Immunenzym-Analyse( EIA) - Ursachen, Symptome und Behandlung. MF.

Immuntest( ELISA) - moderne Laboruntersuchung, bei der die Suche auf bestimmte Krankheiten spezifische Antikörper oder Antigene im Blut ist nicht nur Ätiologie zu identifizieren, sondern auch das Stadium der Krankheit. Die Ergebnisse von ELISA können qualitativ und quantitativ angegeben werden.

Derzeit EIA wird in den folgenden Situationen angewendet:

1) Suche nach spezifischen Antikörpern gegen jede Infektionskrankheit;
2) Suche nach Antigenen aller Krankheiten( infektiös, venerisch);
3) Untersuchung des Hormonstatus des Patienten;
4) Untersuchung auf On-Markern;
5) Untersuchung auf das Vorhandensein von Autoimmunerkrankungen. Vorteile

ELISA-Methode:

1) eine hohe Spezifität und Sensitivität des ELISA( über 90%).
2) Die Fähigkeit, den Krankheitsprozess Dynamik zu bestimmen und zu überwachen, das heißt einen Vergleich der Menge an Antikörpern in verschiedenen Zeitintervallen.
3) Verfügbarkeit von ELISA-Diagnostika in jeder medizinischen Einrichtung. Der relative Mangel

:

1) den Nachweis einer Immunantwort( Antikörper), nicht aber des Erregers.

Konzepte

klären, bevor das Wesen des ELISA-Verfahrens, ist kurz einige Konzepte verstehen.
Antikörper( oder Immunglobulinen - Ig) - spezifisch durch B produzierten Proteine ​​-
Lymphozyten( Immunzellen) in Reaktion auf den Eintritt in den Körper eines infektiösen Pathogens( Virus, Bakterien, Pilze, etc.).Sezer Immunglobulin A( IgA), Immunglobulin E( IgE), Immunoglobulin M( IgM), Immunglobulin G( IgG), Immunglobulin D( IgD).Sie unterscheiden sich voneinander und einer Molekularmasse Halbwertszeit Beteiligung / Nichtteilnahme bei Infektionsprozessen bilden, erfassen den Zeitpunkt ab dem Zeitpunkt der Infektion. Wenn wir das Molekulargewicht betrachten, die er IgM - einen Pentamer ist( 950.000 Da), im Gegensatz zum Rest von Ig( 150-200 000 Da), so einfach IgM nicht durch die Plazentaschranke passieren. Daher ist der Nachweis von IgM bei einem 1-jährigen Baby immer ein Zeichen einer Infektion im Fötus. Der Großteil des Serum Immunglobuline IgG( 75-85%) dargestellt wird, und die niedrigste - IgE( 0,003%).Der Infektionsprozess beteiligte direkt nur IgA, M, G. IgE ist ein Zeichen von allergischen Reaktionen und Bedingungen, und IgD unter - nur in den Lymphknoten und Tonsillen Geweben detektiert wird, spielt eine Rolle bei der Bildung der lokalen Immunität.

Klassen von Immunglobulinen

Antigene - hochmolekulare organische Substanzen, insbesondere infektiösen Krankheitserregern und anderen Krankheiten, sowie verschiedene Substanzen modifiziert in einer gegebenen Krankheit erzeugten Zellen( Autoimmunerkrankungen, Krebs).

Der Immunkomplex ist ein Antigen-Antikörper-Komplex, der am Immunprozess beteiligt ist. Worauf basiert die IFA-Methode?

Mehrere unterschiedliche ELISA Sorten( direkt, indirekt, blockierende Methode Wettbewerber), aber in der Praxis am häufigsten heterogenen Enzymimmuntest oder ELISA( enzyme linked immunosorbent assay)

Basis von Immunoassay der Immunantwort des Antigens und Antikörper verwendet, um einen Immunkomplex zu bilden: Antigen-Antikörper, der zu einer Veränderung der enzymatischen Aktivität spezifischer Markierungen auf der Oberfläche von Antikörpern führt. Das Verfahren

ELISA

einfache Worte ausgedrückt, kann dieser Prozess in mehrere Stufen unterteilt werden:

1) auf der Oberfläche des Rakellochplatte ist der Prüfer gereinigte Antigene spezifische Pathogen. Wenn das biologische Material Zugabe( Blutserum) eines Patienten spezifische Reaktion zwischen dem Antigen und dem gewünschten Antikörper( Immunglobulin).Diese Verbindung wird in der nächsten Stufe als "spezielles Antigen" wirken.

