Ανάλυση ανοσοενζύμων( EIA) - Αιτίες, συμπτώματα και θεραπεία.MF.

ανοσορροφητική δοκιμασία( ELISA) - σύγχρονη εργαστηριακή διερεύνηση, στη διάρκεια της οποίας η αναζήτηση είναι να είναι ειδικά αντισώματα ή αντιγόνα στο αίμα σε συγκεκριμένες ασθένειες να προσδιορίσει όχι μόνο αιτιολογία, αλλά επίσης το στάδιο της νόσου.Τα αποτελέσματα της μεθόδου ELISA μπορούν να δοθούν ποιοτικά και ποσοτικά.

Σήμερα ΕΠΕ εφαρμόζεται στις ακόλουθες περιπτώσεις:

1) Αναζήτηση για ειδικά αντισώματα με οποιαδήποτε μολυσματική νόσο?
2) αντιγόνα αναζήτηση μιας από τις ασθένειες( μολυσματικές ασθένειες, αφροδίσια νοσήματα)?
3) εξέταση της ορμονικής κατάστασης του ασθενούς.
4) εξέταση για επιθεωρητές ·
5) δοκιμές για την παρουσία των αυτοάνοσων νοσημάτων.Πλεονεκτήματα μέθοδος

ELISA:

1) υψηλή ειδικότητα και ευαισθησία της ELISA( πάνω από 90%).
2) Ικανότητα για τον προσδιορισμό και την παρακολούθηση της δυναμικής διαδικασίας της νόσου, δηλαδή συγκρίνοντας την ποσότητα των αντισωμάτων σε διαφορετικά χρονικά διαστήματα.
3) διαγνωστικές διαθεσιμότητα ELISA σε κάθε νοσηλευτικό ίδρυμα.Η σχετική

έλλειψη:

1) Ανίχνευση μιας ανοσολογικής απόκρισης( αντισώματα), αλλά όχι του παθογόνου.

Έννοιες

Πριν αποσαφηνίσει την ουσία της μεθόδου ELISA, είναι εν συντομία να κατανοήσουν κάποιες έννοιες.
Αντισώματα( ή ανοσοσφαιρίνες - Ig) - ειδικές πρωτεΐνες που παράγονται από τα Β -
λεμφοκύτταρα( κύτταρα του ανοσοποιητικού συστήματος) σε απόκριση προς την είσοδο στο σώμα ενός μολυσματικού παθογόνου( ιού, βακτήρια, μύκητες, κλπ).Εκκρίνουν ανοσοσφαιρίνη Α( IgA), ανοσοσφαιρίνη Ε( IgE), ανοσοσφαιρίνη Μ( IgM), ανοσοσφαιρίνη G( IgG), ανοσοσφαιρίνη D( IgD).Διαφέρουν μεταξύ τους και σχηματίζουν μια μοριακή μάζα ημιζωή συμμετοχή / μη συμμετοχής σε μολυσματικές διεργασίες, ανιχνεύουν την χρονισμού από τη στιγμή της μόλυνσης.Αν λάβουμε υπόψη το μοριακό βάρος, το πιο αυτός είναι IgM - είναι ένα πενταμερές( 950,000 Da), σε αντίθεση με το υπόλοιπο της Ig( από 150 σε 200 000 Da), έτσι IgM απλά δεν μπορεί να περάσει μέσα από το φραγμό του πλακούντα.Ως εκ τούτου, η ανίχνευση των IgM σε ένα παιδί 1 έτους ζωής είναι πάντα ένα σημάδι της μόλυνσης του εμβρύου.Το μεγαλύτερο μέρος των ανοσοσφαιρινών ορού αναπαρίσταται IgG( 75-85%), και το χαμηλότερο - IgE( 0,003%).Η μολυσματική διαδικασία που εμπλέκονται άμεσα λαμβάνοντας μόνο IgA, Μ, Ζ IgE είναι ένα σημάδι των αλλεργικών αντιδράσεων και καταστάσεων, και IgD - μπορεί να ανιχνευθεί μόνο στο λεμφαδένα και ιστού αμυγδαλής, παίζει ένα ρόλο στη διαμόρφωση της τοπικής ανοσίας.

