Immunoensüümide analüüs( EIA) - põhjused, sümptomid ja ravi. MF.

immunosorptsioonimeetodiga( ELISA) - kaasaegne laboratoorium uurimise, mille käigus otsitakse on spetsiifilised antikehad või antigeenid veres konkreetsete haiguste tuvastamiseks mitte ainult etioloogia vaid ka haiguse staadiumist. ELISA tulemusi saab anda kvalitatiivselt ja kvantitatiivselt.

Praegu EIA rakendatakse järgmistes olukordades:

1) päring spetsiifiliste antikehade ükskõik nakkushaiguse;
2) otsingut antigeenide tahes haigused( nakkushaigused, suguhaigused);
3) patsiendi hormonaalse seisundi uurimine;
4) onkomarkerite eksam;
5) autoimmuunhaiguste esinemise kontrollimine. Eelised

ELISA meetodil:

1) kõrge spetsiifilisus ja tundlikkus ELISA( üle 90%).
2) võime määramiseks ja seireks haigusprotsessi dünaamikat, st võrreldakse antikehade hulka erinevatel ajavahemikel.
3) ELISA diagnostika kättesaadavus ükskõik millises meditsiiniasutuses. Kuigivõrd

:

1) Detection immuunvastuse( antikehad), kuid mitte patogeeni.

Concepts

Enne selgitada sisuliselt ELISA-meetodi, lühidalt on mõista, mõned mõisted.

antikehad( või immunoglobuliinide - Ig) - spetsiifilisi valke toodetakse B -
lümfotsüüte( immuunrakud) vastuseks piiril kehasse nakkusliku patogeeniga( viirus, bakterid, seened, jne).Eritavad immunoglobuliin A( IgA), immunoglobuliin E( IgE), immunoglobuliin M( IgM), immunoglobuliin G( IgG), immunoglobuliin D( lgD).Nad erinevad üksteisest ning moodustavad molekulmassiga poolestusaeg osalemise / nonparticipation nakkus- protsesse, tuvastavad ajastust alates hetkest nakatuda. Kui vaatleme molekulmassiga, kõige ta IgM - on pentameerile( 950,000 Da), erinevalt ülejäänud Ig( 150-200 000 Da), nii IgM lihtsalt ei saa läbida platsentaarbarjääri. Seetõttu avastamine IgM laps 1 eluaastal on alati märk nakkuse lootele. Suurem osa seerumi immunoglobuliinide esindab IgG( 75-85%) ja madalaim - IgE( 0003%).Infektsiooniprotsess otseselt seotud arvestada ainult IgA, M, G. IgE on märk allergiliste reaktsioonide ja tingimustega ning lgD - saab tuvastada ainult lümfisõlme ja kurgumandlites, mängib rolli teket lokaalset immuunsust.

immunoglobuliinide klassidele

Antigeenid - kõrgmolekulaarsed orgaanilised ained, eriti nakkava patogeenide ja teiste haiguste, samuti erinevate ainete modifitseeritud rakkude toodetud teatud haiguse( autoimmuunhaigus, vähk).

Immuunkomplekside - antigeen-antikeha kaasatud immuunprotsessi. Mis põhineb IFA meetodil?

mitmest erinevast ELISA sordid( otsene, kaudne, blokeerides meetodi võistlejad), kuid praktikas Levinuim heterogeenne immunoensüümimeetod või ELISA( ensüümne immunosorbenttest)

Immuuntestides immuunvastuse antigeeni ja antikeha moodustamiseks immuunkompleksi: antigeenibispetsiifilisi antikehi, mille tulemusena muutus ensümaatiline aktiivsus spetsiifilise jäljed antikeha pinnale. Meetod

ELISA

kõige lihtsamalt öeldes, see protsess võib jagada mitmeks etapiks:

1) Pinnal arst auguga plaat, kontrollija on puhastatud antigeeni spetsiifiliste patogeenide. Lisades bioloogilise materjali( vereseerumis) patsiendi spetsiifilise reaktsiooni vahel toimub antigeeni ja antikeha soovitud( immunoglobuliin).See ühend toimib järgmises etapis "spetsiaalse antigeenina".