2) In diesem Stadium der Bildung ist IR( Immunkomplexe) - die Reaktion zwischen dem „spezifischen Antigen“ und Konjugat( das Immunglobulin mit Peroxidase-Enzyme markiert).Ein spezielles Chromogen wird hinzugefügt. Das Ergebnis dieser enzymatischen Reaktion ist die Bildung von farbigen Substanzen in den Vertiefungen der Platte, die Farbintensität, die in dem Material enthalten ist von der Anzahl der Patienten Immunglobuline( Antikörper) abhängt.

3) Weiterhin gibt Interpretation: Photometrie unter Verwendung eines Mehrkanal-Spektralphotometer die optische Dichte des Testmaterials mit einer optischen Dichte von Kontrollproben, mathematischer Verarbeitungsergebnisse vergleichen. Die Menge an Antikörpern in dem Patienten ist abhängig von der Höhe der optischen Dichte des Wells.

übliche Praxis, die 96-Well-Platten zu verwenden.

Menge( oder Konzentration) von Antikörpern in einer bestimmten Volumeneinheit bei Messung der optischen Dichte( OD) der Probenflüssigkeit wird berechnet. Das Ergebnis wird dann mit einer Kontrollprobe verglichen.

muss daran erinnert werden: für jedes Testsystem unter Berücksichtigung der individuellen Leistungsergebnisse nehmen entwickelt, Leistungsstandards und Pathologie( dh „Referenzwert“).Dies sollte berücksichtigt werden, wenn die Ergebnisse der einzelnen Fallstudie zu bewerten.die Ergebnisse einer Labor „Referenzwerte“ ein anderes Labor richtig interpretieren. Es ist auch nicht richtig zusammen ergibt sich aus verschiedenen Labors zu vergleichen. Bei der Einstellung

ELISA Reaktionen und hat einen Wert solches Konzept als Antikörperavidität. Avidity
Antikörper - dieser Antikörper die Antigenbindungsstärke und die Menge des in Wechselbeziehung befindet Antigens mit immnoglobulinami( Antikörper).Avidität ist von großer Bedeutung, wenn die angeblichen Infektion des Begriffs der Beurteilung, die bei der Diagnose einer Primärinfektion bei schwangeren Frauen sind extrem wichtig.

Basis Antikörperavidität Test besteht aus der Behandlung von Immunkomplexen( Antigen-Antikörper) Harnstofflösung, um das Protein zu zerstören. Vysokoavidnye Links bleiben intakt und niedrige Avidität zerstört. Das Ergebnis wird als Aviditätsindex gegeben, ausgedrückt in Prozent( %).

Was Krankheiten werden durch ELISA-Diagnose erkannt?

1. Infektionskrankheiten
1.1 Viral Hepatitis A( IgM, G), Antigene B -HBsAg, HBeAg, Antikörper - IgM HBcorAg, Ig Gesamt HBcorAg, IgG HBeAg), C( Antikörper Ig M, G HCV), D( IgM,G), E( Ig M, G) und andere.
1.2 HIV-Infektion( IgG)
1.3 Cytomegalovirus-Infektion( Antikörper IgM, G)
1.4 Epstein-Barr-Infektion oder mononkleoz( Antikörper IgM, G an EA, VCA, NA-Proteine ​​des Virus)
1,5 Herpesinfektionen( Antikörper IgM, G)
1.6 Toxoplasmose( Antikörper IgM, G)
1,7 Rubella( IgM, G)
1,8 Measles( IgM, G), Brucellose( IgM, G), pseudotuberculosis( IgM, G), Salmonellose( IgM, G), Shigellose oder Ruhr(IgM, G), Aspergillose( IgM, G), FSME, Borreliose, und viele andere.
1,9 Parasitosen( Giardiasis, Toxocariasis, Trichinose, opistorhoz, Echinokokkose, alveococcosis und andere), in dem der detektierte IgG
1,10 STD( sexuell übertragbare Krankheiten durch) - Mycoplasmose( IgM, G), Ureaplasmosis( IgM, G), Chlamydia( IgA, M, G), Syphilis( IgG)
1,11 Helicobacter-Infektion( IgG)