κατηγορίες ανοσοσφαιρινών

Αντιγόνων - υψηλού μοριακού βάρους οργανικές ουσίες, ιδίως λοιμώδη παθογόνα και άλλες ασθένειες, καθώς επίσης και διαφορετικές ουσίες τροποποιημένα κύτταρα που παράγονται σε μία δεδομένη νόσο( αυτοάνοση νόσος, καρκίνος).

ανοσοποιητικού συμπλόκου - η αντιγόνου-αντισώματος που εμπλέκονται στην ανοσολογική διαδικασία.Τι βασίζεται η μέθοδος IFA;

Αρκετές διακριτές ποικιλίες ELISA( άμεσες, έμμεσες, μπλοκάροντας μέθοδος ανταγωνιστές), αλλά στην πράξη χρησιμοποιούνται συνηθέστερα ετερογενή ενζυμική ανοσοδοκιμασία ή ELISA( ενζυμική ανοσοπροσροφητική δοκιμασία) βάση

της ανοσοδοκιμασίας της ανοσοαπόκρισης του αντιγόνου και του αντισώματος για να σχηματιστεί ένα ανοσοσύμπλοκο: αντιγόνοδιειδικά αντισώματα, που οδηγεί σε μια αλλαγή της ενζυματικής δραστικότητας των ειδικών σημάδια στην επιφάνεια του αντισώματος.Η μέθοδος

ELISA

απλούστερους όρους, η διαδικασία αυτή μπορεί να διαιρεθεί σε διάφορες φάσεις:

1) Στην επιφάνεια της πλάκας γιατρού-οπών, ο εξεταστής είναι καθαρισμένο αντιγόνο ειδικό παθογόνο.Κατά την προσθήκη του βιολογικού υλικού( ορό του αίματος) ενός ασθενούς συγκεκριμένη αντίδραση λαμβάνει χώρα μεταξύ του αντιγόνου και του επιθυμητού αντισώματος( ανοσοσφαιρίνης).Αυτή η ένωση θα λειτουργήσει ως «ειδικό αντιγόνο» στο επόμενο στάδιο.

2) Σε αυτό το στάδιο του σχηματισμού είναι IR( ανοσοσυμπλέγματα) - η αντίδραση μεταξύ του «ειδικό αντιγόνο» και συζυγούς( επισημασμένο με ένζυμο υπεροξειδάση αυτό ανοσοσφαιρίνη).Προστίθεται ένα ειδικό χρωμογόνο.Το αποτέλεσμα αυτής της ενζυματικής αντίδρασης είναι ο σχηματισμός χρωματισμένων ουσιών στα φρεάτια της πλάκας, η ένταση του χρώματος των οποίων εξαρτάται από τον αριθμό των ανοσοσφαιρινών ασθενούς( αντισώματα) που περιέχεται στο υλικό.

3) στην περαιτέρω εκεί Ερμηνεία: φωτομετρία χρησιμοποιώντας ένα πολυκάναλο φασματοφωτόμετρο συγκρίνοντας την οπτική πυκνότητα του υλικού δοκιμής με μία οπτική πυκνότητα των δειγμάτων ελέγχου, μαθηματικά αποτελέσματα επεξεργασίας.Η ποσότητα του αντισώματος στον ασθενή εξαρτάται από το ύψος της οπτικής πυκνότητας των φρεατίων.

κοινή πρακτική να χρησιμοποιούν τις πλάκες 96 φρεατίων.

ποσότητα( ή συγκέντρωση) των αντισωμάτων σε μια συγκεκριμένη μονάδα όγκου κατά τη μέτρηση της οπτικής πυκνότητας( OD) του υγρού δείγματος υπολογίζεται.Το αποτέλεσμα συγκρίνεται κατόπιν με ένα δείγμα ελέγχου.

