womensecr.com
  • Polymeraasiketjureaktio

    click fraud protection

    PCR - Viimeaikaiset edistysaskeleet molekyyligenetiikan, käytettiin monistamaan DNA ja voit nopeasti levittää in vitro

    erityisten DNA-pala( eli mikä tahansa kiinnostava geeni) on yli 200 000 kertaa. Reaktion suorittamiseksi riittää yhden solun DNA-materiaalin saanti;PCR: llä monistetun DNA: n määrä on niin suuri, että tämä DNA voidaan yksinkertaisesti värjätä( käyttämällä radioaktiivisia koettimia elektroforeesin jälkeen ei tarvita).Edellytyksenä PCR: n johtamiselle on monistetun DNA-alueen nukleotidisekvenssin tuntemus keinotekoisesti syntetisoitujen alukkeiden oikeaan valintaan.

    Tällä hetkellä PCR on prosessi, joka tapahtuu yhdessä putkessa ja joka koostuu toistuvista monistussykliä( kopiointi, kopio) spesifisten DNA-sekvenssien saamiseksi riittävän suuren määrän kopioita, jotka voidaan tunnistaa elektroforeesilla. Yksi tärkeimmistä komponenteista reaktion - "alukkeet" - synteettinen oligonukleoti-dy, joka koostuu 20-30 emästä täydentävä "Sites"( alueet) hehkutus( yhteys) on tunnistettavissa osan templaatti-DNA.

    instagram viewer

    PCR toimii automaattisesti ohjelmoitavassa termostaatissa - termosyklissä( thermocycler).Kolmivaiheinen sykli, joka saa aikaan templaatti-DNA: n tunnistettavan osan jäljennökset, toistetaan 30-50 kertaa termisen syklerin ennalta ohjelmoidun ohjelman mukaisesti. Ensimmäisessä jaksossa oligoaluketta hybridisoitua alkuperäinen templaatti-DNA, ja sen jälkeen( myöhemmissä sykliä) ja juuri syntetisoitu DNA-molekyylit kuin niiden kertymistä reaktioseoksessa. Jälkimmäisessä tapauksessa DNA-synteesi ei pääty johtuen lämpötilan muutoksia, ja päästyään DNA-polymeraasin monistettu vannogo rajaosion, joka määrittää koko juuri syntetisoidun DNA: n alueen sisällä yhden nukleotidin.

    Menetelmänä havaitsemiseksi DNA-molekyylien on saatu käyttäen elektroforeesia, jonka erotus tapahtuu Amplifi-materiaali koulutettujen kokoinen amplikonien( monistustuotteet).

    PCR: n avulla on mahdollista tutkia suoraan epäiltyjen mutaatioiden tai polymorfisten alueiden lokalisointipaikkoja ja myös tutkia DNA: n muiden erityisominaisuuksien läsnäoloa.