2. Marker von Autoimmunerkrankungen und menschlichen Immunitäts Indizes ( Gesamt-IgE, Gesamt-IgG, Gesamt-IgA, Gesamt-IgM, Gesamt-IgD, sekretorisches IgA, IgG 2Zirkulieren, IgG4, CRC Immunkomplexe, IgA und IgG-Antikörper gegen Gliadin und andere)

3. Onkologichsekie Marker ( FNÜber - Tumor-Nekrose-Faktor, CEA - carcinoembryonales Antigen, PSA - Prostata-spezifisches Antigen, hCG - humanes Choriongonadotropin, CA 125, alveomutsin und viele andere)

4. Reproduktionsstörungen I( Estradiol, Progesteron, Prolaktin, Testosteron, AFP AFPFSH - Follikel-stimulierendes Hormon und andere)

5. Diseases Schilddrüse( freie und gebundene T3, T4, Thyroglobulin, Thyroid-Peroxidase - TPO, Schilddrüsen-stimulierendes Hormon, - TTG).

Diese Liste ist bei weitem nicht alle Krankheiten, die durch ELISA diagnostiziert.

Material für ELISA-Analyse und Regel Zaun

am häufigsten verwendeten Material für ELISA Reaktionen - ein Patientenserum, auf nüchternen Magen eingenommen wird. Das Material kann auch als Cerebrospinalflüssigkeit, Amnionflüssigkeit, glasartige Inhalte, Schleim der Zervikalkanals und Harnröhrenabstriche dienen.

Vorbereitung der Patienten für die Abgabe von Material für IFA

Blut wird auf nüchternen Magen eingenommen. Vor der Auslieferung von Blut braucht keine Drogen zu nehmen. Eine spezifische Behandlung( antibakterielle, antivirale, antiparasitäre, usw.) müssen mindestens 2 Wochen vor der Studie gestoppt werden.

Herstellung IFA Termine

Der Enzymimmunoassay wird am Tag schnell durchgeführt. Verzögerungen können in verschiedenen Labors aufgrund der Ansammlung einer bestimmten Anzahl von Seren auftreten.

Mögliche Ergebnisse der ELISA-Diagnostik

Bei der Beurteilung der Ergebnisse für spezifische Infektionen ist die Klasse der nachgewiesenen Antikörper und ihre Anzahl wichtig. Es wirkt sich nicht nur die Frage nach der Ursache der Infektion( dh es oder nicht), aber die geschätzte Stadium der Erkrankung( akute und chronische), sowie das Vorhandensein einer aktiven Infektion( akut oder Exazerbation einer chronischen) zum Zeitpunkt der Erhebung.

Wie lauten die ungefähren Bedingungen für das Auftreten von Antikörpern( Immunglobuline-Ig)?

Die frühesten Antikörper sind IgM .Identifizieren sie können 1-3 Wochen nach einer möglichen Infektion, die die akute Phase des infektiösen Prozesses charakterisiert. Die zweite Situation mit dem Auftreten von IgM-Antikörpern ist die Aktivierung( oder Exazerbation) des chronischen Prozesses. IgM-Antikörper zirkulieren im Durchschnitt etwa 3 Monate, dann verschwindet ihre Anzahl allmählich. Bei einigen Patienten können jedoch Spuren von IgM innerhalb von 1-2 Jahren nach dem Zeitpunkt der Infektion nachgewiesen werden.

Moderne Testsysteme sind hochsensibel und führen zu unspezifischen falsch positiven Ergebnissen( oft bei Schwangeren).Daher sollte in dieser Patientengruppe das positive IgM erneut überprüft werden!

IgA-Antikörper erscheinen 2-4 Wochen nach der Infektion, aber in einer Menge, die für den Nachweis ausreicht - in einem Monat. Serum IgA durch Plasmazellen der Milz synthetisierte, Lymphknoten und Schleimhaut-sekretorischen auf Schleimhäuten konzentriert IgA seine Schutzfunktion zu erfüllen - in lokaler Immunität beteiligt.