2) Praegusel moodustumine on IR( immuunkomplekse) - vaheline reaktsioon "spetsiifiline antigeen" ja konjugeeritud( see immunoglobuliin märgistati peroksüdaasi ensüümi).Lisatakse spetsiaalne kromogeen. Selle tulemuseks ensüümreaktsiooni on moodustamine värvitud ainete plaadi aukudele, värvi intensiivsus sõltub mitmeid patsiendile immunoglobuliinid( antikehad) sisalduv materjal.

3) avalduvad ka tõlgendamine: fotomeetriast lehe mitmekaelalisest spektrofotomeetriga võrreldakse optilist tihedust katsematerjalil optilise tiheduse kontrolliproovide matemaatilise töötlemise tulemusi. Antikeha kogus patsiendi sõltub kõrgusest optiline tihedus süvendeid.

tavaline praktika kasutada 96 süvendiga plaatidele.

koguses( või kontsentratsioon) antikehade konkreetses mahuühiku mõõtmisel optiline tihedus( OD) proovis vedelikku välja arvutada. Seejärel võrreldakse tulemust kontrollprooviga.

tuleb meeles pidada: iga katse arendatud arvestada üksikute toimivuse tulemused, tulemuslikkuse standardid ja patoloogia( st "kontrollväärtusest").Seda tuleb arvestada, kui tulemuste hindamise iga juhtum. Nõuetekohaselt tõlgendada tulemusi laboratoorium "kontrollväärtused" teises laboris. Samuti on vale võrrelda tulemusi erinevates laborites koos. Seadmisel

ELISA reaktsioonid ja omab väärtust nagu mõiste nagu antikeha aviidsuses. Aviidsus
antikeha - see antikeha antigeeni sidumise tugevust ja antigeeni kogus mugavalt tiheda seose immnoglobulinami( antikehad).Aviidsus on väga oluline, kui hinnatakse väidetava nakkuse mõiste, mis on äärmiselt oluline diagnoosi esmane infektsioon rasedatel.

Alus antikeha aviidsustesti koosneb raviks immuunkompleksi( antigeen-antikeha) karbamiidilahus et hävitada valku. Vysokoavidnye lingid jäävad puutumata, ja madala aviidsusega hävitatud. Tulemuseks on antud Aviidsuse indeks, mis on väljendatud protsendina( %).

Mis haigused avastatakse ELISA-diagnostika?

1. Nakkushaigused
1,1 viirushepatiit( IgM, G), B antigeenide -HBsAg, HBeAg, antikeha - IgM HBcorAg, Ig kõigi HBcorAg, IgG HBeAg), C( antikeha Ig M, G HCV), D( IgM,G), E( Ig M, G) ja teised.
1.2 HIV-nakkuse( IgG)
1,3 Tsütomegaloviirusinfektsioone( antikehad IgM, G)
1,4 Epstein-Barri nakkuse või mononkleoz( antikeha IgM, G EA, HLR, NA viirusvalku)
1,5 herpesnakkuste( antikeha IgM, G)
1,6 toksoplasmoosi( antikeha IgM, G)
1,7 punetised( IgM, G)
1,8 leetrite( IgM, G), brutselloosi( IgM, G), pseudotuberculosis'e( IgM, G), salmonelloos( IgM, G), Shigelloos või düsenteeriat(IgM, G), aspergilloosihaigetel( IgM, G), Puukentsefaliit, borrelioos, ja paljud teised.
1,9 parasitosis( giardiaas, toksokariaas, Trihhinoosi opistorhoz, echinococcosis, alveococcosis ja teised), milles tuvastati IgG
1,10 STD( sugulisel teel levivate haiguste kaudu) - mükoplasmoosi( IgM, G), Ureaplasmosis( IgM, G), klamüüdia( IgA, M, G), süüfilis( IgG)
1,11 Helicobacter nakkuse( IgG)