πρέπει να θυμόμαστε: για κάθε πειραματικό σύστημα που αναπτύχθηκε για να ληφθούν υπόψη τα αποτελέσματα των ατομικών επιδόσεων, τα πρότυπα απόδοσης και την παθολογία( π.χ. «τιμή αναφοράς»).Αυτό πρέπει να λαμβάνεται υπόψη κατά την αξιολόγηση των αποτελεσμάτων της κάθε μελέτης περίπτωσης.Σωστά ερμηνεύουν τα αποτελέσματα ενός εργαστηρίου «τιμές αναφοράς» άλλο εργαστήριο.Είναι επίσης λάθος να συγκρίνουν αποτελέσματα από διαφορετικά εργαστήρια μαζί.Κατά τον καθορισμό αντιδράσεις

ELISA και έχει μία τιμή τέτοια έννοια όπως απληστία αντίσωμα.Απληστία
αντισώματος - αυτό το αντίσωμα η δύναμη σύνδεσης αντιγόνου και η ποσότητα του αντιγόνου που βρίσκεται σε διαπλοκή με immnoglobulinami( αντισώματα).Απληστία έχει μεγάλη σημασία για την εκτίμηση της φερόμενη μόλυνση του όρου, η οποία είναι εξαιρετικά σημαντική για τη διάγνωση του πρωτοπαθούς λοίμωξης σε έγκυες γυναίκες.

Βάση δοκιμή απληστία αντίσωμα αποτελείται από θεραπεία του ανοσοσυμπλόκου( αντιγόνου-αντισώματος) διαλύματος ουρίας ώστε να καταστρέψει την πρωτεΐνη.Vysokoavidnye συνδέσεις παραμένουν άθικτα, και χαμηλή ισχύ καταστραφεί.Το αποτέλεσμα δίνεται ως ο δείκτης απληστία, που εκφράζεται ως ποσοστό( %).Οι

Τι ασθένειες ανιχνεύονται από ELISA-διάγνωση;

1. Μολυσματικές ασθένειες
1.1 ιογενή ηπατίτιδα Α( IgM, G), Β αντιγόνα-ΗΒδΑα, HBeAg, αντίσωμα - IgM HBcorAg, Ig συνολικό HBcorAg, IgG HBeAg), C( αντίσωμα Ig Μ, G HCV), D( IgM,G), Ε( Ig Μ, G) και άλλοι.
1.2 HIV λοίμωξη( IgG)
1.3 κυτταρομεγαλοϊό λοίμωξη( αντισώματα IgM, G)
1.4 Epstein-Barr μόλυνση ή mononkleoz( αντίσωμα IgM, G στην EA, VCA, NA πρωτεΐνες του ιού)
1,5 μολύνσεις από έρπη( αντίσωμα IgM, G)
1.6 Τοξοπλάσμωση( αντίσωμα IgM, G)
1.7 ερυθράς( IgM, G)
1.8 ιλαράς( IgM, G), Βρουκέλλωση( IgM, G), pseudotuberculosis( IgM, G), σαλμονέλωση( IgM, G), σιγκέλλωση ή δυσεντερία(IgM, G), ασπεργίλλωση( IgM, G), της μεταφερόμενης από κρότωνες εγκεφαλίτιδα, μπορρελίωσης, και πολλά άλλα.
1.9 παρασίτωσης( giardiasis, τοξοκαρίαση, τριχινίαση, opistorhoz, εχινοκοκκίαση, alveococcosis και άλλοι) στο οποίο το ανιχνεύεται IgG
1.10 STD( σεξουαλικά μεταδιδόμενων νοσημάτων μέσω) - μυκοπλάσμωσης( IgM, G), Ureaplasmosis( IgM, G), Chlamydia( IgA, Μ, G), Σύφιλη( IgG)
1.11 λοίμωξη Helicobacter( IgG)