Ab der 4. Woche nach der Infektion beginnen -Antikörper IgG zu erscheinen. In den meisten Infektionen Titer allmählich gesteigert wird, mit einem Maximum zu unterschiedlichen Zeiten( durchschnittlich 1,5-2 Monate), dann blieb der Titer auf einem niedrigen Niveau und zeigt Immunität. Bei einigen Krankheiten( Mycoplasmosis, Chlamydien, Trichomonaden) IgG-Spiegel ist nicht hoch, signifikant reduziert wird aufgrund des Fehlens der Immunität in dieser Infektionen. Ausführungsform

Nachweis von Antikörpern verschiedener Klassen:

- Isolierte IgM-Antikörper-Nachweis setzt
Erstinfektion.
- gleichzeitiger Nachweis von IgG und IgM Blut charakteristischen
Erstinfektion in den vorherigen 2-3 Monaten sowie Exazerbation einer chronischen Krankheit. Daher ist das Vorhandensein von IgM in der Schwangerschaft nicht immer ein Zeichen für eine Primärinfektion.
- Nachweis von isoliertem IgG kann sowohl Immunität gegen die Krankheit,
als auch chronische Infektion anzeigen. In der zweiten Situation ist auch die Anzahl der Antikörper( Titer) wichtig, und die Veränderung dieses Titer ist in der Dynamik. Normalerweise werden Studien in Intervallen von 2-4-6 Wochen durchgeführt.
- Der Nachweis von isoliertem IgA oder IgM weist auf eine Primärinfektion hin. Mit
wird erwartet, dass das Auftreten von IgA zusammen mit IgG eine chronische Infektion auslösen kann( durchschnittlich 2 Wochen ab dem Zeitpunkt der Exazerbation).

Definition Avidität IgG-Antikörper ist eine hervorragende Ergänzung zu der Diagnose Stufe der Primärinfektion von der langjährigen Infektion, die ihre klinische Bedeutung hat, vor allem, wenn das Risiko einer intrauterinen Infektion des Fötus zu bewerten. Der Nachweis von niedriggradigem IgG weist auf eine Primärinfektion hin und wird im Durchschnitt 4-6 Monate nach der Infektion weniger häufig nachgewiesen. Niedrig dosiertes IgG erfordert andere Labornachweise für eine Primärinfektion( IgM).High-Antikörper sind entweder ein Zeichen für eine chronische Erkrankung und deren Verschlimmerung oder für eine gebildete Immunität.

besonders bei Säuglingen: bei Kindern unter einem Jahr, und manchmal sogar 1,5 Jahren im Blut mütterlichen IgG-Antikörper gegen verschiedene Infektionen zirkulierenden( dh war es ihr Eindringen durch die Plazenta von der Mutter in utero die Feten).Es ist an sich kein Zeichen einer Infektion in der Gegenwart. Wenn im Alter von takjm IgM nachgewiesen( man erinnere mich, dass mütterlicher IgM die Plazenta passieren kann), ist es ein Zeichen einer Infektion oder intrauterine Infektion nach der Geburt erworben.

Quantitative ELISA-Methode

Das Ergebnis der ELISA-Diagnostik( mit Hilfe eines Enzymimmunoassays) ist in bestimmten Einheiten angegeben:
- Optische Dichte( OP) der Probe ist die Konzentration spezifischer Antikörper pro Volumeneinheit. Je höher die OP-Probe, desto höher ist die Antikörperkonzentration. Einige Ergebnisse beziehen sich auf den Positivitätskoeffizienten( KP) - dies ist auch die optische Dichte der Probe.
- Einheiten der Antikörperkonzentration( Nanogramm / Milliliter oder ng / ml).
- In Form von Serum Titern: 1:20, 1:40, 1: 100, 1: 200, 1: 400, 1: 800, 1: 1200 und so weiter. Diagnostische Titer( in denen die Krankheit diagnostiziert wird, und nicht die Tatsache der Infektion) für verschiedene Krankheiten sind unterschiedlich.
- In Form von Symbolen - "+", "-", "?"( +, ++, +++, ++++).
- In Form einer qualitativen Bewertung anhand eines bestimmten Kriteriums( positiv oder negativ).

Es ist richtig, die Anzahl der Antikörper, die Variante des Klassennachweises von Immunglobulinen abzuschätzen und folglich das Stadium der Krankheit und die Notwendigkeit einer Behandlung nur durch einen Arzt zu untersuchen.

Es sollte nicht vergessen werden, dass für jedes Testsystem ihre "Referenzwerte"( Varianten der Norm) entwickelt werden, wenn diese überschritten werden, und diese oder jene Krankheit diagnostiziert wird( pathologische Varianten).Für verschiedene Testsysteme sind die "Referenzwerte" unterschiedlich.

Ein korrekter Vergleich der ELISA-Ergebnisse in der Dynamik ist nur möglich, wenn sie im selben Labor hergestellt werden.

Arzt infektsionist Bykova N.I.