Karyotüüpimine
Kromosoomide uurimiseks kasutatakse kõige sagedamini lühiajalisi verekultuuri preparaate, samuti luuüdirakke ja fibroblasti kultuure. Antikoagulandiga laborisse antav veri tsentrifuugitakse punavereliblede sadestamiseks ja leukotsüüte inkubeeritakse kultuurisöötmes 2-3 päeva. Vereproovile lisatakse fütohemag-glutiniini, kuna see kiirendab erütrotsüütide aglutinatsiooni ja stimuleerib lümfotsüütide jaotumist. Kromosoomide uurimiseks kõige sobivam faas on mitoosi metafaas, seetõttu kasutatakse lümfotsüütide jaotuse peatamiseks selles etapis kolhitsiini. Selle ravimi lisamine kultuurile suurendab metafaasi, st rakutsükli staadiumis olevate rakkude osakaalu, kui kromosoome on kõige paremini näha. Iga kromosoom dubleerib( toodab oma eksemplari) ja pärast sobivat värvumist on nähtav kahe tsentromeerse või keskmise kitsendusega kinnitatud kromatiidi kujul. Seejärel töödeldakse rakke hüpotoonilise naatriumkloriidi lahusega, fikseeritakse ja värvitakse.
Kromosoomide värvimiseks kasutatakse sagedamini Romanovski-Giemsa värvainet, 2% atseetaminomiini või 2% atsetatsariini. Nad kleepivad kromosoome terviklikult, ühtlaselt( tavaline meetod) ja neid saab kasutada inimese kromosoomide arvuliste anomaaliate tuvastamiseks.
Et saada üksikasjalik ülevaade kromosoomide struktuurist, individuaalsete kromosoomide või nende segmentide identifitseerimiseks( identifitseerimiseks), kasutatakse erinevaid diferentsiaalse värvimise meetodeid. Kõige sagedamini kasutatavad meetodid on Giemsa, samuti G- ja Q-painutamine. Kui mikroskoopiline prepa-
paikneb kromosoomi pikkusel, ilmneb värvitud( heterokromatiini) ja värvimata( euchromatin) ribade seeria. Sel viisil saadud püstjahutamise olemus võimaldab identifitseerida iga komplekti kuuluva kromosoomi, kuna triipude vaheldumine ja nende suurused on iga paari puhul rangelt individuaalsed ja konstantsed.
ratas kromosoomi pikkuses näitab värvitud( heterokromatiini) ja värvimata( euchromatini) ribade seeriat. Sel viisil saadud püstjahutamise olemus võimaldab identifitseerida iga komplekti kuuluva kromosoomi, kuna triipude vaheldumine ja nende suurused on iga paari puhul rangelt individuaalsed ja konstantsed.
Joon. Inimese kromosoomide skeemid koos
diferentsiaalse värvusega. Joon. Inimese kromosoomide skeemid koos individuaalsete rakkude
difraktogrammide metafaasist plaatidega on pildistatud.Üksikud kromosoomid lõigatakse fotodest ja asetatakse paberilehele;sellist kromosoomide pilti nimetatakse karüotüübiks.
Täiendav värvimine ja uued meetodid kromosoomsete ravimite saamiseks, mis võimaldavad kromosoomide venitamist pikendada, suurendavad märkimisväärselt tsütogeneetilise diagnostika täpsust.
Erinev nomenklatuur on välja töötatud inimese karüotüübi kirjeldamiseks. Mehe ja naise normaalne karüotüüp tähistatakse vastavalt 46, XY ja 46, XX.Downi sündroomi puhul, mida iseloomustab täiendava kromosoomi 21 olemasolu( trisomüü 21), kirjeldatakse naise karüotüüpi 47, XX 21 + ja mehed - 47, XY, 21+.Kromosoomi strukturaalse anomaalia esinemise korral on vaja näidata muudetud pikka või lühikest kätt: tähis p tähistab lühikest kätt, q pikk käsi ja t translokatsioon. Seega, kui kromosoomi 5 lühike käsi( "kassihirmu" sündroom) on eemaldatud, on naissoost karüotüüpi kirjeldatud kui 46, XX, 5p-.Tuleneva lapse ema Downi sündroom - 14/21 tasakaalustatud translokatsiooni kanduril on 45, XX, t( 14q; 21q) karüotüüp. Kromosoomi translokatsioon moodustub siis, kui kromosoomi 14 ja 21 pikad käed ühilduvad, lühikesed õlgad kaovad.
Iga õla jaguneb linnaosadeks ja need omakorda jagunevad, ning need ja teised tähistatakse araabia numbritega. Kromosoomi tsentromeer on regioonide ja segmentide loendamise alguspunkt.
Seega kasutatakse kromosoomide topograafias neli markerit: kromosoomide arv, õla sümbol, piirkonna number ja segmendi number antud piirkonnas. Näiteks salvestus 6p21.3 tähendab seda, et see on kuuenda paari kromosoom, selle lühike õlg, piirkond 21, segment 3. Täiendavad sümbolid, eriti pter - lühikese käe ots, qter - pika käe ots.
Tsütogeneetiline uurimismeetod võimaldab tuvastada ainult kromosoomide deletsioone ja muid muudatusi ligikaudu 1 miljoni aluse( nukleotiidid) suuruses.