2. δείκτες της αυτοάνοσης νόσου και της ανθρώπινης δείκτες ανοσία ( ολική IgE, ολική IgG, συνολικά IgA, συνολικά IgM, συνολικά IgD, εκκριτική IgA, IgG 2, IgG4, CRC κυκλοφορούντα ανοσοσυμπλέγματα, IgA και IgG αντισωμάτων σε γλιαδίνη και άλλοι)

3. δείκτες Onkologichsekie ( FNΣχετικά με - Ο παράγοντας νέκρωσης όγκου, CEA - καρκινοεμβρυονικό αντιγόνο, PSA - ειδικού προστατικού αντιγόνου, hCG - ανθρώπινη χοριακή γοναδοτροπίνη, CA 125, alveomutsin και πολλοί άλλοι)

4. αναπαραγωγικού διαταραχές Ι( οιστραδιόλη, προγεστερόνη, προλακτίνη, τεστοστερόνη, AFP AFP-FSH - ωοθυλακιοτρόπου ορμόνης και άλλων)

5. Ασθένειες θυρεοειδούς( ελεύθερου και δεσμευμένου Τ3, Τ4, θυροσφαιρίνη, θυρεοειδή υπεροξειδάση - TPO, ορμόνη διέγερσης του θυρεοειδούς - TTG).

Αυτός ο κατάλογος είναι με κανένα τρόπο όλες οι ασθένειες διαγνωστεί με ELISA.

υλικό για ELISA ανάλυση και τον κανόνα φράχτη

πιο κοινό υλικό για αντιδράσεις ELISA - ορό του ασθενούς, λαμβάνεται με άδειο στομάχι.Το υλικό μπορεί επίσης να χρησιμεύσει ως εγκεφαλονωτιαίο υγρό, αμνιακό υγρό, υαλώδες περιεχόμενα, βλέννα του αυλού του τραχήλου και της ουρήθρας μάκτρα.

Προετοιμασία ασθενών για την παράδοση του υλικού για IFA

Αίμα λαμβάνεται με άδειο στομάχι.Πριν από την παράδοση του αίματος δεν χρειάζεται να πάρετε οποιαδήποτε φάρμακα.Ειδική αγωγή( αντιβακτηριδιακή, αντι-ιική, αντιπαρασιτική, και ούτω καθεξής) πρέπει να σταματήσει τουλάχιστον 2 εβδομάδες πριν από την μελέτη.

κατασκευή IFA Ημερομηνίες

Ο ενζυμικός ανοσοπροσδιορισμός διεξάγεται γρήγορα, κατά τη διάρκεια της ημέρας.Οι καθυστερήσεις μπορεί να υπάρχουν σε διαφορετικά εργαστήρια λόγω της συσσώρευσης ορισμένου αριθμού ορών.Πιθανά αποτελέσματα

ELISA διαγνωστικά

Κατά την αξιολόγηση των αποτελεσμάτων σε μία συγκεκριμένη μόλυνση σημαντική τάξη αντισώματα ανιχνεύονται και ο αριθμός τους.Επηρεάζει όχι μόνο το ζήτημα της αιτιολογίας της λοίμωξης( δηλαδή είτε όχι), αλλά η εκτιμώμενη στάδιο της νόσου( οξεία και χρόνια), καθώς και η παρουσία ενεργού λοίμωξης( οξεία ή παρόξυνση της χρόνιας) κατά το χρόνο της έρευνας.

Ποιοι είναι οι κατά προσέγγιση όροι για την εμφάνιση αντισωμάτων( ανοσοσφαιρίνες-Ig);

Τα πρώτα αντισώματα είναι IgM .Η ταυτοποίησή τους μπορεί να είναι 1-3 εβδομάδες μετά την πιθανή μόλυνση, η οποία χαρακτηρίζει την οξεία φάση της μολυσματικής διαδικασίας.Η δεύτερη κατάσταση με την εμφάνιση αντισωμάτων IgM είναι η ενεργοποίηση( ή η έξαρση) της χρόνιας διαδικασίας.Τα αντισώματα IgM κυκλοφορούν κατά μέσο όρο περίπου 3 μήνες, κατόπιν ο αριθμός τους εξαφανίζεται σταδιακά.Ωστόσο, σε μερικούς ασθενείς, ίχνη IgM μπορούν να ανιχνευθούν εντός 1-2 ετών από τη στιγμή της μόλυνσης.