2. markerid autoimmuunhaigus ja inimese immuunsuse indeksite ( IgE, IgG, kokku IgA, kogu IgM, kokku IgD sekretoorne IgA, IgG 2IgG4, CRC ringleva immuunkomplekse, IgA ja IgG antikehad gliadiinivastased jt)

3. Onkologichsekie markerid ( FNAndmeid - tuumorinekroositeguri, CEA - kartsinoomembrüo antigeeni, PSA - prostata-spetsiifilise antigeeni, hCG - inimese kooriongonadotropiini, CA 125, alveomutsin ja paljud teised)

4. viljakushäired I( östradiool, progesteroon, prolaktiin, testosteroon, AFP AFP-FSH - folliikuleid stimuleeriv hormoon ja muud)

5. Haigused kilpnäärme( vaba ja seondunud T3, T4, türoglobuliin kilpnäärme peroksüdaasi - TPO, kilpnääret stimuleeriv hormoon - TTG).

See nimekiri ei ole kaugeltki kõik haigused on diagnoositud ELISA.

materjali ELISA analüüsi ja reeglina tara

kõige levinum materjal ELISA reaktsioonid - patsiendi seerumi, võtta tühja kõhuga. Materjali võib olla ka tserebrospinaalvedelik, lootevett, klaaskeha sisu, lima emakakaelakanalist ja kusiti niisutatud tampoonidega.

ettevalmistamine patsientidel kohaletoimetamise materjali IFA

Veri võtta tühja kõhuga. Enne kohale vere ei pea midagi narkootikume. Vastavat ravi( antibakteriaalne, viirusevastane, parasiitidevastane, ja nii edasi) tuleb lõpetada vähemalt 2 nädalat enne uuringut.

tootmise IFA Kuupäevad

immunoloogiline analüüs materjali hoitakse kiire päeva jooksul. Viivitused võivad olla erinevates laborites kogunemise tõttu teatud seerumite. Võimalikud tulemused

ELISA diagnostiline

hindamisel tulemusi konkreetse infektsiooni on oluline klassi antikehade tuvastatud ja nende arv. See ei puuduta mitte ainult küsimus etioloogias nakkuse( st seda või mitte), kuid hinnanguline haiguse staadiumist( akuutne ja krooniline), samuti juuresolekul aktiivse infektsiooniga( akuutne või ägenemine krooniline) ajal uuringu läbiviimiseks.

Millised on ligikaudsed ajastus antikehad( immunoglobuliinid - Ig)?

varaseim antikehad on IgM .Nad võivad selgitada läbi 1-3 nädalat pärast võimalike nakkuste mis iseloomustavad ägedas faasis infektsioon. Teine olukord on välimust IgM antikehad - aktiveerimist( või süvenemisega) krooniline protsess. IgM antikehad ringelda keskmiselt umbes 3 kuud, siis nende arv on tasapisi kaovad. Kuid mõnel patsiendil, jälgede IgM saab detekteerida 1-2 aastat pärast nakatumist.

kaasaegse test süsteemid on väga tundlik, nii et seal on mittespetsiifilised valepositiivseid tulemusi( sageli rasedad).Seetõttu on positiivne IgM selles patsientide rühmas tuleb kontrollitakse üle!

antikehad IgA ilmuvad 2-4 nädalat peale nakatumist, kuid piisavas koguses avastamiseks - kuus. Seerum IgA sünteesida Pplasmarakkusid põrna, lümfisõlmed ja limaskesta sekretoorsed IgA kontsentreeriti limaskestadel täita oma kaitsefunktsiooni - kaasatud lokaalset immuunsust.

