:
- optička gustoća( OD) od uzorka - koncentracije specifičnog antitijela po jedinici volumena.Što je veći uzorak OP, to je veća koncentracija protutijela. Neki rezultati odnose se na koeficijent pozitivnosti( KP) - to je i optička gustoća uzorka.
- Jedinice koncentracije antitijela( nanogram / mililitar ili ng / ml).
- u titru serumskog: 1:20, 1:40, 1: 100, 1: 200, 1: 400, 1: 800, 1: 1200 i tako dalje. Dijagnostički titri( u kojima je dijagnosticirana bolest, a ne činjenica infekcije) za različite bolesti različiti su.
- u obliku simbola - "+", "-"( +, ++ +++, ++++)? "".
- u kvalitativnoj evaluaciji kriterij vrijednosti( pozitivne ili negativne).

Pravo je procijeniti broj antitijela, varijantu klasifikacije imunoglobulina, te stoga otkriti stadij bolesti i potrebu za liječenjem može obaviti samo liječnik.

ne treba zaboraviti da je njihova „referentna vrijednost”( realizacije norma), a iznad kojeg se određeni dijagnosticirana bolest( varijante patologiju) razvijen za svakog testnog sustava. Za različite testne sustave, "referentne vrijednosti" su različite.

Ispravan usporedbom rezultata ELISA, preuzeo vremena, moguće je samo u slučaju njihove proizvodnje u istom laboratoriju.

Infektivni liječnik Bykova N.I.