Τα σύγχρονα συστήματα δοκιμών είναι ιδιαίτερα ευαίσθητα, με αποτέλεσμα μη συγκεκριμένα ψευδώς θετικά αποτελέσματα( συχνά σε έγκυες γυναίκες).Συνεπώς, σε αυτή την ομάδα ασθενών, θα πρέπει να επανελέγχεται θετικό IgM!Τα αντισώματα

IgA εμφανίζονται 2-4 εβδομάδες μετά τη μόλυνση, αλλά σε ποσότητα επαρκή για ανίχνευση - σε ένα μήνα.Ορός IgA συντίθενται από τα κύτταρα του πλάσματος του σπλήνα, λεμφαδένες και βλεννογόνου εκκριτικής IgA συμπυκνώθηκε σε βλεννογόνους υμένες να εκτελεί προστατευτική λειτουργία του - που εμπλέκονται στην τοπική ανοσία.

Από την 4η εβδομάδα μετά τη μόλυνση αρχίζουν να εμφανίζονται τα αντισώματα IgG .Στις περισσότερες μολύνσεις τίτλος αυξάνεται σταδιακά, με μέγιστο σε διαφορετικούς χρόνους( κατά μέσο όρο 1,5-2 μήνες), τότε ο τίτλος παρέμεινε σε χαμηλά επίπεδα και δείχνει ανοσία.Σε μερικές ασθένειες( μυκοπλάσμωση, χλαμύδια, οι τριχομονάδες) επίπεδο IgG δεν είναι υψηλό, μειώνεται σημαντικά λόγω της έλλειψης ανοσίας σε αυτές τις λοιμώξεις.ανίχνευση Ενσωματώσεις

των αντισωμάτων των διαφορετικών κατηγοριών:

- Απομονωμένα ανίχνευση αντισωμάτων IgM προϋποθέτει
πρωτογενή μόλυνση.
- Ταυτόχρονη ανίχνευση των IgM και IgG στο αίμα χαρακτηριστική
πρωτογενή μόλυνση στα προηγούμενα 2-3 μήνες, καθώς και η επιδείνωση της χρόνιας νόσου.Επομένως, κατά την εγκυμοσύνη, η παρουσία IgM δεν είναι πάντα ένα σημάδι πρωτογενούς λοίμωξης.
- Η ανίχνευση απομονωμένης IgG μπορεί να υποδηλώνει τόσο ανοσία στην ασθένεια,
όσο και χρόνια μόλυνση.Στη δεύτερη περίπτωση, ο αριθμός των αντισωμάτων( τίτλος) είναι επίσης σημαντικός και η αλλαγή σε αυτόν τον τίτλο είναι δυναμική.Συνήθως, οι μελέτες διεξάγονται σε διαστήματα 2-4-6 εβδομάδων.
- Η ανίχνευση της απομονωμένης IgA ή με IgM υποδεικνύει μια πρωτογενή μόλυνση.Με το
, η εμφάνιση της IgA μαζί με την IgG αναμένεται να ενεργοποιήσει τη χρόνια λοίμωξη( κατά μέσο όρο 2 εβδομάδες από τον χρόνο της επιδείνωσης).IgG αντισώματα

Ορισμός απληστία είναι ένα εξαιρετικό συμπλήρωμα στο στάδιο διάγνωση του πρωτοπαθούς λοίμωξης από τον μακροχρόνιο λοίμωξη που έχει κλινική σημασία της, ειδικά κατά την αξιολόγηση του κινδύνου ενδομητρικής λοίμωξης του εμβρύου.Η ανίχνευση IgG χαμηλής ποιότητας υποδηλώνει πρωτογενή μόλυνση και ανιχνεύεται κατά μέσο όρο 4-6 μήνες μετά τη μόλυνση, λιγότερο συχνά περισσότερο.Η IgG χαμηλής δόσης απαιτεί άλλες εργαστηριακές ενδείξεις πρωτοπαθούς λοίμωξης( IgM).Τα υψηλά αντισώματα είναι είτε ένα σημάδι μιας χρόνιας ασθένειας και της επιδείνωσής της, είτε μιας σχηματισμένης ανοσίας.