4ndal nädalal pärast nakatamist ilmuvad antikeha IgG .Enamikus infektsioonide tiiter järjest suurenenud, kuid maksimaalselt erinevatel aegadel( keskmiselt 1,5-2 kuud), siis tiiter püsis madalal tasemel ning see näitab immuunsus. Mõnede haiguste( mükoplasmoos, klamüüdia, trihhomonoos) IgG tase ei ole kõrge, on oluliselt vähenenud tänu immuunsuse puudumise nendes infektsioonid. Teostuste

antikehade tuvastamise eri klassidesse:

- Eraldiseisvad IgM antikehade eeldab
esmanakkust.
- üheaegne veregruppide IgM ja IgG iseloomuliku
esmanakkust eelmises 2-3 kuud, samuti kroonilise haiguse ägenemise. Seetõttu juuresolekul IgM raseduse ei ole alati esimesi infektsioon.
- tuvastamine IgG isoleeritud ja võib osutada immuunsust haiguse
ja krooniline nakkus. Teisel juhul on kindlaks määratud ja antikeha kogus( tiiter) ja muutus dünaamika tiiter. Tüüpiliselt uuringud viidi läbi intervalliga 2-4-6 nädalat.
- IgA avastamis- eraldada või IgM näitavad esmanakkust. Kui
välimus IgG IgA eeldatakse aktiveerimist krooniline nakkus( keskmiselt 2 nädala jooksul alates ägenemise).

Definition Aviidsuse IgG antikehade on suurepärane täiendus diagnoosi etapi esmane nakkuse pikaajaline infektsioon, mis on oma kliinilist tähtsust, eriti kui hinnatakse riski emakasisene loote nakatumist. Avastamine madal Aviidsuse IgG näitab esmane infektsioon ja identifitseerib Keskmine pärast 4-6 kuud pärast nakatumist, harva kauem. Madal aviidsuses IgG nõua muud laboratoorselt tõestatud esmanakkust( IgM).Aviidselt antikehad on kas märk krooniliste haiguste ja ägedate või vormitud immuunsus.

eriti imikutel: lastel ühe aasta, ja mõnikord isegi 1,5 aastat veres ringlevate ema IgG antikehade erinevate infektsioonide( st seal oli nende levik läbi platsenta emalt emakasisese loote).See ei ole iseenesest märk olemasolu nakkuse olemasolu. Kui aastaselt takjm avastatud IgM( mäletate, et emade IgM platsentat ei saa), on see märk nakkuse või emakasisene nakatumine omandatud pärast sündi.

kvantitatiivne ELISA meetodil

ELISA diagnostilised tulemused( lehe immunoensüümimeetod analüsaator) väljastatakse spetsiaalsed üksused:
- optiline tihedus( OD) proovi - kontsentratsioon spetsiifilist antikeha mahuühiku. Mida suurem on OP proov, seda suurem on antikehade kontsentratsioon. Mõned tulemused näitavad tegur positiivsus( CP) - on ka optiline tihedus proovi.
- ühik antikeha kontsentratsioon( ng / ml või ng / ml).
- tiitri seerumis: 01:20, 01:40, 1: 100, 1: 200, 1: 400, 1: 800, 1: 1200 ja nii edasi. Diagnostika tiitrid( kus see on diagnoositud haigus, mitte asjaolu, nakkus) erinevateks haigusi.
- vormis sümbolid - "+", "-"( +, ++, +++, ++++) "?".
- Kvalitatiivse hindamise kriteerium väärtus( positiivne või negatiivne).

õigesti hinnata, kui palju antikeha variant immunoglobuliinide klassi kindlakstegemist ja järelikult paljastada haiguse staadiumist ja vajadus ainult arst saab ravida.

ei tohi unustada, et nende "kontrollväärtusest"( teostuste norm), millest ülalpool teatud diagnoositud haiguse( variandid patoloogia) välja töötatud ühtegi katset süsteemi. Erinevate katsesüsteemide puhul on "võrdlusväärtused" erinevad.

Õige võrrelda ELISA tulemused, üle võtnud aega, on võimalik ainult juhul, nende tootmise, sama laboratoorium.

nakkushaiguse arsti Bykov NI