ιδιαίτερα σε βρέφη: σε παιδιά ηλικίας κάτω του ενός έτους, και μερικές φορές ακόμη και 1,5 χρόνια στο αίμα που κυκλοφορεί μητρικά IgG αντισώματα σε διάφορες λοιμώξεις( δηλαδή, δεν υπήρχε η διείσδυσή τους μέσω του πλακούντα από τη μητέρα στο έμβρυο στη μήτρα).Δεν είναι από μόνη της ένδειξη μόλυνσης στο παρόν.Αν στην ηλικία των takjm ανιχνεύθηκε IgM( υπενθυμίζουμε ότι η μητρική IgM διασχίσει τον πλακούντα δεν μπορεί), είναι ένα σημάδι της μόλυνσης ή ενδομήτρια λοίμωξη που αποκτήθηκε μετά τη γέννηση.

Ποσοτική μέθοδος ELISA

ELISA διαγνωστικά αποτελέσματα( χρησιμοποιώντας ένζυμο αναλυτή ανοσοπροσδιορισμού) εκδίδεται σε ειδικές μονάδες:
- Η οπτική πυκνότητα( OD) του δείγματος - τη συγκέντρωση του ειδικού αντισώματος ανά μονάδα όγκου.Όσο υψηλότερο είναι το δείγμα OP, τόσο μεγαλύτερη είναι η συγκέντρωση αντισωμάτων.Ορισμένα αποτελέσματα αναφέρονται στον συντελεστή θετικότητας( KP) - αυτή είναι και η οπτική πυκνότητα του δείγματος.
- Μονάδες συγκέντρωσης αντισωμάτων( νανογραμμάρια / χιλιοστόλιτρο ή ng / ml).
- σε μια τίτλος ορού: 1:20, 1:40, 1: 100, 1: 200, 1: 400, 1: 800, 1: 1200 και ούτω καθεξής.Οι διαγνωστικοί τίτλοι( στους οποίους διαγιγνώσκεται η νόσος και όχι το γεγονός της μόλυνσης) για διαφορετικές ασθένειες είναι διαφορετικοί.
- με τη μορφή συμβόλων - "+", "-"( +, ++, +++, ++++) ";".
- Με τη μορφή ποιοτικής εκτίμησης βάσει συγκεκριμένου κριτηρίου( θετικό ή αρνητικό).

σωστά εκτιμηθεί η ποσότητα αντισώματος παραλλαγής ανοσοσφαιρίνες της ταυτοποίησης της κατηγορίας, και, κατά συνέπεια, εκθέτουν το στάδιο της ασθένειας και την ανάγκη για μόνο έναν γιατρό μπορεί να θεραπεύσει.

δεν πρέπει να ξεχνάμε ότι «τιμή αναφοράς» τους( υλοποιήσεις νόρμα), και πάνω από το οποίο ένα συγκεκριμένο διαγνωστεί ασθένεια( παραλλαγές παθολογία) που αναπτύχθηκε για κάθε σύστημα δοκιμής.Για διαφορετικά συστήματα δοκιμών, οι "τιμές αναφοράς" είναι διαφορετικές.

Η σωστή σύγκριση των αποτελεσμάτων της μεθόδου ELISA με δυναμική είναι δυνατή μόνο εάν κατασκευάζονται στο ίδιο εργαστήριο.

Ο γιατροί του μολύνσεως Bykova Ν.Ι.